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Asignatura: Genética
Fecha: 27/07/2017
Período
Abril - Agosto 2017
I. TEMA
II. INTRODUCCIÓN
El ADN es una molécula formada por dos cadenas de polinucleótidos unidas por puentes
de hidrógeno. Los nucleótidos que presentan son: la timina, adenina, guanina y la citosina;
las cuales forman los genes, que de acuerdo a la secuencia de orden en que se encuentran
determinan las características biológicas de todo ser vivo. Además esta molécula de vida
está constituido por un azúcar desoxirribosa y un grupo fosfato.
Por otro lado, el ADN al ser una molécula larga puede en conjunto ser visualizada y
además al estar en todas las células de todos los organismos, puede ser extraído con
facilidad de cualquier tejido, para ello se requiere un procedimiento que implica la ruptura
de las células, la separación del ADN de otros compuestos celulares y por último la
precipitación de esta molécula de vida (Mogrovejo, 1999).
III. OBJETIVOS
V. MATERIALES Y MÉTODOS
PROTOCOLO # 1
EXTRACCIÓN DEL ADN HUMANO DE LAS CÉLULAS DE LA MUCOSA BUCAL
Materiales
Tubos de ensayo grandes Cernidor
Espátula Jeringuilla de 10 cc
Gotero Agua destilada
Bicarbonato de sodio Alcohol etílico al 96% (frio)
Detergente liquido Sal común
Procedimiento
*Solución de extracción
1. En un vaso de precipitación colocar:
120 ml de agua destilada
1.5 gr de sal de mesa
5 g de bicarbonato de sodio
5 ml de detergente liquido
2. Mezclar lentamente
Resultado final
PROTOCOLO 2
EXTRACION DE ADN DEL HIGADO DE POLLO
MATERIALES:
Mortero o licuadora 100 ml Agua
Agitador 2 gr Bicarbonato de sodio
Jeringuilla 5 ml Alcohol
Tubo de ensayo 2 ml Detergente
Palillos de dientes 10 gr Cloruro de Sodio
Vaso de precipitación
Hígado de pollo
Cuchara
PROCEDIMIENTO:
1) Preparación de la solución tampón: Coloque la sal en un vaso de precipitación
y añadir el bicarbonato de sodio, en el vaso luego colocar el agua y finalmente se
coloca 5ml del jabón de lavavajillas y se homogenizó la solución.
2) Preparación de la Muestra: cortar en pedazos pequeños el hígado y aplastar en
un mortero agregando un poco de agua, una vez obtenida la muestra, se procedió
a cernir en un vaso el líquido resultante de aplastar los materiales.
3) Separación del ADN: Agregar en un nuevo vaso, 5ml de la muestra con 10ml de
la solución tampón y agitar durante 2 minutos, posteriormente se coger 5ml de la
nueva mezcla y se colocó en un tubo de ensayo, además en el tubo de ensayo se
añadió 10 ml de alcohol.
4) Visualización del ADN: En el tubo de ensayo quedó dividido una capa de la
muestra con una capa de alcohol, se introdujo un palillo hasta el nivel donde quedó
la separación y, se observa el ADN.
Imagen 2: Resultado final de la extracción de ADN por el método planteado.
PROTOCOLO 3
EXTRACCIÓN DE ADN DE UN PLÁTANO
MATERIALES:
- Plátano - Agua destilada
- Piña - Etileno 95% (dos horas congelador)
- Papel filtro - Detergente
- Sal - Tenedor
- Balanza - Tubos de ensayo
- Probeta - Embudo
- Varilla agitadora - Colador
- 2 Vasos de precipitación - Termómetro
PROCEDIMIENTO:
1. Trituración del plátano: Con la ayuda de un tenedor cortamos unos 100g de
plátano y lo troceamos hasta obtener porciones muy pequeñas. Después
aplastamos todos los trozos para formar una pasta más o menos homogénea.
Depositamos esta pasta en un vaso de precipitación.
2. Preparación de la solución de extracción: Primero pesamos con la balanza 3g
de sal. Con una probeta preparamos 100ml de agua destilada y 10ml de detergente.
A continuación lo mezclamos todo en otro vaso de precipitación procurando no
formar muchas burbujas.
3. Detergente + plátano: Vertemos el detergente en el vaso de precipitados que
contiene el plátano y lo mezclamos todo procurando de nuevo no hacer muchas
burbujas.
4. Baño caliente: Ponemos agua a calentar y con un termómetro medimos la
temperatura hasta que alcance unos 60ºC aproximadamente. Después
introducimos el vaso de precipitados con la mezcla y vamos removiendo durante
unos 15 minutos con la ayuda de una barita agitadora. Hay que procurar mantener
la temperatura en los 60ºC y no hacer muchas burbujas.
5. Baño frio: Preparamos un recipiente con agua y hielo e introducimos el vaso de
precipitados. Lo dejamos en estas condiciones durante 5 minutos removiendo
constantemente.
6. Preparación del zumo de piña: Mientras esperamos que pasen los 5 minutos del
baño frío preparamos el zumo de piña. Troceamos una piña y trituramos la parte
central o corazón. Filtramos la pasta con un colador para obtener el zumo.
7. Filtración de la solución: Preparamos un vaso de precipitación con un colador
encima y vertemos el contenido del vaso de precipitados. A continuación
preparamos un embudo con un papel de filtro encima y vertemos la solución
obtenida anteriormente recogiendo el líquido en un tubo de ensayo. Este segundo
proceso puede tardar unos minutos.
8. Solución + zumo de piña: Cogemos 1ml de zumo de piña y lo añadimos a 5ml
del extracto en un tubo de ensayo. Dejamos que actúe el zumo en la solución de 2
o 3 minutos.
9. Solución + alcohol: Sacamos el alcohol del congelador y preparamos en un tubo
de ensayo aproximadamente el mismo volumen de alcohol que de la solución de
interés.
10. Observación del DNA: Vertemos muy lentamente el alcohol en el tubo de ensayo
con la solución. Al cabo de pocos segundos seremos capaces de observar tres
capas bien diferenciadas. Encima de todo estará el alcohol, debajo de todo estarán
los restos celulares (membranas, orgánulos) del plátano y los otros componentes
de la solución y, en la interfase observaremos una especie de hilos blancos
rodeados de burbujas. ¡Eso es el ADN!
PROTOCOLO 4
EXTRACCIÓN DE ADN DE LAS FRESAS
MATERIALES:
- Fresas - Vaso de precipitación
- Bolsa de plástico - Etileno 95% (dos horas congelador)
- Papel filtro - Detergente
- Sal - Varilla agitadora.
- Balanza - Tubos de ensayo
PROCEDIMIENTO:
1. Tomar 2 fresas y extraer las hojas verdes.
2. Colocar las fresas en una bolsa de plástico y ciérrela, hacerlas puré con la mano
suavemente alrededor de 2 minutos.
3. En un vaso de precipitación preparar el líquido de extracción del ADN, mezclar
10 ml de detergente, 3 gr de sal y 100 ml de agua destilada.
4. Añadir 10 ml del líquido de extracción de ADN a la bolsa que contiene las fresas.
5. Volver a cerrar la bolsa y continuar haciéndolas puré suavemente por otro minuto,
evitar crear demasiadas burbujas de jabón.
6. Colocar el papel filtro en otro vaso de precipitación, abrir la bolsa y vertit el
líquido de las fresas en el filtro. Se puede exprimir suavemente el resto del líquido.
7. A continuación verter sobre la pared interna del vaso una cantidad de alcohol que
equivalga a la misma cantidad que haya del líquido de las fresas. No lo mezcle ni
lo agite. Con este paso acaba de aislar el ADN del resto del material.
8. En unos pocos segundos observe cómo se desarrolla una sustancia turbia y blanca
en la capa superior, por encima de la capa del extracto de las fresas.
VI. CONCLUSIONES