RECONOCIMIENTO DE MATERIAL DEL LABORATORIO DE

BIOTECNOLOGÍA VEGETAL

INTRODUCCION

En un laboratorio de biotecnología vegetal se realizan una serie de técnicas y

procesos que permiten el cultivo y modificación en el laboratorio de las plantas.
Es por esto que se realiza la práctica presente con la finalidad de detectar las
diferentes áreas y materiales del laboratorio de biotecnología vegetal. El
laboratorio de cultivo de tejidos vegetales está divido en diferentes áreas de
acuerdo a las actividades que se desarrollan en él, aunque los principios básicos
son los mismos en todos los laboratorios de cultivos de tejidos vegetales, su
aplicación puede presentar variaciones en magnitud y complejidad, dependiendo
de los objetivos del laboratorio. Las áreas o secciones principales son: Área de
preparación de medios, área de lavado y esterilización, área de transferencia y
siembra, área de incubación, área de crecimiento, área de cuarentena y control
sanitario.

En un laboratorio de cultivo de tejidos vegetales, es conocer las principales

normas de comportamiento y seguridad dentro del laboratorio, para lo ello se
hizo un recorrido por el laboratorio, describiendo donde se encontraba cada área
y los materiales y equipos que hay en cada una de ellas y esto por lo cual nos
permite conocer como está organizado el laboratorio de cultivo de tejidos, así
como las funciones de las áreas. Con esto se puede concluir que al conocer todo
el funcionamiento de este laboratorio se podrán realizar las prácticas de manera
adecuada y esto hará que se tengan los resultados deseados.

OBJETIVO

 Conocer las diferentes áreas y equipos básicos de un laboratorio de

cultivo de tejidos vegetales.
 Identificar las áreas de trabajo, el material y el equipo de cada una de las
áreas de un laboratorio de biotecnología vegetal, mediante el análisis,
investigación bibliográfica y a la vista del laboratorio de biotecnología
vegetal de su plantel.
  Profundizar conocimientos en el campo de la Biotecnología vegetal.

RESULTADOS

3. EQUIPOS DEL LABORATORIO

FIGURA 01: Estufa

Se lo utiliza para el secado rápido de vidriería ya lavado y para la esterilización

de instrumentos para el cultivo de tejidos. Para la esterilización por secado, la
temperatura se debe de conservar a 140°C durante 4 horas o bien 150°C –
180°C por una hora.

FIGURA 02: Autoclaves

DESCRIPCION: Características estándar: control automático de temperatura,
termómetro 180°F - 300°F (82°C-149°C), válvula de seguridad, calibración de
vapor (0 - 30 libras), contador de minutos (0 -60), indicador de límite de nivel de
agua, purgador de vapor termostático, señal de luz, deflector de vapor plano
perforado, soportes extraíbles para cazuelas, pies de bala ajustables de 4” a 6”.

Son equipos con vapor a presión, se utiliza para esterilizar medios de cultivo,
agua, cristalería y algunas sustancias que no son termolábiles, los modelos a
base de vapor de agua son los de tipo horizontales y verticales. Los medios de
cultivo para tejidos vegetales se esterilizan en autoclave a 1Kg/cm2 de presión
durante 15 minutos (alrededor de 15Lb/15 minutos), y una temperatura de
120°C. Para cristalería y otros objetos se esterilizan a 30minutos, en la misma
temperatura y presión. Para suelo se esteriliza a 45-60 minutos en la misma
temperatura y presión. El medidor de la presión debe de ser muy preciso debido
al peligro que representa el uso de presiones altas, por lo que se recomienda
que la autoclave tenga necesariamente una válvula de control automático.

FIGURA 03: Balanza Analítica Digital - Balanza Granataria

DESCRIPCION: Balanza Analítica de Digital: Con una capacidad de 100 a 200gr

y una precisión de 0.1mg, lo cual es muy útil para pesar cantidades pequeñas de
hormonas, vitaminas y otros microelementos. Equipo que tienen que estar
situadas sobre una base sólida, evitando flujos de aire y vibraciones.

DESCRIPCION: La Balanza Granataria: Tiene una capacidad de 100 a 200gr y

son para pesar unidades de gramos de substancias químicas.
FIGURA 04: Destilador de agua

DESCRIPCION: Es un aparato que tiene el propósito de eliminar sales del agua

mediante evaporación y condensación. De esta manera al evaporarse el agua,
las sales se acumulan en las superficies y al condensarse de nuevo sale el agua
del aparato sin dichas sales, es decir, libre de elementos ionizantes o fijadores
que pudieran alterar la disponibilidad de nutrientes en algún medio de cultivo,
esta es muy primordial, algunos investigadores utilizan agua bidestilada o
tridestilada, en destilador de vidrio de alta calidad. Se requiere grandes
cantidades de agua pura en la preparación de medios de cultivo, lavado de
cristalería, etc. Si el agua contiene iones de metales pesados afecta el desarrollo
de células en el cultivo.

FIGURA 05: Agitador Magnético Calentador

DESCRIPCION: Es un mezclador eléctrico que funciona por medio del

magnetismo; consta de una base plana donde se coloca el vaso de precipitado
o el recipiente especial conteniendo la substancia a prepararse o medio de
cultivo con el magneto dentro de él y en base a su movimiento oscilatorio y a la
fuerza magnética que se está ejerciendo en el interior de la base, la substancia
queda homogeneizada.

FIGURA 06: Cámara de Flujo Laminar o Cabina Laminar

DESCRIPCION: Su principal función es la de mantener una área libre de

partículas contaminantes, esta área normalmente se conoce como zona de
trabajo y es la que debe permanecer estéril, allí se manipulan y se realizan los
procedimientos requeridos que el laboratorio desarrolle en su momento. Para
lograr que la zona de trabajo esté libre de contaminación el flujo de aire debe ser
laminar y sin turbulencias para poder retener las partículas contaminantes y
asegurar que ésta zona sea estéril. Este proceso se logra gracias a que las
cabinas de flujo laminar vienen provistas de una turbina que fuerza el paso del
aire a través de un medio filtrante especial denominado filtro HEPA, éste filtro se
sitúa acorde al modelo de cabina, puede ir ubicado en la pared frontal
produciendo un flujo laminar horizontal o ubicado en el techo y producir un flujo
laminar vertical, este filtro HEPA tiene una eficiencia del 99,999% y retiene
partículas de un tamaño superior a 0,3 µm. Adicionalmente para lograr esto se
tiene en cuenta el área de filtración y espesor que posee el filtro, así como la
velocidad constante del aire producido por la turbina. Las cabinas de flujo laminar
se diseñan con propósitos diferentes: Para proteger la muestra, Proteger al
operario, Proteger el ambiente del laboratorio
 USO: Con un área estéril, nos permite realizar los pasos de desinfección del
material vegetal, la siembra in vitro de diferentes explantes vegetales, en
condiciones completamente asépticas, siembra de semillas in vitro, todo el
material que se introduzca dentro de la cámara debe ser estéril y roseado con
alcohol.

FIGURA 07: Medidores de PH

DESCRIPCION:

El pH es la concentración de iones hidronio [H3O+] presentes en determinada

sustancia. La sigla significa "potencial de hidrógeno" Este término fue definido
por el químico danés Sørensen, El pH típicamente va de 0 a 14 en disolución
acuosa, siendo ácidas las disoluciones con pH menores a 7 (el valor del
exponente de la concentración es mayor, porque hay más protones en la
disolución), y básicas las que tienen pH mayores a 7. El pH = 7 indica la
neutralidad de la disolución (donde el disolvente es agua).

USO: Su función es ajustar el Ph de los medios de cultivo sólidos y líquidos

durante el período de incubación, se utilizan indicadores de papel y químicos,
pero lo más adecuado es usar un potenciómetro con electrodos de vidrio. El pH
es una medida de la acidez o basicidad de una solución

.
FIGURA 8: Refrigerador y Congelador

DESCRIPCION: Un refrigerador es un dispositivo empleado principalmente en

cocina y en laboratorio, con un compartimento principal en el que se mantiene
una temperatura de entre 2 y 6 °C y también, frecuentemente, un compartimento
extra utilizado para congelación a -18 °C y llamado, apropiadamente,
congelador. Funciona a 110V.

USO: Un refrigerador es necesario para conservar a bajas temperaturas

muestras originales de células y tejidos, soluciones madres, medios de Cultivo,
etc. Un congelador, es un equipo de refrigeración que comprende un
compartimento aislado térmicamente, el cual es capaz de mantener los
productos almacenados en su interior a una temperatura bajo 0 °C normalmente
entre -30 °C y -4 °C.

FIGURA 9: Germinador de semillas

DESCRIPCION: Volumen de 781 Litros-Electricidad de 115V- Mediciones:
Internas: Ancho (W)-Profundidad (D) y Altura (H): 78cm x 63cm x 160cm.
Exterior: (W) x (D) x (H): 91.4cm x 86,4cm x 188cm. Com microprocessador
controlado com temperatura digital y display digital com temperaturas que van
desde 0.1°C, incrementados a 5°C com temperatura ambiente hasta 60°C.
Equipo com seis regillas adjustables.

USO: Los germinadores son dispositivos que favorecer el proceso de

germinación al mantener las semillas en las condiciones adecuadas de
humedad. El objetivo de remojar las semillas es conseguir una mayor hidratación
para que se produzca antes de la germinación. Con el remojo se consigue que
se ablande la capa externa de la semilla y, al mismo tiempo, se disuelvan y se
eliminen una serie de substancias que inhibían el proceso de germinación. El
germinador está provisto de bandejas o recipientes, tienen pequeños orificios,
es importante desinfectar las semillas con agua más algún fungicida y gotas de
cloro o lejía.

FIGURA 10: Horno Microondas

DESCRIPCION: Modelo: MH1447AP. Potencia de entrada 120V~60Hz.

Frecuencia de Microondas 2 450MHz. Dimensiones Externas 556mm x 320mm
x 405. Dimensiones Internas 507mm x 283 x 435mm. Permite seleccionar hasta
10 niveles de potencia. Es un aparato electrodoméstico debe ser conectado a
tierra, debe estar colocado en unas superficie plana. Las microondas son formas
de energía similar a las ondas de radio, televisión y luz del día común y corriente,
estas ondas se esparcen hacia afuera a medida que viajan a través de la
atmósfera y desaparecen. Los hornos microondas tienen un magnetón el cual
está diseñado para hacer uso de la energía en microondas.

USO: Es utilizado para la cocción de los medios de cultivo cuando estos son
sólidos, además de ciertas sales minerales cuando requieren de calentamiento
para su disolución.

CONCLUSIÓN

De acuerdo a lo encontrado en el laboratorio de biotecnología vegetal los

múltiples usos de materiales con todas las áreas adecuadas para realizar cultivos
de tejidos vegetales, el equipamiento y los reactivos y sustancias existentes en
la intensidad de la luz y la temperatura, factores que resultan muy importantes
en el cultivo de tejidos.

BIBLIOGRAFÍA

 HURTADO, D. V. ; MERINO, M. E. 1988. Cultivo de tejidos vegetales. 1

reimpresión. México, Trillas S. A. 132 p.
PIERIK, R. L. M. 1990. Cultivo in vitro de plantas superiores. Trad por Luis
Ayerbe Mateo – Sagasta. Madrid, Mundi – Prensa. 326 p.
 ROSELL C. H; VILLALOBOS, V. M. 1990. Fundamentos teóricos
prácticos del cultivo de tejidos vegetales. Roma, FAO. 112 p.
 VILLALOBOS, V. M. 1990. Fundamentos teóricos prácticos del cultivo de
tejidos vegetales. México, Colegio de Postgrado – Centro genético.
PREPARAR DE MEDIOS DE CULTIVO PARA PROPAGACIÓN

INTRODUCCIÓN
Los medios de cultivo son una mezcla de nutrientes que, en concentraciones
adecuadas y en condiciones físicas óptimas, permiten el crecimiento de los
microorganismos, estos medios son esenciales en el laboratorio por lo que un
control en su fabricación, preparación, conservación y uso, asegurar la exactitud,
confiabilidad y reproducibilidad de los resultados obtenidos. En los laboratorios
se utilizan diferentes tipos de medios de cultivo que pueden ser preparados en
forma líquida o en forma sólida. Usualmente para preparar un medio sólido, se
parte de un medio líquido al que se le añade un agente solidificante como el agar,
la gelatina o la sílicagel. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo
puede ser inoculado (es decir, se le añaden organismos) y a continuación
incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento. El crecimiento de los
microorganismos es el cultivo. Un cultivo axénico o puro contiene un único tipo
de microorganismos. Los medios de cultivo deben contener los nutrientes y
factores de crecimiento necesarios y deben estar exentos de cualquier
microorganismo contaminante. Los medios de cultivo contienen como mínimo:
carbono, nitrógeno, azufre, fósforo y sales inorgánicas. En muchos casos serán
necesarias ciertas vitaminas y otras sustancias inductoras del crecimiento.
También se añaden colorantes que actúan como indicadores. El agar es el
principal agente solidificante utilizado en medios. Se disuelve completamente a
100°C y se solidifica al enfriarse a 40°C. (Clavell, 1992).

Los medios de cultivo deshidratados se deben almacenar en envases sellados

bajo las condiciones que señale el fabricante, generalmente se almacenan en un
lugar fresco (entre 15 y 25°), con poca humedad y protegidos de la luz solar
directa. Nunca se deben almacenar cerca de autoclaves, hornos, ni otra fuente
de calor o vapor. Una vez que el medio de cultivo ha sido preparado y esterilizado
se debe almacenar entre 2 y 8º C, a menos que el medio requiera alguna
condición diferente. Se deben mantener en recipientes bien cerrados para evitar
su deshidratación. Cuando se usa tapón de algodón se debe colocar por encima
una envoltura de papel de aluminio (Dugas, 1999).
EL OBJETIVO

Es aprender a preparar medios de cultivo in vitro para micropropagación.

MARCO TEORICO

DESARROLLO DEL MATERIAL VEGETAL IN VITRO

Los explantos establecidos en el medio de cultivo que no presentaban síntomas

de contaminación se subcultivan posteriormente en el mismo medio o en otro
diferente. En algunas ocasiones, el primer medio de cultivo que se emplea es el
MS-O (medio sin reguladores del crecimiento) y posteriormente, los que no estén
contaminados, se subcultivan a otros medios más específicos, con diversas
combinaciones hormonales que desentenderán del tipo de material vegetal y del
fin que se pretenda.

ENRAIZAMIENTO IN VITRO

La siguiente fase de un proceso de Micropropagación (etapa III) consiste en

inducir el enraizamiento de microtallos obtenidos en el apartado 1.3. Para inducir
el enraizamiento se suele emplear el medio de cultivo MS sin citoquininas y con
auxinas. Por ejemplo un medio MS con 1 mg/L de AIB
ACLIMATACIÓN

La última fase de una cadena de Micropropagación consiste en la aclimatación

a condiciones ambientales de las plantas obtenidas in vitro. Las microplantas
enraizadas in vitro se siembran en un sustrato humedecido de turba/vermiculita
(1:1) y se colocan en una cámara de aclimatación con una humedad relativa del
90 %. Durante dos semanas la humedad relativa va disminuyendo hasta alcanzar
los valores del ambiente exterior.

SEMILLAS ARTIFICIALES.

A partir de los embriones somáticos se pueden crear semillas artificiales

mediante su encapsulación en gel de alginato. Una semilla sintética se diferencia
de una verdadera en que el embrión que posee se ha producido mediante una
embriogénesis somática y no mediante una fecundación. Una semilla sintética
puesta en condiciones adecuadas puede germinar y dar lugar a una planta
normal. Los alginatos son productos obtenidos a partir de algas pardas de la
clase Phaeophyceae. Son macromoléculas lineares constituidas por dos tipos de
monómero, el ácido β-D manurómico y el ácido α- L gulurónico. Los alginatos
pueden formar geles de distinta dureza al ponerse en contacto con la mayoría
de cationes divalentes o multivalentes. Para usar el alginato como agente
inmovilizador se emplea principalmente el ión calcio.

MICORRIZACIÓN CONTROLADA IN VITRO

El cultivo in vitro también es una importante herramienta para el estudio de la
relación que se establece entre las plantas y los microorganismos ya que permite
un mayor control de diversos factores que pueden afectar a esa interacción.
Entre las distintas relaciones planta-microorganismo podemos destacar la que
se establece entre las raíces de los vegetales y los hongos micorrícicos.

Material y método

Material

 1L agua destilada
 Papel de aluminio
 5 frasquitos de penicilina
 Jeringas
 Azúcar blanca

Material de laboratorio

 Agar sabouroud
 Murashige y skoog
 Balanza
 Pipeta
 Probetas
 Matraz
Método

Preparación de medio de cultivo

Para iniciar esta preparación primero se agregó en un matraz Erlenmeyer

50ml de agua destilada, se procedió agregar 15ml de Murashige y skoog (MS)
y 3 ml de ácido Indolacetico luego se aforó hasta 150ml y finalmente se agregó
el agar, se fue agregando lentamente y con la ayuda de la cocina eléctrica se
disolvió rápidamente.

Obtención del medio de cultivo

El medio de cultivo obtenido se llevó a distribuir 2ml en los cinco frascos de
penicilina que tenía cada alumno, luego se tapó con papel de aluminio, se
procedió a envolver con papel y rotular para ser llevado a esterilizar.

Esterilización del medio de cultivo

El medio de cultivo envuelto y rotulado se llevó a esterilizar al autoclave por 15
minutos para evitar la contaminación.

Resultados
RESULTADO FINAL DE LA PRÁCTICA
Discusión

La preparación de un medio de cultivo para tejidos vegetales es de gran

importancia, ya que es este, quien provee las condiciones y nutrientes
necesarios al explante para su crecimiento y desarrollo. El uso adecuado de un
medio de cultivo para vegetales correctamente preparado con todos y cada uno
de sus ingredientes bien medidos y adheridos, favorecerá la producción de
plantas in vitro que se requieran propagar ya que es un medio que contiene los
nutrientes y factores de crecimiento necesarios para su óptimo desarrollo
(Gonzales et., 2000).

Conclusión

La presente práctica se concluye que es de gran importancia preparar

adecuadamente los medios de cultivo in vitro para micropropagación, añadir la
cantidad de solución exacta y disolverla correctamente para obtener los
resultados esperados.

La asepsia que se tuvo para la preparación del medio del cultivo fue exitosa ya
que no hubo ninguna alteración en el medio.

Referencias bibliográficas

Clavell, L.; Pedrique de Aulacio, M. 1992. Microbiología. Manual de Métodos

Generales ed. 2da Facultad de Farmacia. Universidad Central de Venezuela.

Dugas Beverly. 1999. Tratado de Enfermería Práctica Nueva. Editorial

Interamericana. México. http://es.scribd.com/doc/14173118/4-Esterilizacion-y-
Preparacion-de-Medios-de-Cultivo.

Gonzales, cruz, caramillo, silos. 2000. Biotecnología Vegetal. (Cultivo de tejidos,

manual) SEP, México, 133p.