FUNDAMENTO DE PRUEBA DE BENEDICT

La reacción o prueba de Benedict es un método muy empleado para la identificación de

carbohidratos, esta reacción es específica para azúcares reductores (lactosa, glucosa, maltosa y
celobiosa). Es un método cualitativo que emplea reactivo Benedict, que al igual que el reactivo
de Fehling contiene ión cúprico Cu2+ (otorgado por el sulfato cúprico) el cual se reduce a ion
Cu1+ en medio alcalino caliente, esto por efecto del grupo aldehído del azúcar. El ion Cu1+ se
oxida y precipita en forma de Cu2O, lo que proporciona la coloración positiva de la reacción
generalmente rojo-naranja o rojo ladrillo. La coloración dependerá de la concentración de óxido
de cobre y esta a su vez de la reducción de cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo,
dependiendo de la coloración.

El reactivo de Benedict consta de: Sulfato cúprico, hidrato de sulfato de sodio o cloruro,
carbonato anhidro de sodio, además de ello emplea NaOH para alcalinizar el medio.

FUNDAMENTO DE LA PRUEBA O ENSAYO DE LUGOL

El reactivo de Lugol es una disolución compuesta por yodo y yoduro potásico, es una prueba
cualitativa que sirve para determinar si en una solución de azúcares no reductores (reacción
Fehling negativa) existen polisacáridos, particularmente el almidón (prueba lugol positiva). El
almidón es una mezcla de amilosa y amilopectina.

Cuando el almidón se pone en contacto con una gotas de lugol, toma un color azul violeta
característico (la amilosa se colorea de azul oscuro a negro y amilopetenida se colorea entre
naranja y amarillo). El almidón absorbe el yodo

Produciendo una coloración azul intensa (formación de un complejo de Ioduro de almidón), la

cual desaparece al calentar porque rompe la estructura que se ha producido, pero vuelve
aparecer al enfriar. Este ensayo es una reacción no química, en la que se forma un compuesto
de inclusión de yodo en el interior de las hélices de la amilosa, esta inclusión es reversible y esta
acondicionada por la temperatura

La amilasa es una enzima que ayuda a digerir los carbohidratos. Se produce en el páncreas y
en las glándulas salivales. Cuando el páncreas está enfermo o inflamado, se libera amilasa en
la sangre.
Se puede hacer un examen para medir el nivel de esta enzima en la sangre.
La amilasa también se puede medir con un examen de amilasa en la orina.
El rango normal es de 40 a 140 unidades por litro (U/L) o 0.38 a 1.42 microkat/L (µkat/L).
Nota: los rangos de los valores normales pueden variar ligeramente entre diferentes
laboratorios. Hable con su proveedor acerca del significado de los resultados específicos de
su examen.
Utilidad clínica: Se realiza principalmente para diagnosticar o controlar enfermedades del
páncreas e igualmente puede detectar algunos problemas del tubo digestivo
SIGNIFICADO CLINICO: La amilasa, denominada también amilasa salival, ptialina o tialina, es
un enzima que tiene la función de digerir el glucógeno y el almidón para formar azúcares
simples, se produce principalmente en las glándulas salivares (glándulas parótidas) y en el
páncreas.

9. CONCLUSIÓN
La amilasa degrada el almidón, según los factores y medios en donde se da la actividad
enzimática. A continuación detallamos su acción en diferentes medios y factores que
intervienen en la amilasa salival:

TUBO N° 1 El color de la muestra se torna de color azul intenso, se debe a que el almidón en
presencia del lugol se torna de color azul violeta. Entonces la pregunta es: ¿Por qué la amilasa
salival no degrado al almidón? RPTA: Porque la misma fue desnaturalizada por el H2SO4, por lo
tanto no se produjo la degradación del almidón. Concluimos que el pH óptimo para que la
amilasa realice su actividad enzimática, está dentro del rango 5-7, siendo de 6,5 para el alfa-
amilasa bacteriana y pancreática. La explicación es concreta: La amilasa fue desnaturalizada por
el medio ácido donde se encontraba.

TUBO N° 2 El color de la muestra se decoloro en segundo como en el Tubo 3. La pregunta es:

¿Porque no permaneció el color azul en la muestra, si el medio es básico (por la adición de la
solución de NaOH)? RPTA: Porque, la solución del NaOH no se encontraba concentrada como
del H2SO4, ya que el NaOH se encontraba bien diluido. Por lo tanto la amilasa sobrevivió al
medio y degrado al almidón. Concluimos que el NaOH bien diluido, no influye en un 100% en la
actividad enzimática. La explicación es concreta: Se requiere de una mayor cantidad de NaOH
concentrada, para poder desnaturalizar a la amilasa presente en las muestras.

TUBO N° 3 En pocos segundos la muestra se decoloro. La pregunta es: ¿Por qué se decoloro
rápido la muestra? RPTA: Porque la amilasa se encontraba en las condiciones adecuadas para
degradar el almidón. Concluimos que la amilasa en un medio con temperatura cálida (37°C) y
con pH casi neutro (5 - 7 aprox.), realiza adecuadamente su actividad enzimática. La explicación
es concreta: Las enzimas dependen de dos factores importantes para su actividad enzimática,
siendo estas la temperatura y el pH del medio en que reaccionan.

TUBO N° 4 Cambio de color la muestra por la existencia del almidón y al adicionar la saliva el
color azul de la muestra se tornó claro. Las preguntas son: ¿Por qué hubo tal cambio de
coloración? RPTA: Porque la amilasa que se está presente en la saliva, degrado al almidón
existente en la muestra. Sin embargo la actividad enzimática que realizo la amilasa fue lenta.
¿Por qué la actividad enzimática de la amilasa fue lenta? RPTA: Simple y llanamente por la baja
temperatura del medio donde se desarrolló la actividad enzimática. Concluimos que la
temperatura baja disminuye o influye en la actividad de la amilasa. La explicación es concreta:
La amilasa requiere de una temperatura cálida (37 °C) para realizar una óptima actividad
enzimática.

CUESTIONARIO E INTERPRETACIÓN DE RESULTADOS:

1. Determinación del sustrato:

Tubo Nº1: El color que se puede apreciar en el tubo es azulado. Esto nos indica que no hubo
hidrólisis, debido a que no hay presencia de la enzima amilasa. El color lo toma en base al lugol.
Existe el sustrato (almidón), el pH adecuado (6.8), y el activador (HCl).

Tubo Nº2: El líquido queda incoloro, debido a que se dieron las condiciones óptimas, para que
ocurra la reacción, por lo tanto la hidrólisis es total. En este caso sí se añadió la amilasa.

Tubo Nº3: Queda un color rosado pálido, esto demuestra que hubo hidrólisis, pero parcial, ya
que no hubo NaCl.Es necesaria una cantidad de sales, por lo tanto, no actuó de manera optima.

Tubo Nº4:
Queda un color azul, con lo cual se demuestra que no hubo reacción, debido al medio ácido en
el que se encontraba por la presencia deHCl. La coloración azul, se da por el contacto del almidón
con el lugol.

3. Determinación del producto:

Tubo Nº9: Nos da un color celeste, demostrando que no hubo reacción con la solución de
Benedict, ya que este solo reacciona con azúcares reductores, y tomamos muestra del tubo
número uno en el cual no hubo hidrólisis; en dicha muestra solo hubo almidón, el cual no es un
azúcar reductor.

Tubo Nº10: El color obtenido en este procedimiento, es celeste verdoso con precipitado rojo
ladrillo, con lo cual demostramos hidrólisis, debido a que el producto no fueron en su totalidad
azúcares reductores. Aún se aprecia el color base de la solución (azul), pero disminuido.

Tubo Nº11: El color obtenido es verdoso con precipitado rojo ladrillo, perose obtiene menor
cantidad de precipitado, lo cual indica que sí hubo hidrólisis, pero parcial.

Tubo Nº12: El color obtenido es celeste, demostrando que con el sustrato trabajado en la
reacción de Benedict, no hubo hidrólisis previa, manteniendo el color del reactivo de Benedict.

Tubo Nº13: En este procedimiento, debido a que trabajamos con glucosa (azúcar reductor), se
obtiene una solución roja, con precipitado rojo ladrillo, en mayor cantidad. El precipitado que
se da es CuO2, formado al Reaccionarlos azúcares reductores con el reactivo de Benedict. 3.
Grafique Actividad enzimática vs. Tubo de ensayo

(En papel milimetrado adjunto)

4. Explique cuáles son las condiciones óptimas para una hidrólisis enzimática del almidón
soluble:

Fundamentalmente se necesita:

Presencia de un pH óptimo (6.8) Las concentraciones de sustratos y enzimas adecuadas.

Temperatura óptima, alrededor de 37.5° C. Un buffer para estabilizar el pH. Concentración
adecuada e iones (NaCl)

5. Interpretar la reacción de Benedict:

Consiste en la reacción de un azúcar reductor (p. ej. lactosa, glucosa, maltosa) en soluciones
alcalinas; en este experimento usamos la glucosa, con el reactivo de Benedict, compuesto por:
Sulfato cúprico Citrato de sodio Carbonato anhídrido de sodio NaOH Formando un
precipitado rojo ladrillo. Pueden reducir el Cu+2, que tiene color azul, a Cu+, el cual, precipita de
la solución alcalina como Cu2O. Cu+2 Cu+

Reacción del Lugol

El lugol o solución de Lugol es una solución de I2 (1%) en equilibrio con KI (2%) en agua destilada.
Fue nombrada en honor al físico francés J. G. A. Lugol. El Lugol colorea las micelas de almidón
de color azul intenso casi negro. El almidón es una mezcla (en diferentes proporciones según las
especies) de los polisacáridos amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%). El almidón es
coloreado de azul en presencia de Lugol, debido a una adsorción o fijación del I-3 sobre las
unidades de glucosa de la amilosa, y ayuda a mantener su estructura. Al calentar hasta
ebullición, desaparece la estructura ternaria (incoloro) y reaparece al enfriar (azul-violeta).
  Reacción de Benedict

La reacción o prueba de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos que tienen su OH

anomérico libre), como el lactosa, la glucosa, la maltosa, y celobiosa. En soluciones alcalinas,
pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul a Cu+, que precipita de la solución alcalina como Cu2O
de color rojo-naranja. El fundamento de esta reacción radica en que en un medio alcalino, el ion
cúprico (otorgado por el sulfato cúprico) es capaz de reducirse por efecto del grupo aldónico del
azúcar (CHO) a su forma de Cu+. Este nuevo ion se observa como un precipitado rojo ladrillo
correspondiente al óxido cuproso (Cu2O).

El medio alcalino facilita que el azúcar esté de forma lineal, puesto que el azúcar en solución
forma un anillo de piranósico o furanósico. Una vez que el azúcar está lineal, su grupo aldehído
puede reaccionar con el ion cúprico en solución.

En resumen, se habla de azúcares reductores cuando tienen su OH anomérico libre, y éstos son
los que dan positivo en la prueba de Benedict.
1. RESULTADOS

 Reacción del Lugol

Tubo 1’ Tubo 2’ Tubo 3’

Presencia de glucosa. Hubo Presencia de glucosa. Hubo Presencia de almidón. No hubo

actividad enzimática. Lugol (-) actividad enzimática. Lugol (-) actividad enzimática. Lugol (+)

 Reacción de Benedict

Tubo 2’’ Tubo 3’’

Tubo 1’’

Presencia de glucosa. Presencia de almidón. Coloración

Presencia de glucosa. Coloración rojo - ladrillo. azul. Benedict (-)
Coloración rojo - ladrillo. Benedict (+)
Benedict (+)
Allingen. (1971). Hidratos de carbono. EnQuimica organica (págs. 959-963). Barcelona: Re!erte.
Rojo Rubio, R, Mendoza Martínez, GD, Crosby Galván, MM. Uso de la amilasa termoestable de Bacillus
licheniformis en la digestibilidad in vitro del almidón de sorgo y maíz. Agrociencia [Internet].
2001;35(4):423-427. Recuperado de: http://www.redalyc.org/articulo.oa?id=30235406

Universidad Ricardo Palma. 5o informe de laboratorio Bioquímica - Digestión

enzimática del almidón [Internet]. 23:55:11 UTC [citado 14 de noviembre de 2018].
Disponible en: https://es.slideshare.net/AlvaroES92/5-informe-de-laboratorio-
bioqumica-digestin-enzimtica-del-almidn