See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.

net/publication/257310255

Estimation of kinetic parameters of

Saccharomyces cerevisiae in batch
fermentation during different growth
conditions

DATASET · SEPTEMBER 2013

READS

4,787

2 AUTHORS, INCLUDING:

Miguel Alejandro Muñoz Flores

Universidad Tecnológica de Chile
2 PUBLICATIONS 0 CITATIONS

SEE PROFILE

Available from: Miguel Alejandro Muñoz Flores

Retrieved on: 10 March 2016
Publicado online el 28 de septiembre del 2013

Estimación de parámetros cinéticos de Saccharomyces cerevisiae en sistema de

fermentación Batch bajo distintas condiciones de crecimiento
Miguel Muñoz, Gustavo Catrilaf.
Laboratorio de Ingeniería en fermentaciones, Departamento de Ingeniería en Biotecnología, Área de
procesos agroindustriales. Universidad Tecnológica de Chile, Av. Vicuña Mackenna 3864 con Camino
Agrícola, Santiago, Chile.

Resumen. Durante el proceso de fermentación aerobia, se estudiaron los efectos de la temperatura,

pH, medio enriquecido, concentración de azúcares, limitación de oxígeno, en los parámetros de
crecimiento de la Saccharomyces cerevisiae en distintas condiciones de cultivo. Para evitar
comenzar con fase lag (>1h), se inició la fermentación con un cultivo previo al fermentador, por lo
que las levaduras comenzaron la fermentación tan solo una hora después de la inoculación. La
temperatura fue una de las variables más importantes, sin embargo, los efectos de las
concentraciones de azúcares y el pH fueron también significativos. Desde el comienzo de la
fermentación, se utilizó 37°C como temperatura óptima para estas levaduras, las cuales después de
3 horas fueron sometidas a un shock térmico, aumentando en 15°C por sobre la temperatura óptima,
llegando a los 52°C. Los principales resultados con respecto al shock térmico fueron la disminución
progresiva de la biomasa a los 20 minutos bajo shock térmico, quedando con una concentración de
biomasa de 2,1gL-1 después de 4,5horas de fermentación, y además, la determinación de azúcares,
confirmó una desaceleración en el consumo de éstos desde el comienzo del shock térmico,
quedando con una concentración de 0,182gL-1 una vez alcanzadas las 3 horas y 20 minutos de
fermentación. Adicionalmente, con estos datos, se pudo obtener parámetros cinéticos, tales como la
velocidad específica de crecimiento (0,188h-1) los cuales fueron de gran importancia para entender
el crecimiento de la Saccharomyces cerevisiae en el proceso de fermentación aerobia.

Palabras clave: fermentación aerobia, shock térmico, Saccharomyces cerevisiae, velocidad

específica de crecimiento (μ).

Abstract. During the aerobic fermentation process, the effects of temperature, pH, enriched media,
sugar concentrations, oxygen limitations, in the growth parameters of Saccharomyces cerevisiae
under different culture conditions were studied. To avoid starting with lag phase (>1h), the
fermentation started with a culture previous to the fermentator, thus the yeast started the
fermentation just one hour after the inoculation. The temperature was one of the most important
variables, however, the effects of the sugar concentrations and the pH were also significant. From
the begining of the fermentation, 37°C were used as optimal temperature for the yeast, which after 3
hours were under heat shock, increasing 15°C over the optimal temperature, reaching 52°C. The
main results with respect to the heat shock were the progressive decrease of the biomass at the 20
minutes under heat shock, with only 2,1gL-1 of biomass concentration left after 4,5 hours of
fermentation, and also, the sugar determination, confirmed a deceleration in the sugar consumptions
from the begining of the heat shock, with only 0,182gL-1 of concentration left once the 3 hours and
20 minutes of fermentation were reached. Additionally, with the obtained data, kinetic parameters
were obtained, such as the specific growth rate (0,188h-1) which were helpful to understand the
Saccharomyces cerevisiae growth in the aerobic fermentation process.

Key words: aerobic fermentation, heating shock, Saccharomyces cerevisiae, specific growth rate (μ)
Publicado online el 28 de septiembre del 2013
1 Introducción.
Para un cultivo de biomasa ya sea levadura o
bacterias se necesita un reactor o fermentador
la cual será la herramienta principal para la
producción de esta. Éste provee todas las
condiciones necesarias para el cultivo,
tales como agitación, regulación de
temperatura, suministro de oxígeno, entradas
para adición de nutrientes, control del pH, etc.
Estas diversas condiciones de crecimiento
fueron realizadas por distintos grupos en el
laboratorio, condiciones las cuales se pueden
encontrar los efectos de la temperatura, sub
óptima (o ambiente), temperatura crítica
(shock térmico), concentraciones de azúcares,
medios enriquecidos, limitación de oxígeno,
entre otros.
Por otra parte, cuando se habla de sistemas
de cultivo o, también, métodos de cultivo, se
hace referencia al modo de operar
el biorreactor, en este caso de cultivo en lote o
cultivo Batch. El cultivo Batch es el
crecimiento de microorganismos en un
volumen fijo de nutrientes que continuamente
es alterado hasta su agotamiento por el
crecimiento. Se realiza sin intercambio de
materia con los alrededores. Este sistema
ofrece como principal característica su
simpleza, tanto desde el punto de vista de
equipo necesario como de su operación. Al
mismo tiempo, esta modalidad de cultivo
presenta limitaciones, como la falta de control
sobre diversos parámetros del cultivo y el
hecho que las células se desarrollan en un
estado fisiológico poco definido y cambiante.
El cultivo que se desea realizar es de la
levadura Saccharomyces cerevisiae, la cual es
una de las más utilizadas en diversos procesos
de la industria alimenticia, como en las
fermentaciones del vino, en donde tiene un
fuerte papel en el efecto de la calidad y el
sabor final del producto (Arroyo-Lopez et al).
Este microorganismo es mesofilo, por lo que
crece a una temperatura entre 30 y 40 grados
Celsius, siendo la temperatura óptima 37
grados aproximadamente (Paul Held, et. al).
Se obtendrá la curva de crecimiento de
biomasa la cual se ocupa el método de peso
seco y turbidimetría para verificar este, se
medirá los azucares reductores con el método
de Miller o DNS y a través de las distintas
ecuaciones utilizadas para este tipo de cultivo,
se conocerán los distintos parámetros
cinéticos de esta levadura, como velocidad
especifica de crecimiento, rendimiento, etc.
Además de medir estos parámetros cinéticos,
se llevara la levadura a un aumento de
temperatura a 15°C sobre la temperatura
óptima, llegando a los 52°C y se observará el
comportamiento de esta, el tiempo estimado
en la cual se realizara en la tercera hora.
2 Objetivos
Objetivo general
- Conocer el efecto de diversas
condiciones de cultivo, tales como
temperatura, la concentración de
azucares, limitación de oxígeno, entre
otros, en la cinética de crecimiento de
Saccharomyces cerevisiae.
Objetivos específicos
- Establecer las condiciones de cultivo
que alterarán significativamente el
crecimiento de la S. cerevisiae.
- Realizar el cultivo en las condiciones
escogidas, verificando que solo un
parámetro o condición sea el que
tenga un efecto significativo en el
crecimiento.
- Obtención de los parámetros cinéticos
después de realizar los cultivos con las
condiciones escogidas.
Publicado online el 28 de septiembre del 2013

Materiales y métodos

Figura 1: Diagrama de flujo de la metodología experimental y analítica.

Figura 1: Se puede observar que después del inicio de la fermentación comienzan las metodologías analíticas de determinación de la
concentración de biomasa y de concentración de azúcares. Se decidió hacer toma de muestra cada 30 minutos y después del shock
térmico cada 10 minutos debido a la disponibilidad de laboratorio el día del práctico. El cultivo finalmente fue realizado en matraz
Erlenmeyer debido a que cuando se debió originalmente iniciar la fermentación se tuvieron problemas con el reactor.
Publicado online el 28 de septiembre del 2013
Metodologías
Experimental
Medición de parámetros en biorreactor
mediante software micro CU System.
pH:
Para la medición de pH primero es necesario
calibrar el electrodo propiamente tal, para ello
se debe ir al menú de “Calibration”, una vez
ahí se debe elegir modo manual (manually),
sumergir el electrodo en el buffer de pH 7.0,
esperar el aviso de que la medición se ha
llevado a cabo, y luego realizar el mismo
procedimiento con el buffer de pH 4.0 o 9.0
dependiendo del rango del proceso. Medir la
temperatura del buffer y hacer click en
TEMP. Ingresar la temperatura medida como
valor de referencia para la calibración y
confirmar con “ok”.
Temperatura:
Para el control de la temperatura, es necesario
dirigirse al menú de controlador (Controller)
hacer click en TEMP y digitar la temperatura
deseada, en este caso se utilizó una
temperatura de 37°C, considerada como
óptima, y luego de 52°C para el shock
térmico. Para habilitar el agua de
enfriamiento, se debe hacer click en “Therm
fill”, para que el suministro de agua fría pueda
llenar el ciclo del termostato.
Aireación-Oxígeno:
Para controlar la aireación y/o oxígeno, se
debe ir al menú de controlador (Controller) y
hacer click en pO2 controller. Ajustar el
porcentaje de O2 a utilizar, click en ok.
Agitación:
Para controlar el agitador, se debe ir al menú
de controlador (Controller) y hacer click en
STIRR Controller, ingresar un valor de rpm,
habilitar la velocidad de agitación en modo
automático y confirmar con ok.
Shock Térmico:
Consideraremos como shock térmico el
aumentar la temperatura por 15°C por sóbre la
temperatura óptima (37°C) para estimar los
parámetros cinéticos con crecimiento críptico.
Para ello se elevará la temperatura en el
momento en que la fase exponencial esté
llegando a su fin, o al menos se interrumpirá
esta. Por estimaciones bibliográficas, se
realizará el shock térmico cercano a las 3
horas de crecimiento.
Analítica
Determinación de turbidimetría
Este método se basa principalmente en
la medición de la cantidad de luz
dispersada o transmitida a través de un
cultivo bacteriano
Para la determinación de biomasa con el
método de turbidimetria, se sacaran muestra
del reactos cada 30 min, la cual se harán
diluciones de 1:9 (1 ml de muestra y 9 ml de
agua destilada), la cual se medira en el
espectrofotómetro a 640 nm.
Se realizara un blanco en la cual tendrá la
misma dilución, con 1 ml de medio de cultivo
y 9 ml de agua.
Peso seco
Curva de calibración
Para la obtención de biomasa, es necesario
realizar previamente una curva de calibración,
ésta será realizada por el grupo del cultivo
control.
La curva de calibración se realiza obteniendo
8 muestras del cultivo cada ciertos intervalos
Publicado online el 28 de septiembre del 2013
de tiempo, estas muestras de 12 ml cada una
se deben depositar 12 ml en un tubo Falcon,
los cuales deben ser refrigerados para su
posterior utilización. Al momento de obtener
el total de muestras, estas deben ser
descongelas y 2 ml deben ser medidos en el
espectrofotómetro para registrar su
absorbancia y los 10 ml restantes de cada
muestras deben ser destinados para obtención
de biomasa por seco.
Para obtención de biomasa por pes seco se
deben realizar los siguientes pasos:
1. Llevar los 8 tubos con muestra a la
centrifuga por 1 minuto a 5000 rpm
2. Luego retirar el sobrenadante y solo
dejar el pellet
3. Agregar a los tubos agua y re
suspender en un vortex
4. Realizar este procedimiento las veces
que sea necesario, generalmente se
realiza tres veces
5. Hacer recipientes de papel aluminio
(capachos), masar y rotular cada
recipiente
6. Volver a re-suspender y verter el
contenido en un capacho rotulado
7. Llevar los capachos a una estufa a 180
°C por 12 horas.
8. Trascurrido el tiempo retirar los
capachos e introducirlos en una
desecadora para prevenir que las
muestras absorban la humedad del
ambiente
9. Retirar un capacho de la desecadora y
llevarlo a balanza analítica
10. Registrar masa y restársela a la masa
del capacho rotulado previamente para
así obtener la masa final.
11. El resultado de masa final dividirlo
por el volumen de la muestra, para así
obtener la concentración de biomasa
final
12. Realizar el mismo procedimiento con
los recipientes restantes.
13. Construir un gráfico de concentración
versus absorbancia.
Determinación de Biomasa:
Para la obtención de biomasa es necesario
realizar el siguiente procedimiento:
1. tomar muestras del cultivo cada
ciertos intervalos de tiempo y
rotularlas de la siguiente forma
muestra 1, muestra 2, etc.
2. cada muestra debe ser llevada al
espectrofotómetro.
3. El espectrofotómetro debe contener
dos blancos, los cuales son dos
cubetas cada una con agua destilada
ubicadas una en el extremo superior y
la otra en el extremo inferior del
recipiente de lectura.
4. Tomar una cubeta limpia y sin rayas,
agregar aproximadamente 1 ml de la
muestra 1 y registrar su absorbancia.
5. Realizar el mismo procedimiento con
todas las muestras.
6. Llevar los valores registrados al
grafico construido con la curva de
calibración y obtener el valor de
biomasa para cada muestra.
Publicado online el 28 de septiembre del 2013
Determinación de biomasa por peso seco
Material:
 Muestra microbiológica.
 3 tubos Eppendorf (vol. 15 mL).
 3 pipetas (vol. 10 mL).
 3 propipetas.
 Agua destilada.
 Estufa.
 Centrífuga.
 Balanza analítica.
Procedimiento:
Tomar 10mL de la muestra inicial, o
problema, y llevarlos a un tubo Eppendorf
previamente masados. Estos tubos se llevan a
una centrífuga por un período de 10 minutos
con una velocidad de agitación de 4000 rpm.
Una vez finalizado el proceso de agitación, se
elimina el líquido sobrenadante y se rellena la
muestra con agua destilada hasta el volumen
inicial (10 mL), éste proceso se realiza por
triplicado. Una vez realizada la tercera
aforación se lleva el tubo a la estufa a una
temperatura de 105ºC por un período de 12
horas o hasta que la masa sea constante.
Luego de terminar el secado, se determina la
masa en una balanza analítica.
La biomasa se obtendrá con la siguiente
ecuación:
( )
( )
Esterilización previa del bioreactor
Materiales:
 Autoclave
 Bioreactor
Procedimiento:
 Previamente a la utilización del
Bioreactor para el proceso biológico,
es necesaria una esterilización del
equipo para evitar contaminaciones.
Para esto se debe disponer el reactor a
autoclavado por un período de 15
minutos y a una temperatura de
120°C.
Método de DNS
Elaboración del reactivo DNS:
Disolver 4g de NaOH en 250ml de agua
destilada ayudado por un agitador magnético
y calentamiento.
1. Disolver 75gr de tartrato de
sodio y potasio junto con el
NaOH.
2. Agregar 2,5grácido
dinitrosalisilico poco a poco en
baño termo regulado a 50°C.
3. Dejar disolver durante 30min o
hasta que no existan grumos.
4. Filtrar al vacío mediante
membrana.
Elaboración de la curva de calibración:
1. Preparar por duplicado
soluciones de glucosa anhidra
con las siguientes
concentraciones. 0,0 mg/l
(blanco), 0,2 mg/l, 0,4 mg/l,
0,6 mg/l, 0,8 mg/l y 1,0 mg/l.
2. Leer la absorbancia en espectro
fotómetro utilizando 540nm de
longitud de onda.
3. Graficar datos ABS vs
CONCENTRACION.
4. Agregar línea de tendencia
lineal y obtener la ecuación del
gráfico, Y=mX+b.
Publicado online el 28 de septiembre del 2013
Medición de un analito:
1. Tomar 2ml de muestra
problema utilizando una micro
pipeta.
2. Centrifugar por 3min a
3000rpm.
3. Colocar 1ml de la muestra en
matraces aforados de 50, 100 y
200 ml y aforar.
4. Se colocara 1ml de las
muestras anteriores en 3 tubos
de ensayo respectivamente.
5. Adicionar 3ml del reactivo
DNS a cada tubo
(procedimiento por triplicado).
6. Paralelamente se debe preparar
un blanco que llevara 1ml de
agua destilada y 3ml de DNS
7. Dejar calentar los tubos de
ensayo a analizar a 100°C por
5min y luego dejar enfriar.
8. Añadir 6ml de agua destilada a
cada tubo de ensayo.
9. Llevar a espectrofotómetro de
absorción molecular y medir a
540nm. (ajustar el auto cero
con el blanco preparado
anteriormente).
*De las 3 diluciones analizadas se optará por
la que este en el rango de absorbancia
establecido (0,200 – 0,800). El procedimiento
antes descrito se realizara sólo con la dilución
determinada (50 o 100 0 200 ml)
Materiales:
 2 Micropipetas de 1000 µl
 3 pipetas de 10 ml
 3 propipetas
 10 gotarios
 2 Tubos de en ensayo de 5 ml
 12 tubos de ensayo de 10 ml
 2 Vasos precipitados de 500 ml
 1 Matraz aforados de 50, 100 y 200 ml
 4 Cubetas de vidrio
 1 Mecheros
 1 Trípodes
 1 Centrifuga
 1 Espectrofotómetro UV – visible.
 1 caja de guantes talla s
 Parafilm
 2 picetas de agua destilada
 1 piceta de alcohol al 70 %
 1 termómetro
 2 gradillas
Manejo matemático:
Luego de obtener los resultados del espectro
fotómetro, estos se deben reemplazar en la
ecuación arrojada por la curva de calibración:
Y=mX+b ABS=A[X]+B[X]=(ABS-B)/A
Dónde:
 ABS: Absorbancia.
 A y B: constantes.
 [X]: Concentración.
Diseño del medio de cultivo
Formulación del medio de cultivo:
Se deben masar los diferentes componentes
del medio según la tabla con sus
componentes. Luego trasladar los nutrientes a
un matraz, adicionar agua destilada y aforar
hasta 1000mL. El matraz se lleva a
esterilización junto con las pipetas a través del
autoclave a 121°C y 1atm por 15 minutos.
Inocular con 10ml del cultivo de
Saccharomyces utilizando las pipetas
graduadas de 10ml previamente esterilizadas.
Para cálculo de velocidad especifica de
crecimiento
X=Xo*
5.8 = 3*
µ= 0.188 h-1
Publicado online el 28 de septiembre del 2013

Tiempo duplicación de la levadura S. Curva consumo de sustrato

cerevisiae. 0,370

Absorbancia (540 nm)

0,360
0,350
Td = ln 2/µ 0,340
0,330
Td = 3.68 horas 0,320
0,310
0,300
Tabla 1: Diseño de medio de cultivo, medio 6,8 7 7,2 7,4 7,6 7,8 8 8,2 8,4
definido. Concentración de azúcar (g/L)

fuente elemento gramos

C Glucosa 4,0381
N sulfato de amonio 1,1295 Gráfico 2. Curva concentración celular
Mg sulfato de magnesio 0,0944
Curva concentración Celular
K fosfato de potasio 0,2816 0,9
Ca cloruro de calcio 0,026

Absorbancia (540 nm)

0,8
Na cloruro de sodio 0,0335
0,7
Fe sulfato de fierro 0,038
0,6

0,5

Bibliográficamente la constante de saturación 0,4

(Ks) para la S. cerevisiae es de 25 mg/l
entonces podemos decir que la velocidad
especifica máxima de crecimiento (µmax) es
igual a la velocida especifica de crecimiento
(µ) , ya que al ser pequeño el ks de
saccharomyces cerevisiae µ se vuelve
prácticamente igual a µmax.
Discusiones
Discusiones de experimentos globales
La levadura fue expuesta a distintas tipos de
experiencias en las cuales se analizaran sus
resultados a través de gráficos de producción
de biomasa y consumo de sustrato.
Temperatura críptica
4,2416 4,6575 6,2947 6,6929 7,8699 5,9673 4,5159
Concentración celular (g/L)
En los gráficos 1 y 2, se logra apreciar que hay un
crecimiento de biomasa en la cual la levadura crece de
manera exponencial también, esta crece a temperatura de 35
°C, y al aumentar la temperatura a 50 °C (punto 5), hubo una
muerte térmica la cual se ve reflejado en los tres puntos
siguientes.
La célula consumió el sustrato sostenido en el
tiempo, y recién en los puntos 6 y 7 se puede
observar que esta se mantuvo en el tiempo,
esto probablemente significa que en el medio
ya no queda microorganismo existente.
Limitación de oxigeno
Gráfico 3. Consumo de sustrato con
limitación de oxígeno.

Gráfico 1. Curva consumo de sustrato

Publicado online el 28 de septiembre del 2013

En esta experiencia se eliminó la aireación a Este grafico muestra que al disminuir la

las 3 horas desde que se inició la temperatura a 21 °C, si bien la levadura no
fermentación, entonces se muestra que en el tuvo crecimiento exponencial notorio, fue
punto 180 que corresponde a las 3 horas, el aumentando en el tiempo.
sustrato permanece constante en el tiempo, lo
cual se puede concluir que la célula ya no Gráfico 7. Consumo de sustrato bajo
consume el sustrato ya que esta al no tener temperatura sub-óptima.
oxígeno, tuvo una muerte celular, por lo tanto
se puede confirmar que esta célula es
netamente aeróbica.

Medio enriquecido con extracto de levadura

Gráfico 4. Biomasa y sustrato en el tiempo.

El grafico de sustrato muestra un aumento en

En esta experiencia se logra apreciar con
exactitud la fase estacionaria, comparados con
otros resultados y un consumo de sustrato al
mismo tiempo, y esto puede confirmar que el
medio enriquecido ayuda a que el
microorganismos tenga un crecimiento
óptimo.
Temperatura sub óptima
los primeros puntos, y luego un consumo
constante, esto probablemente ocurrió por
mala manipulación operacional, o que la
levadura estaba creciendo de manera
inadecuada, ya que en el gráfico de biomasa
muestra un pequeño aumento de biomasa, lo
que no queda claro con exactitud si fue un
crecimiento real.
Medio enriquecido con extracto de levadura
Gráfico 8. Curva concentración celular
curva de de biomasa
0,08
0,07
Absorbancia (640 nm)

Gráfico 6. Biomasa con temperatura sub- 0,06

0,05
óptima. 0,04
0,03
0,02
0,01
0
3 4 5 6 7 8
concentracion celuar (g/l)

Los puntos 6 y 7 muestran una fase

estacionaria temprana, comparados con otros
crecimientos, esto probablemente ocurrió ya
que el medio que se ocupo fue uno
Publicado online el 28 de septiembre del 2013

enriquecido, esto también pudo haber momento es de 15 °C superior al optimo

favorecido al obtener mayores (35°C), llegando a alcanzar los 50 °C
concentraciones de biomasa.
Gráfico 10. Analisis de azucares reductores
Discusión Shock Térmico. con shock térmico.

Una vez comenzado el shock térmico, se pudo

apreciar que la concentración de biomasa Consumo de sustrato
seguía aumentando aún por sobre los 37°C, 1

Concentración [g/L]
esto es debido a que la Saccharomyces 0,8
cerevisiae posee un mecanismo de respuesta 0,6
al shock térmico (heat shock response, HSR), 0,4
el cual le permite seguir creciendo incluso al 0,2
llegar a los 42°C (Kevin A. Morano et. al).
0
Esto es debido a que se libera un azúcar el 0 5 10
cual permite a las proteínas retener su Tiempo
conformación nativa a elevadas temperaturas
y suprimir la agregación de proteínas
El análisis realizado por medio de DNS,
denaturadas (Mike A. Singer & Susan
muestra el consumo celular de azúcar, este
Lindquist). De todas formas después de al
muestra un comportamiento normal de
menos 20 minutos creciendo bajo shock
consumo hasta el punto 5 (horas), donde en
térmico, al ascender la temperatura por sobre
ese momento se realiza el shock térmico, y
los 42°C y finalmente llegar a los 52°C se
muestra como del punto 5 hacia delante se
puede apreciar cómo es que disminuye
mantiene constante la curva en el tiempo, y
considerablemente la cantidad de biomasa, y a
esto se debe a que la celula ya no consume
su vez que el consumo de azucares deja de
este.
variar con el tiempo, confirmando la muerte
de gran parte de las levaduras.

Gráfico 9. Curva de crecimiento de biomasa

con shock térmico.

Curva biomasa
6

2 g/L

0
0 5 10 15

El grafico muestra un crecimiento

exponencial hasta el punto 9, la cual
corresponde al momento del shock térmico,
luego la curva comienza descender
abruptamente ya que la temperatura de ese
Publicado online el 28 de septiembre del 2013

Referencias:

1) Paul Held, Monitoring growth of Beer brewing strain of Saccharomyces cerevisiae. Citado
el 8 de septiembre del 2013. Disponible on-line en:
http://www.biotek.com/assets/tech_resources/SynergyH1_Yeast_Growth_App_Note.pdf
2) Kevin A. Morano, The response to heat shock and oxidative stress in Saccharomyces
cerevisiae. Citado el 9 de septiembre del 2013. Disponible on-line en:
http://www.genetics.org/content/190/4/1157.full
3) Mike A Singer & Susan Lindquist, Thermotolerance in Saccharomyces cerevisiae: The Yin
and Yang of trehalose. Citado el 12 de septiembre del 2013. Disponible on-line en:
http://www.cell.com/trends/biotechnology//retrieve/pii/S0167779998012517?_returnURL=h
ttp://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0167779998012517?showall=true
4) Arroyo-López, Effects of temperature, pH and sugar concentration on the growth parameters
of Saccharomyces cerevisiae, S. kudriavzevii and their interspecific hybrid. Citado el 15 de
septiembre del 2013. Disponible on-line en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/19246112
5) Arjun Singh. Genetic analysis of mutations affecting growth of saccharomyces cerevisiae at
los temperature. Citado el 21 de Septiembre del 2013. Disponible on-line en:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1213157/