Cromatografía

Andrade Gameros Eder Arturo

Jimenez Nava Carlos Eduardo
Rivera Islas Salma Natalia
Suárez Montero Evelin Daniela
a)Cromatografía
-Es un método de separación de mezclas, basado en el
intercambio de los solutos entre 2 fases.

Tipos: Existen distintos criterios

de clasificación de cromatografías.

⇓ ⇓ ⇓
1.a)Por la naturaleza de sus fases
#Cromatografía Líquido -Líquido.

#Cromatografía gas-líquido

#Cromatografía Líquido-Sólido

#Cromatografía gas-Sólido
2.a)Proceso químico-físico
Cromatografía de Adsorción
Se basa principalmente en las diferencias en la
afinidad relativa de los compuestos por el sólido
utilizado como fase estacionaria.

Las separaciones obtenidas se determinan casi

exclusivamente por interacciones polares,
siendo la fase estacionaria más polar que la
fase móvil.
Cromatografía de reparto.

En la cromatografía de reparto se utilizan fases estacionarias

polares (sílice, alúmina, hidroxiapatito) y fases móviles
apolares (ciclohexano, isooctano, tetracloruro de carbono,
etc.).

Interacción de los grupos polares de los analitos con los

grupos polares de la superficie del relleno.
Cromatografía de Partición:
La fase estacionaria es un líquido soportado en un sólido inerte. Otra vez, la fase
móvil puede ser un líquido o un gas.

Ejemplos: La cromatografía en papel es un tipo de cromatografía de partición en

la cual la fase estacionaria es una capa de agua adsorbida en una hoja de papel.

La cromatografía de gases y de alta resolución son técnicas de partición

ampliamente empleadas.
Con base en la naturaleza del soporte en el que se aloja la fase
estacionaria:

-Cromatografía plana.

-Cromatografía en columna,
fenómeno de adsorción
Adsorción:
La adsorción es un proceso por el cual los átomos, iones o moléculas quedan
retenidas en la superficie de un material; dentro de la química se dice que la
adsorción de una sustancia es su acumulación en una determinada superficie
interfacial entre dos fases.
Tipos de adsorción según el tipo de interacción soluto-
adsorbente
Adsorción por intercambio: Ocurre cuando los iones de la sustancia se concentran en una
superficie como resultado de la atracción electrostática en los lugares cargados de la superficie.
 Adsorción física o fisisorción: Se debe a las fuerzas de Van der Waals, y la molécula adsorbida no
está fija en un lugar específico de la superficie; por ello es libre de trasladarse en la interfase. En
este tipo de adsorción el adsorbato conserva su naturaleza química.

Adsorción química o quimiosorción: Ocurre cuando el adsorbato forma enlaces fuertes en los
centros activos del adsorbente.
En este tipo de adsorción el adsorbato sufre una transformación, más o menos intensa, de su
naturaleza química
Propiedad de retención
El comportamiento de retención refleja la distribución del soluto entre la fase móvil
y la estacionaria. El volumen de fase móvil necesario para transportar la banda de
soluto desde el punto de inyección, a través de la columna, hasta el detector (en el
máximo del pico del soluto) se define como el volumen de retención, V r

Vr = tr Fc
El gasto o flujo volumétrico, en términos de los parámetros de la columna, depende
la sección transversal de la columna vacía, la porosidad total del relleno (empaque)
de la columna y la velocidad lineal promedio de la fase móvil.
Rf
Rf significa “Relación de frentes”, es una relación de distancias, y se expresa como el
cociente entre la distancia recorrida por la sustancia y la distancia recorrida por el disolvente
hasta el frente del eluyente:

Rf = (a) distancia que recorre la muestra desde el punto de aplicación

(b) distancia que recorre el disolvente hasta el frente del eluyente
c) Cromatografía en capa fina
Para la cromatografía en capa fina (TLC), la fase estacionaria es una capa de
partículas de unos milímetros de espesor, fijadas sobre un soporte sólido
generalmente de aluminio, plástico o vidrio. Después de aplicar el analito cerca de
la parte inferior de la placa seca el, disolvente empieza a producir la separación.

La ventaja principal de la TLC es que se analizan simultáneamente la muestra y

el patrón, mientras que en la cromatografía en columna las muestras se analizan
individualmente.
 Aplicación de la Cromatografía en capa fina
-Las técnicas de aplicación de la cromatografía en capa fina se aplican para
desarrollar las condiciones para la separación en cromatografía en líquidos de
alta resolución.

-La cromatografía en capa fina tiene amplio uso en los laboratorios clínicos y es
la estructura de apoyo de muchos estudios bioquímicos y biológicos. También
tiene una gran aplicación en los laboratorios industriales.
D) Eluyentes utilizados en la cromatografía de
capa fina
Los eluyentes más utilizados se dividen en dos
los que son Polares y los que son ligeramente
polares o no polares.
Polares LP o NP

AcetOEt Éter de petróleo

Piridina Éter dietílico

Benceno Ciclohexano

Etanol CCL4

Metanol CHCl3

H2O Hexano
Soportes utilizados en la cromatografía de capa
fina Los Soportes más utilizados sólo son 3.

Vidrio

Plático

Metálicos
Reveladores utilizados en la cromatografía de
capa fina
Los tres reveladores más comunes son 3:

Luz UV

vapores de yodo

Rocío con solución de H2O/H2SO4

Factores que influyen en una separación por
cromatografía en capa fina
a) Temperatura: a menor temperatura las sustancias se adsorben más en la fase estacionaria.

b) La cromatografía debe llevarse a cabo en un área sin corrientes de aire.

c) Limpieza de las placas. Muchas placas están contaminadas con grasa o agentes plastificantes o
adhesivos. Para el trabajo a pequeña escala, éstas deben limpiarse corriendo primero una mezcla de
cloroformo y metanol y después dejar secar completamente antes de aplicar la muestra.

d) Pureza de los disolventes.

Cromatografía en columna. (CC) Características
y aplicaciones

Se utiliza para la separación de una mezcla formada por

dos o más compuestos diferentes,
El proceso de cromatografía en columna consta de una fase móvil
(eluyente) y una fase estacionaria (adsorbente), los cuales dependen de
las sustancias que se deseen separar.
Uso

La cromatografía en columna se va a utilizar

en la separación de grandes cantidades de
material (por ejemplos, > 100 mg)
Consta de cuatro etapas:

● Empaque de la columna con el absorbente y el eluyente adecuados

● Adición de la mezcla a separar dentro de la columna

● Elución de la columna hasta lograr la separación de los componentes de la

mezcla

● Recuperación de las sustancias ya separadas

Factores que influyen en una separacion por
cromatografia en columna

Temperatura: A menor temperatura las

sustancias se absorben más en la fase móvil.

Masa de la muestra: Muestras de gran masa

tardan más en ser separadas.
H) Elección del eluyente
El eluyente a elegir debe tener ciertas características y se debe de realizar una
prueba en cromatografía en capa fina, debe de presentar una buena separación
de los componentes de la muestra. y se debe de seleccionar aquél eluyente en el
cual el Rf tenga un valor <3 y >0.

la elección del eluyente, tiene que tomar en consideración la polaridad del líquido
y la eleutropía de la misma.
Elección del adsorvente
Un adsorbente es un sólido que tiene la capacidad de retener sobre su superficie
un componente presente en corrientes líquidas o gaseosas.

La elección del adsorvente va de la mano con la elección del eluyente, ya que

esta elección tiene que ver con la eleutropía del eluyente.
cromatografía de gases
la fase móvil es un gas inerte (helio o nitrógeno) y la fase estacionaria es un
sólido (cromatografía gas-sólido) o un líquido “sostenido” por un sólido inerte
(cromatografía gas-líquido).

Este tipo de cromatografía siempre es en columna, ya que es la única manera de

que la fase móvil gaseosa se mantenga fluyendo, confinada dentro del sistema.
La columna puede estar rellena con la fase estacionaria, en forma semejante a la
cromatografía líquida, o bien la fase estacionaria puede depositarse sobre las
paredes de un tubo muy delgado (0.25mm de diámetro) y largo (hasta 100m)
Aplicación
Las áreas de aplicación son muy diversas

El análisis de drogas y fármacos en fluidos biológicos como la saliva, la sangre, la orina

Seguir la transformación de las sustancias responsables de la transmisión neurológica

Determinar la presencia de contaminantes en el medio ambiente

Descifrar la composición de los combustibles fósiles

Realizar el control de calidad de los productos químicos y farmacéuticos manufacturados

etc.
 CROMATOGRAFÍA DE FASE REVERSA
En la cromatografía de fase reversa (RPC) permite separar moléculas en base a su
polaridad; se utiliza un empaque hidrofóbico, usualmente un grupo funcional
octadecilo u octilo y una fase móvil polar.

Fase estacionaria

consiste en una matriz porosa e insoluble a la que se le han unido químicamente

compuestos hidrofóbicos. Los soportes para casi todos los rellenos se preparan
con sílica rígida, formada por partículas mecánicamente resistentes, porosas y
uniformes, con diámetros de 3, 5 o 10 micras.
También llamada como cromatografía de interacción hidrofóbica (HIC); para
referirse a las aplicaciones en las que se emplean sustituyentes y matrices
compatibles con fluidos biológicos. Es común cuando se habla de purificación de
proteínas y carbohidratos,

RPC es más empleado para referirse a la separación de moléculas en sistemas

que son inadecuados para la separación de macromoléculas biológicas.
Puede considerarse que la RPC es un proceso de partición en donde los solutos
están distribuidos entre una fase estacionaria no polar y una fase móvil polar. Los
solutos no polares tienden a adsorberse en la fase estacionaria y se mueven a
través del sistema más lentamente que los solutos polares.
Purificación de biomoléculas
la RPC se usa de manera generalizada para separar los siguientes grupos de
biomoléculas:
• Proteínas y péptidos de origen natural
• Proteínas y péptidos recombinantes
• Péptidos obtenidos por digestión enzimática
• Péptidos sintetizados químicamente
• Oligonucleótidos sintéticos
Equipo de HPLC

La técnica de fase reversa es el tipo de cromatografía más ampliamente utilizada

en HPLC que son las siglas del inglés High Performance Liquid Chromatography.

La cromatografía de líquidos de alta resolución utiliza presiones elevadas para

hacer pasar un flujo de fase móvil a través de una columna empacada con
partículas micrométricas
Sistemas de bombeo

Las bombas utilizadas en el HPLC son muy potentes y precisas. El flujo debe ser libre de pulsaciones y con
un caudal que pueda variar entre 0.1 y 10 ml/min, la presión puede ser hasta de 6000psi (lbs/in 2 ) y todos los
componentes deben ser resistentes a la corrosión. Existen tres tipos de bombas: bombas recíprocas, bombas
de jeringa y bombas de presión constante o neumática.

Sistemas de inyección de la muestra

el factor limitante en la precisión de las medidas en cromatografía de líquidos por HPLC, es la

reproducibilidad con que se puede introducir la muestra en la columna. El problema se agrava por el
ensanchamiento de banda que acompaña a la carga de las columnas.

Columnas, la separación de los componentes de la muestra se produce en la columna. La mayoría de las

columnas para HPLC se construyen con tubos de acero inoxidable de diámetro interno uniforme. Esta clase
de tubos miden entre 10 y 30 cm. El diámetro interno de las columnas es a menudo de 4 a 10 mm y los
tamaños de las partículas de los rellenos más comunes son 3, 5 y 10 μm. Para aumentar la vida de la
columna analítica se coloca delante una precolumna que elimina la materia en suspensión y los
contaminantes de los disolventes
Termostatos

La mayoría de los aparatos lleva hornos que controlan la temperatura en las

columnas. Otra forma de controlar con precisión la temperatura es colocando las
columnas en camisas con agua que provenga de un baño de temperatura constante

detectores

Detectores de absorbancia: son los detectores más empleados ya que tanto las
proteínas como los ácidos nucleicos absorben luz de esta región

Los detectores de absorbancia ultravioleta más simples son los fotómetros de filtros
con una lámpara de mercurio como fuente. La desventaja que presentan estos
aparatos es que el efluente no se puede monitorear a varias longitudes de onda al
mismo tiempo.
otros detectores

fluorescencia

infrarrojo

indice de refracción

dispersión de luz (ELSD)

espectrometría de masa

Detectores de arreglos de diodos

Sistemas para el tratamiento de los disolventes Los recipientes que contienen

los solventes a menudo se equipan con un sistema para eliminar los gases
disueltos, como oxígeno y nitrógeno, que interfieren formando burbujas en los
Referencias :v
UNAM; Cromatografía; 04/06/2017
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/5.3CromatografiadeGasesInstrumentacion_2759.pdf

CUN; Cromatografía de partición; 05/06/2017 http://www.cun.es/diccionario-medico/terminos/cromatografia-particion

UNAM; Técnicas Cromatográficas; 05/06/2017; http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/M.Cromatogrficos_6700.pdf

OMS; La cromatografía en capa fina y su aplicación; 05/06/2017

http://apps.who.int/medicinedocs/es/d/Jh1790s/24.7.html

Edgar Ernesto Esquivel Soto Q; Lidia Irene Leal Guadarrama, Métodos fisicoquímicos en
Biotecnología CROMATOGRAFÍA DE FASE REVERSA. 08/06/17
http://www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/cromatografia_de_fase_reversa.pdf