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ASIGNATURA. : BIOQUIMICA I
SEMESTRE: 2018 – II
INTRODUCCION
I. Fundamento teórico
Los buffer son una mezcla de dos especie químicas relacionadas (ácido ó base
débil y su respectiva sal conjugada) ambas tienen una capacidad para captar y
liberar H+.
Los Buffer están presentes en casi todos los fluidos biológicos ejerciendo un
equilibrio en la concentración de H+.
Dentro de los buffer más conocidos que se encuentra presente en los sistemas
biológicos tenemos:
Las proteínas y los aminoácidos también ejercen capacidad buffer, debido a los
grupos funcionales que presentan, a pesar que literalmente no son buffer sin
embargo por la función son considerados como buffer biológicos.
II Objetivos:
Determina la concentración de una muestra desconocida mediante la titulación
Determina la capacidad buffer.
IV. Procedimiento:
β = # n (base adicionado)
Vol buffer (L) x Δ pH
V. Cuestionario:
1. Si el pH de la sangre es de 7,42 ¿Determinar la concentración de
hidrogeniones libres?
2. A una solución de 80 mL de ácido carbónico 0,05 mol/L se le adiciona
20 mL de NaOH 0,01 mol/L.
I. Fundamento teórico
Todas las proteínas tienen una carga neta dependiendo del pH del medio en
el que se encuentren y de los aminoácidos que la componen.
Debido a la composición en aminoácidos de la proteína, los radicales libres
pueden existir en tres formas dependiendo del pH del medio: catiónicos,
neutros y aniónicos.
Cualquier proteína tendría una carga neta positiva si se encuentra en un
medio lo suficientemente ácido debido a que los grupos COOH de los
aminoácidos aspártico y glutámico estarían en su forma neutra pero los
grupos amino de Arginina y lisina estarían protonados (-NH3 +).
De igual forma si la proteína se encuentra en un medio con un pH muy alto
estaría cargada negativamente ya que en este caso los grupos carboxilo
estarían desprotonados (COO-) y los grupos amino estarían en su forma
neutra (NH2). Las proteínas tienen un pH característico al cual su carga
neta es cero. A este pH se le denomina punto isoeléctrico (pI).
En el punto isoeléctrico (pI), se encuentran en el equilibrio las cargas
positivas y negativas por lo que la proteína presenta su máxima posibilidad
para ser precipitada al disminuir su solubilidad y facilitar su agregación.
II. Objetivo
Reactivos
Agua destilada
Acetato sódico 0,1 N
Ácido acético 0,01 N
Ácido acético 0,1 N
Ácido acético 1,0 N
NaOH 1N
Éter etílico
Etanol al 70%
DESARROLLO EXPERIMENTAL
A. Aislamiento de la caseína:
TABLA DE DISOLUCIONES
IV. Cuestiones
1) ¿Cuál es el punto isoeléctrico de la caseína?
2) Por qué las proteínas tienen solubilidad mínima en el pI?
V. Fuentes de información:
I. Fundamento teórico:
II. Objetivos:
Extraer oligofructanos del jugo del yacon
Identificar los carbohidratos con los diferentes reactivos.
Explicar el fundamento de reconocimiento de los reactivos.
Reactivo de Lugol
Reactivo de Benedict
Reactivo de Molish
Reactivo de Selivanoff
Ácido clorhídrico 0,5 N
Alcohol etílico
Acido sulfúrico
Muestra A (Galactosa)
Muestra B (Sacarosa)
Muestra C (Maltosa)
Muestra D (Almidón)
Pipetas 5ml, 10ml, 1ml
Beaker 250ml
Rejilla
Trípode
Mechero
Baño maría
Tubos de prueba 13 x 100mm
c. Reacción de Molish.
Colocar 2 ml. de muestra problema. Luego adicionar II gotas de
reactivo de Molish, mezclar. Lentamente deslizar por las paredes
del tubo, 1 mL. de ácido sulfúrico concentrado, (reacción
exotérmica). La formación de un anillo de color violeta o púrpura
indica presencia de glúcidos.
d. Reacción de Benedict.
Depositar 2.5 ml de Reactivo de Benedict, calentar hasta
ebullición por 2 minutos. Si no hay cambio de color se adicionan
V gotas de Muestra problema, luego se coloca en B.M. hirviente
durante 3 minutos, luego se deja enfriar. La aparición de una
coloración o, precipitado, amarillo anaranjado o rojo, indica
presencia de glúcidos reductores.
e. Reacción de Selivanoff. En un tubo de prueba se coloca 3 ml
de solución clorhídrica de resorcinol y 6 ml de Muestra
problema. Luego se coloca en Baño de María hirviente por unos
minutos. El desarrollo inmediato de una coloración anaranjado
rojizo indica presencia de pentosas.
V. Cuestionario:
I. Fundamentación teórica
Los aceites vegetales, como el aceite de coco o de olivo, y las grasas animales,
como el sebo, son ésteres de glicerina con ácidos grasos. Por eso cuando son
tratados con una base fuerte como sosa o potasa se saponifican, es decir
producen la sal del ácido graso conocida como jabón y liberan glicerina. En el
caso de que la saponificación se efectúe con sosa, se obtendrán los jabones de
sodio, que son sólidos y ampliamente usados en el hogar. En caso de hacerlo
con potasa, se obtendrán jabones de potasio, que tienen consistencia líquida.
II. Objetivo:
Materiales
Beaker 500ml 100ml,
Baño maría
Papel filtro
Pipetas de 10ml
Cápsula de porcelana.
Reactivos
IV. Procedimiento
Reacción de saponificación
En un vaso de precipitado de 1000ml calienta en un baño maría 15 g de
aceite de palma o aceite de coco. Agitando constantemente agrega 13 ml
de KOH (1g/ml agua). Terminada la adición, continúa calentado en baño
maría y agita durante 50 min. Adicionar cloruro de sodio para separar el
jabón.
V. Cuestionario
I. Marco teórico.
II. Competencias.
a. Espectrofotómetro.
b. B.M. a 37ºC.
c. Baño de hielo.
d. Tubos de prueba de 16 x 150mm.
e. Pipetas de 1 y 10 mL.
f. Gradillas.
3.2. Reactivos.
a. Solución de albúmina al 2 %.
b. Solución de pepsina al 1%.
c. Acido clorhídrico 1N.
d. Agua destilada.
IV. Procedimiento.
TUBOS 1 2 3 4 5 6 7
I. Marco teórico
Las enzimas son proteínas que funcionan en un determinado medio, bien sea
intra o extracelular, donde las condiciones pueden variar, y por lo tanto el nivel
de actividad de la molécula puede verse modificado a lo largo del tiempo.
Dentro de los factores que afectan a la actividad enzimática merecen
destacarse:
II. Objetivo
III. Materiales
a. Bibliografía del silabo de Bioquímica I.
b. Bibliografía de carácter científico (revistas, manuales, etc.).
c. Retroproyector.
d. videos, VHS, etc.
e. Libros, revistas, folletos.
f. CD. Power point.
IV. Procedimiento.
VI. Cuestionario.
I. Marco teórico
III. Materiales
IV. Procedimiento.
VI. Cuestionario.
a. De ejemplos de transportadores.
b. ¿Cómo se aprovecha en la Industria farmacéutica el
transporte a través de membranas ?
c. Elabore un mapa conceptual de las formas de transporte
a través de membranas.
6.7.Fuentes de Información.
I. Marco teórico
Por otro lado, la amilasa cataliza la hidrólisis del almidón, glucógeno y dextrinas
superiores en moléculas cada vez más pequeñas, en un proceso progresivo
dando como producto final el disacárido maltosa. La amilasa es una mezcla de
enzimas. En el hombre la encontramos en la boca (amilasa salival) y en el
intestino (amilasa pancreática). La amilasa pancreática se considera idéntica
en su acción a la amilasa salival. El pH óptimo para la amilasa salival es de 6.6.
Cuando se encuentra en medios con pH más ácidos o más alcalinos, la
actividad de la enzima disminuye o se inhibe por completo. La presencia de
sales también modifica la actividad de esta enzima.
dextrinas
almidón → almidón → superiores → acrodextrinas
soluble + + → Maltosa
molec. Maltosa molec. Maltosa
II. Objetivo:
Materiales
Tubos de ensayo
Baño maría
Placa de porcelana excavada
Gradilla
Pipetas de 1 ml, 5 ml, 10 ml
Pipeta pasteur
Pinzas para tubo.
Almidón 1% en regulador de fosfatos 0.02 M
Glucógeno 1% en regulador de fosfatos 0.02 M
Glucogeno al 1% en regulador de fosfatos 0.02 M
Solución de NaCl 0.5N
Solución de amilasa pancreática al 1% o amilasa salival
Solución de lugol.
IV. Procedimiento
Tubo 1 2 3 4 5 6 7
Almidón 1% 1 1 1 1 0 0 0
ml
Agua 0 0 0 0 1 1 1
destilada
preincubacion Dejar 37Cº por 5min
Enzima al 1% Sin Dil. Dil. Dil. Dil. Dil. Dil.
diluir 1:5 1:10 1:20 1:5 1:10 1:20
0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5
NaCl 5% 1gta 1gta 1gta 1gta 1gta 1gta 1gta
incubación Dejar 37Cº
Lectura color
2min
4min
6min
8min
10min
12min
Mas tiempo
V. Cuestionario
I. Marco teórico.
II. Objetivo
a. Espectrofotómetro.
b. Centrifuga.
c. Baño María 37ºC.
d. Cocina eléctrica.
e. Mortero y pilón.
f. Balanza.
a. Gradilla.
b. Pipeta de y 10 ml.
c. Micropipeta de o a 50 uL
d. Tubos de prueba de 13 x 100mm y de 16 x 150 mm.
e. Micropipetas de oa 50Ul con punteras.
f. embudo mediano; baguetas y punteras amarillas.
g. Pinzas de madera y bola de vidrio de 100 mm de diámetro
3.2.Reactivos.
IV. Procedimiento.
A. Aislamiento de glucógeno
V. Resultados.
El glucógeno se expresa en mg/dL de glucosa.
VI. Cuestionario.
I. Marco teórico
II. Objetivo
conocer la importancia de la deficiencia de la 6 fosfato deshidrogenasa
diferentes procesos metabólicos.
III. Materiales
IV. Procedimiento.
VI. Cuestionario.
I. Marco teórico
Es una prueba que se debe hacer a toda persona que padece diabetes.
La hemoglobina es una proteína que se encuentra en los glóbulos rojos
(hematíes). La fracción “A1C” es una hemoglobina que ha sido
modificada porque durante su proceso de formación se le ha unido
glucosa (azúcar).
Mientras más glucosa haya en la sangre, más glucosa se pegará a la
célula de hemoglobina que está en formación.
Esta prueba le provee información al médico de cómo han estado sus
niveles de glucosa en la sangre en los últimos tres meses, que es el
tiempo promedio de vida de un hematíe. La prueba de hemoglobina
glicosilada ayuda a comprobar si tu plan de acción y tratamiento para
manejar la condición de diabetes ha sido efectivo o si requiere ser
modificado.
I. Objetivo
II. Materiales
III. Procedimiento.
6.7.Fuentes de Información.
PRACTICA Nº 13
DETERMINACION DE TRANSAMINASAS
1. Marco teórico.
2. Competencia.
Determina la concentración en suero, de las transaminasas:
alaninoaminotransferasa y aspartatoaminotransferasa.
3. Material y equipos.
3.1. Equipos y material.
a. Espectrofotómetro.
b. Centrifuga.
c. Baño María regulado a 37ºC.
d. Jeringas descartables.
e. Micropipietas de 0 a 50 uL
f. Tubos de prueba de 13 x 100mm.
g. Gradilas, algodón, ligadura.
3.2. Reactivos
a. Sustrato GOT.
b. Sustrato GPT.
c. Standard de Piruvato.
d. Reactivo de color de 2, 4- dinitrofenilhidrazina
4. Procedimiento.
4.1. Hacer la curva de calibración de acuerdo al siguiente esquema.
REACTIVOS TUBOS
1 2 3 4 5 6
Agua destilada ( mL ) 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2 0.2
Standard (mL.) - 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5
Sustrato GOT (mL ) 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5
Reactivo de color mL 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Mezclar e incubar a 37ª C x 20 minutos a la temperatura del cuarto
NaOH 0.4 N mL 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0
Mezclar. Reposo 5 minutos . Leer a 505 nn contra el blanco que es el
tubo Nº 1
UNIDADES U /L U /L U /L U /L U /L U /L
GOT 0 22 55 95 150 215
GPT 0 25 50 83 126 -
Graficar en papel milimetrado las unidades de transaminasa en el eje
X y las absorbancias en el eje Y.
4.2. Determinación de transaminasas en suero.
a. En una gradilla disponer tres tubos marcados B (blanco); P1
(GOT ) y P2 (GPT ) y proceder como sigue:
4.3. Cálculos.
GOT De 5 a 40 U/L
GPT de 5 a 45 U/L
5. Cuestionario.
6. Fuentes de Información
a. Reitman and Frankel. Am. J. Clin. Path. 28 ( 56 ), 1957.
b. Lehninger, A. Bioquímica. Barcelona. Omega. 2002.
c. Luque L y Hermoza A. Biología Molecular e Ingeniería
Genética. Barcelona.
Hartcourt. 2001.
d. Martin DW. Bioquímica de Harper. México. Manual
Moderno. 2000.
PRACTICA Nº 14
DETERMINACION DE UREA
1. Marco teórico.
La úrea es el metabolito final del metabolismo de las proteinas ,es
excretada en grandes cantidades por la orina. Su excreción es la
función principal del riñón, representando por sí sola bastante más de
la mitad del residuo sólido de la orina. Usualmente constituye del 80 al
90% del nitrógeno total; El cuerpo produce en promedio 25 a 30
gramos de urea al día –algo más en personas que comen dieta rica en
proteínas, menos en personas con dieta pobre en proteínas Toda esta
urea debe eliminarse por orina; de lo contrario se acumulará en líquidos
corporales.
2. Competencia.
3.2.Reactivos.
a. Reactivo 1: contiene fenol y nitroprusiato de sodio.
b. Reactivo 2: contiene una solución concentrada de
hipoclorito de sodio e hidróxido de sodio.
c. Ureasa en solución.
d. Standard de úrea solución de úrea 60 mg / dL.
4. Procedimiento.
a.En una gradilla disponer 3 tubos de prueba de 13 x 100 ml.,
marcarlos con las letras S (standard ); P (problema ) y B
(blanco ) y proceder como sigue :
B S P
Standard - 20ul -
Suero - - 20ul
Ureasa I gota I gota Igota
Mezclar por agitación suave e incubar x 5 minutos a
37ºC Luego agregar
Reactivo Nº 1 mL. 1 1 1
Reactivo Nº 2 mL. 1 1 1
Mezclar por agitación suave e incubar x 5 minutos a
37ºC Luego agregar
Agua destilada mL 10 10 10
5. Cuestionario.
a. Explique porque para obtener mg/dL, se multiplica por 60.
b.¿ Cómo se convierte el N uréico en urea y, viceversa
c. Grafique la interrelación del ciclo de la urea con el ciclo de
Krebs.
d.Indique que enzimas actúan en la mitocondria, y cuáles en
el citoplasma, en el ciclo de la úrea.
e.Se requiere de ayuno para realizar la determinación de
úrea en sangre.
6. Fuentes de Información.
a. Devlin T homas M. Bioquímica con Aplicaciones
Clínicas. tomos I y II. Barcelona. E Reverté Colombiana.
S A. 2000.
b. David LN, Cox M M. Lehninger Principios de Bioquímica .
Barcelona. Omega. 2001.
c. Lozano – Galindo. Bioquímica para Ciencias de la
Salud. España. McGraw - Hill- Interamericana.
d. Luque L y Hermoza A. Biología Molecular e Ingeniería
Genética. Barcelona. Hartcourt. 2001.