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UNIVERSIDAD NACIONAL DEL CENTRO DEL PERÚ

FACULTAD DE AGRONOMÍA

Departamento Académico de Cultivos y Fitomejoramiento

Curso: Biotecnología Vegetal

Tema: Ingeniería Genética de Plantas

Docente: Ing. M. Sc. Emerson Clovis Carrasco Lozano


Ingeniería Genética de Plantas
Objetivos de la Biotecnología Vegetal
Mejoras agronómicas:

➢ Resistencia a plagas o enfermedades.


➢ Tolerancia a herbicidas.
➢ Tolerancia a sequía, salinidad, heladas, etc.
➢ Mayor rendimiento.

Los cultivos que actualmente se comercializan en el mundo


pertenecen a este grupo de mejoras: soya tolerante a glifosato,
maíz resistente a insectos, entre otros.
Mejores alimentos:
Obtención de moléculas
➢ Mayor contenido proteico, de azúcar o
vitaminas, industriales:
➢ Mayor composición de ácidos grasos más ➢ Producción de vacunas,
saludable.
➢ Medicamentos,
➢ Menor cantidad de alérgenos o toxinas. ➢ Bioplásticos,
➢ Entre otros compuestos de valor
En el mercado: industrial.
✓ Soya con alto contenido de ácido oleico
✓ Maíz rico en lisina.
En investigación:
✓ Arroz dorado (con beta caroteno)
✓ Soja con omega 3
✓ Papa con más proteínas
✓ Maní hipoalergénico, etc.
Plantas Transgénicas

Es aquella planta a la que por medio de la Tecnología del DNA


Recombinante, se le ha insertado a su genoma un fragmento de DNA
que codifica una característica adicional que anteriormente no tenia.
Métodos de transformación genética de plantas
Métodos Indirectos: Agrobacterium tumefasciens
Agrobacterium tumefasciens

Bacteria del suelo, Gran negativa, que


pertenece al Género Rhizobium,
Familia Rhizobiacea.

Patógeno que genera la enfermedad


“Agalla de la corona” en muchas
especies de plantas dicotiledóneas
Tumor induction by Agrobacterium tumefaciens (After Chilton 1983).

Acetosyringone (4-acetyl-
2,6-dimethoxyphenol) is
produced by N. tabacum
upon wounding, and
induces transfer of T-DNA
from Agrobacterium.
Ciclo de la enfermedad “Agalla de la corona” causada por
Agrobacterium tumefasciens
Disease tumor crown gall formed on different crops stem infected with
Agrobacterium tumefaciens.
The two major opines, octopine and nopaline, are found only
in crown gall tumors.

The genes required for their synthesis


are present in the T-DNA from
Agrobacterium tumefaciens.

The bacterium, but not the plant, can


utilize the opines as a nitrogen source.
Plásmido Ti (Tumor-
inducing), ~ 200kb
Transfer of T-DNA Resembles Bacterial Conjugation

T-DNA has almost identical repeats of 25 bp at each end in the Ti plasmid. The right repeat is necessary for transfer
and integration to a plant genome. T-DNA that is integrated in a plant genome has a precise junction that retains 1–2
bp of the right repeat, but the left junction varies and may be up to 100 bp short of the left repeat.
T-DNA is generated like a rolling circle

T-DNA is generated by
displacement when DNA
synthesis starts at a nick
made at the right repeat.
The reaction is
terminated by a nick at
the left repeat.
T – DNA (DNA transferido)

LB, RB: bordes izquierdo y derecho.


auxA (iaaM) + auxB (iaaH): genes que intervienen en la producción de
auxinas.
cyt: gen que intervienen en la producción de citoquininas.
Ocs: enzima Octopina sintasa, produce octopina.
T-DNAs encode genes involved in auxin biosynthesis
& sensitivity, and opine synthesis located between T-
DNA border regions

gene 5
LB gene 7 iaaH iaaM ipt ons tml ocs RB

A .tumefac
Scientists can replace iensgenes
these pT iA 6by
T -D N A genes and use
other
Agrobacterium to introduce 1317them
8 bp into transgenic plants.
iaaM=Tryptofano 2-
iaaH=Indol-3-acetamida
Monoxigenasa
hidrolasa
ipt = Isopenteniltransferasa

Isopenteniladenosina 5'-fosfato,
precursor de las citoquininas:
transzeatina y transribosilzeatina
Genes Vir
virA; transporta Acetocyringona (flavonoide) en la bacteria y activa la
expresión de virG.
virG; promueve la trascripción de otros genes vir (factor de transcripción).
virD2; endonucleasa/integrasa, corta el T-DNA y se une en el extremo 5‘ de
la cadena sencilla.
virE2; se une a la cadena sencilla del T-DNA y puede formar canales a través
de la membrana celular.
virE1; chaperona para virE2.
virD2 y virE2; poseen un dominio de NLS y lleva el T-DNA al núcleo de la
célula hospedera.
virB; lleva el T-DNA a través de la membrana bacterial.
Mecanismos moleculares de Agrobacterium t.
Plant proteins and subcellular structures important for Agrobacterium-mediated
transformation
Métodos Directos

Biobalística: bombardeo de partículas


Electroporación
Infiltración al vacío
Transformacion mediada por ultrasonido
Microinyección
Macroinyección
Biobalística
1000 psi
500 psi
Electroporación

Electric field distribution (E) inside an electroporator, showing the charge difference and the dipolar moments (μ)
for a cell exposed to (a) a low frequency (lf) and (b) a high frequency (hf) electric field.
Comparison of the most popular methods for genetic transformation of plants.

A.L. Rivera et al. / Physics of Life Reviews 9 (2012) 308–345


Vectores para transformación genética de plantas
Sistema Binario
Sistema Cointegrado
Vector Binario
pBI121
Vector Binario
pCambia
Vectores Binarios comúnmente utilizados
Construcciones génicas T-DNA

ssa: Gen de la albúmina de semillas de girasol, que interviene


en el incremento de Metionina.
Vector con el gen B.
thuringiensis (Bt)
Genes marcadores de selección
Genes reporteros
Etapas de la transformación genética de plantas
Transformación genética de Cebada
Transformación
genética del Pasto
varilla
Transformación genética de Algodón
Explantes usados para la obtención de transgénicas
Transgénicas
resistentes a
virus, a través del
silenciamiento
génico
Esquema general
del silenciamiento
génico viral
Producción de transgénicos en el mundo
Según el informe del ISAAA (Servicio para la Adquisición de Aplicaciones
Agrobiotecnológicas), en 2011 se sembraron en todo el mundo 160 millones de
hectáreas con cultivos transgénicos, un 8% (12 millones de hectáreas) más que
en 2010.

Los 1,7 millones de hectáreas de 1996 se han multiplicado por 94, hasta alcanzar
los 160 millones en 2011, dato que convierte a los cultivos transgénicos en la
tecnología que más rápida aceptación ha encontrado en la historia de la
agricultura moderna.

A nivel global, las 160 millones de hectáreas de cultivos transgénicos representan


un 11% de las 1.500 millones de hectáreas destinadas para siembra de cultivos
(James 2011).
Evolución de la superficie mundial con cultivos transgénicos
(ISAAA, 2011).
Países que produjeron cultivos transgénicos durante el 2011 (ISAAA, 2011).
Distribución por Cultivos (ISAAA, 2011).

Área global con cultivos transgénicos, por cultivo (sobre 160 millones de hectáreas).También se sembraron pequeñas áreas
de remolacha azucarera y alfalfa tolerantes a herbicidas, papaya y zapallo italiano resistentes a virus, álamo resistente a
insectos y papa sin amilosa para uso industrial. Fuente ISAAA 2011.
Distribución por característica (ISAAA, 2011).
Ejemplos de cultivos transgénicos resistentes a insectos disponibles comercialmente caso del maíz y el algodón:
A) larva de gusano dañando una mazorca de maíz;
B) comparación de maíz Bt (arriba) y maíz convencional (abajo) luego del ataque de insectos;
C) comparación de la contaminación con micotoxinas entre maíz Bt (izquierda) y maíz no Bt (derecha);
D) larva de gusano dañando una planta de algodón;
E) vista aérea de un campo de algodón dañado por insectos (derecha) y algodón transgénico resistente al ataque de esos insectos
(izquierda)
Ejemplos de cultivos transgénicos tolerantes a herbicidas disponibles comercialmente en la actualidad son: A) soja;
B) maíz;
C) algodón;
D) canola;
E) remolacha azucarera.

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