DIAGNÓSTICO DE LAS

INFECCIONES URINARIAS
BACTERIANAS

S. aureus
C AR M E N M C AB R E R A
MICROBIOLOGÍA
 Es uno de los estudios más frecuentes en los laboratorios
de microbiología, tanto en el ámbito comunitario como en
el hospitalario.
 Según el último Estudio de Prevalencia de las Infecciones
Nosocomiales en España (EPINE), las ITUs representan
el 20% del total. Y de ellas 80-90% se asocian a catéteres
uretrales.
 Definición de ITU: “presencia de microorganismos
patógenos en las vías urinarias con alteración
funcional”.
 A la hora de establecer el diagnóstico se ha de tener en
cuenta el tipo de IU, el método de recogida de la
muestra, y los elementos formes contenidos en la
misma (estudio del sedimento).
 ITU en la Mujer
 La incidencia de cistitis aguda se sitúa entre 0.5 a 0.7
episodios/año entre los 20-44 años de edad. De ellos un
25% desarrollan recurrencias.
 Entre los 20-44 años, hay 18 casos de pielonefritis aguda
(PA)/10.000 ♀, solamente el 7% necesitarán
hospitalización.
 Los cambios que conlleva la menopausia, aumentan la
incidencia de ITUs, fundamentalmente las asintomáticas:
BA (Bacteriuria asintomática) “ >100.000 ufc/ml en 2
muestras de orina en ausencia de sintomatología clínica”.
 10-15% de ♀ entre 65-70 años presentan BA; y el 20% en
mayores de 80 años.
 ITU en el Varón

 Tanto la BA como la IU sintomática son poco frecuentes,

con un incidencia anual de 5-8 episodios/10.000 varones <
65 años.
 Cuando aparecen en la mayoría de los casos es por la
presencia de una anomalía urológica o una prostatitis
crónica.
 La incidencia de las ITUs aumenta a partir de los 50 años,
al aumentar progresivamente la obstrucción urinaria
causada por la patología prostática.
 La presencia de una ITU en un varón se debe de
considerar como un indicador de anomalía urológica.
 Bacteriuria asintomática (BA)

 Se acompaña de Piuria en el 30% de mujeres jóvenes, 25-

50% de las embarazadas; en el 78% de los diabéticos; y
en el 90% de los ancianos.

 En la mujer embarazada la BA es la IU más frecuente,

con una prevalencia del 2-11%; sin tratamiento un 20-40%
de las gestantes desarrollarán Pielonefritis aguda (PA)
(duplica el riesgo de partos prematuros y niños con bajo
peso).

 En el trasplantado renal, la BA produce riesgo de sepsis y

fallo del injerto.
 Bacteriuria asintomática (BA)

 Protocolos de detección de BA en:

 en la semana 16 de gestación.

 en los primeros 6 meses post-trasplante renal.

 antes de la cirugía urológica (riesgo de bacteriemia).

ETIOLOGÍA
 Infecciones urinarias bajas adquiridas en la comunidad. Estudio
realizado en 15 laboratorios de 9 Comunidades Autónomas (3055 IU)
 Patogenia de la IU

 En condiciones normales, la orina y las vías urinarias son

estériles. Sin embargo la uretra distal está colonizada por microbiota
cutánea y vaginal.
 Lactobacillus spp.
 Corinebacterias no urealíticas.
 Estreptocos del grupo viridans, y algunos estafilococos
coagulasa (-).
 Previamente a una IU se produce una colonización (adherencia) del
epitelio vaginal y periuretral a partir de bacterias del colon (E.
coli). La infección implica una lesión del uroepitelio.

 FACTORES que predisponen a IU: alteración de la flora vaginal

normal (disminución de lactobacilos en la menopausia, o vaginosis
bacteriana); empleo previo de antibióticos; relaciones sexuales; uso de
espermicidas; diafragma; sondas vesicales; cirugía urogenital; etc.
 Las principales cepas de E.coli uropatógenas pertenecen al grupo
B2: 70% producen cistitis; 67% pielonefritis; y el 72% de las sepsis
urinarias. Son cepas que presentan varios factores de virulencia
cromosómicos (fimbrias; toxinas; sideróforos; Ag K; y Ag O).

 A diferencia de las cepas de E. coli comensales (grupo A y B1) que

tienen muy pocos factores de virulencia.

 Los Lactobacillus spp. protegen de la colonización por uropatógenos,

al inhibir la adherencia al epitelio vaginal mediante el bloqueo de sus
receptores. Igualmente impiden la división bacteriana al producir al
medio: H₂O₂, ácido láctico, y bacteriocinas.

 Consumo de probióticos como alternativa a los antibióticos

convencionales para la prevención de las ITUs, al restablecer la
ecología vaginal.
Pruebas microbiológicas para el diagnóstico
de una ITU

 Urocultivo (CLED, Mac

Conkey).

 Pruebas rápidas de
identificación.

 Paneles de identificación-
antibiograma Combo
MicroScan.
 CLED (Cistina LACTOSA Electrolito Deficiente)

 Es un medio de cultivo
diferencial, que permite el
crecimiento de
uropatógenos: gram-
negativos, gram-positivos, y
levaduras.
 Recuento semi-cuantitativo
(ufc/ml).
 10 ml de orina (asa de
siembra calibrada): método
del recuento.
 Nº ufc/ml= nº colonias x 100
Incubación a 35-37ºC durante 18 horas
en atmosfera aerobia
 Mac Conkey (sales biliares y cristal violeta)
 Es un medio selectivo y
diferencial para
Enterobacterias, y bacilos
gram-negativos No
fermentadores.

 Siembra en aislamiento.

 Colonias lactosa (+): rosa

a rojas (fermentadoras).

 Colonias lactosa (-):

E. coli (lactosa +)
incoloras.
P. mirabilis (lactosa -)
Lectura de los cultivos:

Cultivo Negativo
Cultivo Positivo (>100.000 ufc/ml)

CLED Mac Conkey

 Cultivo contaminado:
>10.000 ufc/ml con 3 o más
tipos diferentes de colonias.

 Indica una mala recogida de la

muestra y la presencia de flora
fecal contaminante.

 Comentario “Orina
contaminada, remitir nueva
muestra recogida en
condiciones estériles” (ya
que no se puede descartar una
infección urinaria positiva).
 Situaciones especiales de recuento

 >100.000 ufc/ml se consideran recuentos significativos de

ITU.

 En orina obtenidas por punción vesical suprapúbica o por

nefrostomía, cualquier recuento es indicativo de
infección.

 En orinas obtenidas por sondaje vesical, se consideran

recuentos significativos ≥ 10³ ufc/ml de cualquier
microorganismo en cultivo puro.

 Niños, y varones >10.000 ufc/ml se considera ITU

positiva.
 Pruebas rápidas de identificación

1) Citocromo-oxidasa. Identificación de Enterobacterias

(gram -) citocromo-oxidasa negativas, de bacilos gram-
negativos aerobios: citocromo-oxidasa positivos
(Pseudomonas spp).
o Tiras de papel absorbente que contienen 2 reactivos:
N,N,dimetil-fenilendiamina y a-naftol. La enzima
citocromo-oxidasa en presencia de O₂ forma un
compuesto azul brillante (azul indofenol).
 Pruebas rápidas de identificación

2) Catalasa. Identificación de cocos gram-positivos (crecen

exclusivamente en CLED).
2 H₂O₂ ⇒ 2 H₂O + O₂ (↑)
catalasa

 Staphylococcus spp. Catalasa +

 Streptococcus spp. Catalasa -
Paneles de identificación-antibiograma combo (MicroScan)

 Paneles para gram-

negativos: identificación
a nivel de especie de
aerobios, y anaerobios
facultativos. Y
sensibilidad (CMI) a
antibióticos.
 Paneles para gram-
positivos: aerobios
facultativos de
crecimiento rápido; Y
sensibilidad a
antibióticos.
Pase de las colonias a las placas de crecimiento

Identificación
fenotípica

Sensibilidad a
antibióticos

Placas de cultivo de 96 pocillos en U

 Preparación del inoculo

 Técnica de turbidez estandarizada (se recomienda para

todos los bacilos aerobios gram-, colonias mucosas):
 Se toca en la superficie de la colonia aislada con el asa estéril, en 1-
2 ml de suero salino y se homogeniza la suspensión. Se ha de
conseguir una turbidez de 0.5 de la escala McFarland
(Turbidímetro).
 Se transfieren 100 ml de suspensión 0.5 McFarland a un tubo de
25 ml de agua para inoculo con PLURONIC.
 Los pocillos se cargan con la suspensión bacteriana.

Turbidímetro
 Sistema Prompt:
A) Varilla de inoculación B) Botella con líquido de dilución
 Pruebas bioquímicas de identificación (gram -)

 Fermentación de azúcares (glucosa, sacarosa, sorbitol, rafinosa,

arabionsa, etc). La fermentación de un tipo de azúcar produce una
ácido, la disminución del pH se pone de manifiesto porque vira el color
del indicador de rojo fenol (Positivo: color amarillo o naranja).
 Prueba de la urea: detección de la enzima ureasa, que produce CO₂ y
amoniaco. El aumento del pH, se detecta por el indicador rojo fenol
(Positivo: magenta a rosa).
 Prueba del SH₂ (sulfuro de hidrógeno): a partir del tiosulfito de
sodio se genera SH₂ (gas) que reacciona con los iones férricos del
medio para producir un precipitado negro.
 Indol: metabolismo del Trp (enzima: triptofanasa). Positivo: color
púrpura, cuando el indol reacciona con el reactivo de Kovak.
 Otras: nitratos; descarboxilación de diaminoácidos (Lys, Arg, Orn);
hidrólisis de esculina; Voges-Proskauer (VP), etc.
 Las placas combo, se incuban como mínimo 16 a 20 horas
a 35ºC en el MicroScan (incubador sin CO₂).

 Lectura de los paneles se hace automáticamente, las

pruebas bioquímicas se identifica el color mediante
colorimetría.

 Lectura de los pocillos con antibióticos se hace por la

turbidez (crecimiento). Cuando una determinada
concentración de antibiótico inhibe el crecimiento No hay
turbidez en el pocillo. CMI= a la concentración a la cual
ya no hay turbidez.
 INFORME DE RESULTADOS

 Nº de ufc/ml.
 Especie de bacteria.
 Antibiograma ENTEROBACTERIAS
Ampicilina S
Amoxicilina- S
clavulánico

Gentamicina I
A. Nalidíxico R
Fosfomicina S

* BLEE
* A. Nalidixico Resistente