Nombre de la práctica: Práctica No.

de Páginas de
Centrifugación páginas la
Diferencial 8
Realizó: Revisó:
Jorge Luis Copado Romero
Michelle Aylín Guerrero Ángeles
Cristopher Brayan Jaimes Gómez
Fernando Omar Mendieta González
Jessica Jazmín Silva Tovar
Fecha de realización: Fecha de entrega Fecha de revisión:
23 de octubre de 2018 30 de octubre de
2018

CONTENIDO Página

I. INTRODUCCIÓN
II. OBJETIVO
III. METODOLOGÍA
III.1. Material y equipo.
III.2. Reactivos y soluciones.
III.3. Procedimiento.
IV. RESULTADOS
V. DISCUSIÓN
VI. CONCLUSIONES
VII. BIBLIOGRAFÍA

I.INTRODUCCIÓN

La separación centrífuga es desde hace más de un siglo una de las operaciones unitarias
más importantes en procesos claves de las industrias químicas, farmacéuticas, tratamiento
de efluentes, purificación de aceites combustibles y lubricantes y suspensiones en general.
En el campo de la tecnología de la separación mecánica las separadoras y decantadoras
se catalogan dentro de las centrifugadoras, se emplean para la concentración de sólidos,
clarificación de suspensiones y separación de mezclas de líquidos con eliminación
simultánea de sólidos. Esencialmente la centrifugación es una decantación selectiva de los
componentes insolubles de una mezcla bajo condiciones de gravedad artificial.

El principio de separación por centrifugación diferencial se basa en las diferentes

velocidades de sedimentación de las partículas. En el caso de homogenizados biológicos
las diferentes articulas celulares suelen ser separadas por centrifugación diferencial. Es el
proceso que tiene como resultado la obtención de un sobrenadante y un material
sedimentado.
Adicionalmente pueden emplearse fundamento de sedimentación combinados, como el
caso de la centrifugación mediante un gradiente de densidades.
 Este tipo de centrifugación es un proceso mediante el cual las partículas se distribuyen en
fracciones de diferentes densidades de un fluido líquido. El método es un poco más
elaborado que la centrifugación diferencial, no obstante, presenta ventajas que compensan
el trabajo añadido. La técnica permite la separación de varios o todos los componentes de
la muestra y la realización de medidas analíticas. El método de gradiente de densidades
implica la utilización de un soporte fluido cuya densidad aumenta desde la zona superior a
la inferior. El gradiente se consigue con un soluto preferiblemente de baja masa molecular,
de tal manera que la muestra a analizar pueda ser suspendida en la solución resultante.
Como solutos se utilizan la sacarosa, polisacáridos sintéticos, derivados yodados del ácido
benzoico, o sales de metales alcalinos pesados como el rubidio o el cesio, entre otros. La
muestra se deposita en la parte superior del gradiente como una fina banda y, tras
centrifugar, la separación de los componentes de la muestra se presenta como diferentes
bandas o zonas que pueden ser separadas (o fraccionadas).
El objetivo de la metodología consiste en obtener separación de diferentes sólidos
presentes en muestras de alimentos. Lo anterior se realizará con centrifugación en un
gradiente de densidad de sacarosa. Esta práctica ha sido modificada para los alumnos del
área de ingeniería de alimentos pues generalmente se usa en el área de Biología Molecular.

II.OBJETIVO:

III. METODOLOGIA:

IV. RESULTADOS:
Se prepararon 4 soluciones de
sacarosa con diferentes
concentraciones peso/ volumen (20%,
40%, 60% y 80%) y se tiñeron con
colores naranja, azul, amarillo y verde,
respectivamente (Figura 1) para
formar un gradiente en un tubo falcon
como se observa en la figura 2.

Figura 1. Soluciones a diferentes

concentraciones w/v de sacarosa. De izquierda
a derecha: 20%, 40%, 60% y 80%
 Figura 2. Figura 3. Figura 4.
Gradiente Gradiente Sedimento de
diferencial diferencial partículas
posterior a la sólidas del
centrifugación agua de
horchata

Se depositaron 4ml de nuestra muestra (agua de horchata) en la última capa del

gradiente y se centrifugó a 4000rpm durante 11 minutos.

Posterior a la centrifugación, en la Figura 3 y 4 se observan las diversas bandas en el

tubo falcon con el gradiente diferencial, las cuales contienen las partículas sólidas de
nuestra muestra y el sedimento de aquellas más pesadas, que en este caso, son
partículas de arroz y canela molidas (de acuerdo a la receta con la que se elaboró el
agua de horchata).

Cuando se coloca una pequeña cantidad de la disolución con las moléculas que se
quieren caracterizar sobre la superficie de un gradiente de densidad previamente
formado a lo largo de un tubo de centrifugación, en la superficie siempre hay una
densidad menor que la existente en la parte superior del gradiente y cuando se
centrifuga el tubo las moléculas de la capa superior sedimentan a través del gradiente.
Si todas ellas tienen el mismo coeficiente de sedimentación sedimentarán en una
estrecha franja, sin embargo, si hay moléculas con distintos coeficientes de
sedimentación, se separaran unas de otras a medida que se produzca la centrifugación
y finalmente los diferentes componentes se resolverán en una serie de zonas o bandas
(Griffith).

La velocidad de avance de las partículas (y, por tanto, el mecanismo de la

separación) depende de su tamaño, forma y densidad; todos estos parámetros se combinan
en el coeficiente de sedimentación, que se mide en unidades svedberg (1 S =
10−13 segundos) (Biomodel)

Coeficiente de sedimentación = s =velocidad de sedimentación / aceleración centrífuga

El gradiente de densidad se crea mediante un gradiente de concentración. La sacarosa

posee propiedades para ser un ideal medio para la formación de gradiente y es el más
utilizado en la centrifugación zonal. Este material tiene aplicación en el fraccionamiento de
organelos celulares y virus. La razón de su gran utilidad es su comportamiento inerte ante
la presencia del material biológico, su bajo costo y su naturaleza estable. Debido a su gran
uso, se han caracterizado las propiedades de la sacarosa y de sus soluciones con respecto
a sus relaciones de concentración y viscosidad, densidad e índice de refracción en un gran
rango de temperaturas, y es posible encontrar las descripciones de los gradientes
disponibles y condiciones de centrifugación para la separación de un gran tipo de muestras
biológicas (Griffith).

V. DISCUSIÓN:

VI. CONCLUSIONES:

VII. BIBLIOGRAFIA:

Anguerell I., Casamitjana N., Caubet A., et. Al., 2017. Centrifugación. Operaciones Básicas
en el laboratorio de química. Universitat de Barcelona. Disponible en:
http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/centrifugacio.html. Consultado el 29 de octubre
de 2018.
Biomodel. Centrifugación. [En línea]. Disponible en:
http://biomodel.uah.es/tecnicas/centrif/inicio.htm. Consultado el 29 de octubre de 2018.
Griffith, O. M., Techniques of Preparative, Zonal, and Continuous Flow Ultracentrifugation.
Beckman Instruments