Cuestionario y problemas de Cromatografía

I.- Responde de manera clara y concisa las siguientes preguntas:

1.- Defina qué es cromatografía.

2.- Explique para qué sirve la cromatografía flash.

3.- Complete el diagrama de clasificación de la cromatografía:

Cromatografía
4.- Colocar los nombres de cada una de las partes del HPLC

6.- Explique las características que debe tener una sustancia para poder ser utilizada como fase
móvil en HPLC y el tratamiento que hay que darle al solvente antes de ingresarlo al equipo.

7.- Explique la diferencia entre un flujo isocrático y un flujo en gradiente.

8.- Explique la diferencia entre fase normal y fase reversa y ponga un ejemplo de fase estacionaria y
fase móvil de cada una de ellas.

9.- Dibuje el diagrama de elección de un sistema cromatográfico.

10.- ¿Cuáles son las características de las bombas que se utilizan para HPLC y cuáles tipos de
bombas conoce?

11.- Explique cuál es la finalidad de inyectar un volumen mayor al loop.

12.- Explique cuál es la diferencia que existe entre las jeringas de HPLC y las de cromatografía de
gases.
13.- Explique cuál es la función del buzo y dónde se coloca:

14.- Explique por qué es importante filtrar las muestras con acrodiscos, qué tamaño de poro deben
de tener como mínimo y qué tipo de acrodisco utilizaría para un analito polar y para un analito no
polar.

15.- ¿Cuál es la función del horno y qué precauciones se deben tomar para no dañar la columna?

16.- Explique cuál es la función de la precolumna y sus características

17.- Explique la función y las características de las columnas de HPLC.

18.- Explique cuál es la diferencia entre una columna C8 y una C18. Cuál de ellas ocuparía para fase
normal y cuál para fase reversa.

19.- ¿Qué cambios haría en su columna para mejorar la resolución y disminuir el tiempo de análisis?

20.- ¿Cuáles son las características de un detector ideal?

21.- ¿Cuál es la principal característica que deben tener los analitos para ser analizados por HPLC?

22.- ¿Cuál es la principal característica que deben tener los analitos para ser analizados por CG?

23.- Explique los pasos para desarrollar un método analítico por HPLC
24.- ¿Cuáles son las características que deben tener los gases para CG y de 3 ejemplos de ellos:

25.- Explique para qué sirve la ecuación de Van Deeper y cuáles serían los criterios de aceptación
que ocuparía

26.- Explique las diferencias entre una columna capilar y una columna empacada

27.- ¿Cómo se clasifican las columnas capilares?

28.- Explique para qué sirve la función split/splitless

29.- ¿Para qué sirve derivatizar un analito?. De un ejemplo

30.- Explique la diferencia entre repetibilidad y reproducibilidad.

II.- Seleccione la respuesta correcta:

1.- Tipo de detector que se puede ocupar con sustancias que presenten dobles y triples enlaces:
Electroquímico b) Arreglo de diodos c) Indicé de refracción d) UV
2.- Detector que tiene dos compartimentos triangulares, uno donde pasa disolvente puro y en el
otro eluato. No se puede trabajar en gradiente. Para eliminar la radiación infrarroja se hace pasar
luz visible colimada en la celda.
Masas b) Arreglo de diodos c) Indicé de refracción d) UV
3.- Detector que utiliza cuadrupolos para separar la m/z:
Masas b) Arreglo de diodos c) Indicé de refracción d) UV
4.- Tipo de detector que se utiliza con analitos que se encuentran a muy bajos límites de detección
y que es una buena opción para identificar y cuantificar productos de degradación:
Masas b) Arreglo de diodos c) Electroquímico d) UV
5.- Tipo de detector que es sensible a compuestos que pueden oxidarse o reducirse como fenoles y
aminas:
a) Masas b) Arreglo de diodos c) Electroquímico d) UV
6.- Detector que registra el cambio de temperatura entre el gas de arrastre y la muestra,
convirtiéndola en una señal analítica:
a) Masas b) TCD c) FID d) NFD e) ECD
7.- Detector universal que responde a cualquier sustancia con carbonos orgánicos
a) Masas b) TCD c) FID d) NFD e) ECD
8.- Detector sensible a analitos con nitrógeno y fósforo:
a) Masas b) TCD c) FID d) NFD e) ECD
9.- Detector altamente selectivo a átomos electronegativos
a) Masas b) TCD c) FID d) NFD e) ECD
10.- Se le llama así al tiempo que tarda en salir un analito desde que fue inyectado hasta el punto
donde registra una señal analítica:
a) to b) tr´ c) tr d)to´
11.- Es la diferencia entre el tiempo de retención y el tiempo muerto.
a) to b) tr´ c) tr d)to´
12.- Es el tiempo en que sale la primera especie no retenida en una columna cromatográfica:
a) to b) tr´ c) tr d)to´
13.- Se le conoce así al volumen necesario de fase móvil para eluir un soluto:
a) Vo b) Vr c) uv d) ѵ lineal de flujo
14.- Indica la cantidad de eluyente que pasa por una columna por unidad de tiempo.
a) Vo b) Vr c) uv d) ѵ lineal de flujo
15.- Indica cuántos centímetros de columna recorre un disolvente por unidad de tiempo:
a) Vo b) Vr c) uv d) ѵ lineal de flujo

III.- Resuelva los siguientes problemas:

1.- Se inyecta en un HPLC una muestra de una bebida energética que contiene cafeína (C) y taurina
(T). La C tuvo un tr de 9.45 min y la T de 12 min. Si el tiempo muerto fue de 1.42 min.
a) Determinar el tiempo de retención ajustado de cada analito.
b) El factor de capacidad de cada analito
c) El factor de selectividad.
d) Calcular la resolución
e) Determinar el número de platos teóricos si Wc=9.2 s y Wt=12.1 s
f) Con base a los parámetros anteriores y a Tc=1.9 y Tt=1.2; diga cuáles valores están fuera de
especificación y por qué. En caso de estar fuera especificación, qué propone para corregirlos.
2.- Una columna cromatográfica de longitud de 30 cm y diámetro interior de 4.6 mm está
empaquetada con una fase estacionaria que ocupa el 65% del volumen. Si el flujo es de 1.5 mL/min.
a) Calcular la velocidad lineal de flujo
b) ¿Cuánto tiempo tarda el disolvente en atravesar la columna?
c) Determinar el tr si k´=5
3.- El metil-parabeno (MP) y el propil-parabeno (PP), se ocupan como conservadores en alimentos,
fármacos y cosméticos. Una mezcla conocida de MP y PP dio los siguientes resultados en HPLC:

Compuesto Concentración (mg/L) en la mezcla Área del pico (AU)

MP 1.03 1086
PP 1.16 4370

Se preparó una disolución mezclando 15 mg de PP y 10 mL de una muestra desconocida que

contenía sólo MP y diluyendo a 25 mL. Los picos observados de MP y de PP obtuvieron un área de
5970 y 6380, respectivamente. Hallar la concentración de MP (mg/L) en la muestra desconocida.
4.- Los resultados de una validación de un método analítico por HPLC se presentan a continuación,
llene los espacios en blanco y explique el porqué de aceptar o de rechazar estos resultados:

Tabla 1. Adecuabilidad del sistema

Inyección Área (AU)
1 1131.6
2 1134.1
3 1162.8
4 1132.9
5 1136.2
y=
∑y=
∑y^2=
S=
%CV=

Precisión del sistema

Dilución Área (AU)
I 10520
2 10462
3 10566
4 10568
5 10554
6 10498
n=
y=
S=
%CV=

Resultados de la linealidad del sistema

CONCENTRACIÓN ÁREA 1 ÁREA 2 ÁREA 3 MEDIA DESV STD %CV
(mg/L) (AU) (AU) (AU)

20 126199 123353 126481

40 242313 245262 239617

60 377014 377772 371279

80 534186 532145 540662

100 686654 676654 692126

Ecuación de la recta: R2 =