La determinación de proteínas basada en ultrasonidos de grano de maíz.

Resumen:
El necesitar un método simple y preciso para la estimación de proteína en extractos alcohólicos
acondujo a la reexaminación de las condiciones óptimas de una prueba de colorimetría basada
en la reacción de Biuret. El tiempo y otros parámetros experimentales fueron optimizados
después de estudio de cinética sobre la extracción de proteínas, ya sea las proteínas Zein o
totales. La extracción Zein y la pureza fueron investigadas mediante 1H y 13C RMN
espectroscopia, electroforesis SDS-PAGE y espectrofotometría UV-visible (UV-vis). Además,
se extendió este método para determinar proteínas de total en muestras de maíz, y
simultáneamente con su extracción de asistencia ultrasónica (US) con ayuda de una solución
alcalina-alcohólica. Las proteínas en ambos tipos de extractos fueron caracterizadas por
espectroscopia UV-vis. Sin embargo, la absorbancia 545 nm de los sobrenadantes de color
violeta, que es proporcional para el contenido de proteína, resultó siendo el parámetro crucial
de la prueba mejorada de proteína de en base a Biuret. La comparación de los valores
obtenidos por este método y por el método de Micro-Kjeldahl, estaban en excelente
concordancia. Un procedimiento simple estaba bien de acuerdo con el procedimiento estándar.
Se mejoró la exactitud y repetibilidad se encontraron en determinación de proteína en maíz
usando el método modificado de Biuret. La optimización de concentraciones de reactivo y
veces de incubación fueron estudiadas también.
El ultrasonido también puede ser un método alternativo de medida para tener prejuicio contra
tipos de harinas para los propósitos diferentes. El efecto de ultrasonido en algunas proteínas
para mejorar sus propiedades funcionales ha sido 2–4 estudiado. El tratamiento de ultrasonido
utilizando 20 que la sonda kHz puede afectar propiedades funcionales de proteínas como la
solubilidad y que la habilidad espumosa por la exposición de muestra en las altas temperaturas
causaron por la sonificación.

Analito:
Contenido de Proteínas

Equipos:
Trípode comercial molino portátil (12 kg, 0,75 kW, 1410 rpm).
Vibrador coctelera (Retsch, Alemania).
Tamiz.
Cereal eléctrico de laboratorio molino (SAMAP Mod F100, Andolsheim, Francia) con muelas
ajustables.
Tamices de prueba con mallas de 1,6 mm a 100 lm.
Limpiador de baño por ultrasonidos (J.P. Selecta Ultrasons system, 40 kHz;
Barcelona, España).
Termomezclador (Thermomixer Compact Eppendorf AG 22331 Hamburg, Alemania).
Soxhlet Traditional Solvent Extraction (TSE) using petroleum éter como disolvente [20].
Centrífuga Hettich Mikro 22R (Tuttlingen, Alemania).
Bruker Avance III, espectrómetro de 500 MHz (Alemania) equipado con un
Sonda de detección PABBO de 5 mm.
Gel SDS-PAGE electroforesis según el protocolo de Laemmli usando un
Mini-PROTEAN Tetra Cell de Bio-Rad (Alemania).
Escáner de gel BOX F3 (Syngene, Alemania)
Espectrofotómetro UV-visible Biochrom Libra S35 PC
(Cambridge, Inglaterra)
Cubetas de cuarzo de 10 mm (volumen de 1 ml) en el rango de 200 a 700 nm.
Instrumento Q-TOF II (Waters MSTechnologies, Manchester, Reino Unido).

Materiales:
 Los reactivos utilizados en este trabajo fueron de pureza analítica y las soluciones se
prepararon usando agua desionizada de un sistema Milli-Q (Millipore, Bedford, MA).
 Zeina de maíz y albúmina de suero bovino (BSA).
 Disolventes utilizados para extraer y desengrasar zeina, como el etanol, la acetona y el éter
de petróleo.
 Soluciones acuosas de etanol se prepararon en volumen / volumen y se usaron para la
extracción de zeina.
 La solución alcalina-alcohólica (el Biuret reactivo) se preparó resolviendo 20 g de KOH en
100-200 ml de agua de calidad milliQ, agregando 450 ml de etanol absoluto o 475 ml de
95% de etanol (V/V), y completando con agua hasta 1 L.
 Usaron granos de maíz que contienen aproximadamente 12% de humedad de varios
Híbridos de maíz rumanos y extranjeros y líneas endogámicas tomadas de Suceava Plant
Gene Bank, Rumania. Ambos opacos-2 y normales
 Se analizaron las variedades de maíz (no opaco-2). Los núcleos fueron molidos y la harina
resultante fue desgrasada usando petróleo éter como disolvente en un extractor Soxhlet.

Procedimiento

Conclusiones:

 Se propuso una prueba simple y precisa basada en la extracción ayudada en ultrasonido y la

reacción de Biuret de proteínas de maíz molido dentro de un método adaptado. Una parte del
método propuesto involucra la reacción de iones de cobre en polvo de fosfato de cobre y zein
extraído en etanol al 70 % en presencia de KOH de 6 % debajo de las condiciones ultrasónicas.
Otro asume extracción simultánea de proteínas totales en harinas maiceras usando una
solución conteniendo a 20 g KOH, 450 mL de etanol y agua hasta 1 L. La optimización de
concentración de reactivo y tiempo de incubación fue estudiada, asegurar realzó exactitud y
reptibilidad al determinar el contenido de proteína. La comparación de valores de proteína
que se obtuvo por este método y por el método de Micro-Kjeldahl mostraron una coincidencia
 excelente. El uso de ultrasonido significativamente mejoró la extracción de proteína y la
determinación de materiales biológicos como harinas del cereal.
Glosario:

El método descrito en este paper nos muestra una modificación del método de Biuret usado en un
ambiente de ondas ultrasónicas, para determinar la cantidad de proteínas en muestras de granos de
maíz.
Este es un innovador método cuyos resultados tienen una gran concordancia con el método de
Kjeldhal, lo que nos permitiría usarlo en análisis para determinar proteínas en otros tipos de muestra.

Preguntas

 ¿Es rentable reemplazar el método de Kjeldhal por este nuevo?

 ¿Qué tan exacto es este nuevo método?
 ¿El método funcionará en todo tipo de muestras?
 ¿Cuál es la mínima cantidad de proteínas que puede medir?