EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO E INHIBIDORES EN LA VELOCIDAD

DE REACCIÓN
2OV1 SECCIÓN I
ANDRÉS JERÓNIMO JESSICA
REA ORTEGA GRECIA FABIOLA

INTRODUCCIÓN RESULTADOS

La eficacia de actuación de una enzima se mide en Tabla 1. Efecto de la concentración de sustrato sobre la
función de la velocidad con que el sustrato se actividad de la invertasa
Tubo Abs (nm) [AR] Vo (UI) [S]
transforma en producto. Moles/L
T 0 0 0 0
Un aumento de sustrato mantiene fija la 1 0.292 2.24 0.22 0.00002
concentración de la enzima, produciendo al 2 0.456 3.66 0.36 0.00004
principio un incremento considerable en la 3 0.460 3.69 0.36 0.00006
velocidad de la reacción; sin embargo, a medida 4 0.419 3.34 0.33 0.0001
que se va aumentando la concentración del 5 0.467 3.75 0.37 0.00016
sustrato, la velocidad de la reacción empieza a 6 0.449 3.60 0.36 0.0002
decrecer, hasta que finalmente cuando la
Tabla 2. Resultados para la prueba de Inhibición
concentración del sustrato es elevada, no se
enzimática.
observa cambio en la velocidad. Abs (nm) [AR] Vo (UI) [S]
Tubo
Moles/L
T 0 0 0 0
Existen dos tipos de inhibidores enzimáticos:
1 0.281 2.14 0.214 0.00002
irreversibles, son aquellos que se combinan
2 0.385 3.04 0.304 0.00004
covalentemente a un grupo de la enzima, y los
3 0.353 2.76 0.27 0.00006
reversibles, que se combinan en forma no
4 0.433 3.46 0.34 0.0001
covalente en la enzima, estos se dividen en
5 0.388 3.07 0.30 0.00016
competitivos, no competitivos y acompetitivos. 6 0.459 3.68 0.36 0.0002
La unión de un inhibidor puede impedir la entrada
del sustrato al sitio activo de la enzima y 0.4
obstaculizar que la enzima catalice su reacción 0.35
correspondiente. 0.3
0.25
Vo

OBJETIVOS 0.2
0.15
 Analizar el efecto de la concentración del 0.1
sustrato sobre la velocidad de la reacción 0.05
enzimática. 0
 Determinar la constante de Michaelis- 0 0.00005 0.0001 0.00015 0.0002 0.00025
Menten (Km9 de forma gráfica. [S]
Sustrato Inhibidor
 Determinar el tipo de inhibición
producida por una sustancia (anilina) Figura 1. Relación entre la concentración de sustrato y la
sobre la actividad de la invertasa. velocidad enzimáticas para cada tubo siguiendo el modelo
de Michaelis- Menten para obtener la Constante de
Michaelis (Km).
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Tabla 3. Resultados de Vmax y Km obtenidos a partir de la Tabla 5. Resultados de Vmax y Km a partir de las ecuaciones
interpolación en la Figura 1 para efecto de sustrato e obtenidas en el modelo de Lineaweaver-Burk para la
inhibidor. concentración de sustrato e inhibidor.
Inhibidor Sustrato
Vmax 0.36 0.38 Sustrato Inhibidor
Vmax/2 0.18 0.19 Vmax 0.5938 0.5235
Km 0.000016 0.00002 Km 3.141x10-5 3.5634x10-5

Tabla 4. Resultados inversos de la Velocidad enzimática y CÁLCULOS

concentración de sustrato para efecto de la concentración A partir de la ecuación obtenida de la curva tipo
de sustrato y para efecto de la inhibición enzimática. se calcula la concentración de azúcares
Sustrato Inhibidor reductores para las absorbancias.
Tubo 1/[S] 1/Vo 1/Vo
T 0 0 0 Ecuación de curva tipo: y=0.1156x+ 0.0328
1 50000 4.45 4.65 Despeje: x=(y-0.0328) /0.1156
2 25000 2.73 3.28
3 16666 2.70 3.61 Sustitución: Absorbancia= 0.292
4 10000 2.99 2.88
5 6250 2.66 3.25 X= (0.292-0.0328) /0.1156= 2.24 µM
6 5000 2.77 2.71
Cálculo de Velocidad enzimática

2.24 µM/10= 0.224 UI

6

y = 6E-05x + 1.9101 Cálculo de concentración de sustrato

5
R² = 0.5503
0.2 M------1000 mL
4
X--------- 0.1 mL X=0.00002 M
y = 6E-05x + 1.6838
1/Vo

3 Cálculo de inversos: 1/Vo 1/[S]

R² = 0.5618
2 Cálculo de Vmax y Km a partir del modelo de
Lineaweaver-Burk
1
Ecuación de sustrato: y=6X10-5x +1.6838
0 Ecuación de Inhibidor: y=6x10-5x+1.9101
0 10000 20000 30000 40000 50000 60000
1/[S]
Sustrato Inhibidor Ecuación de Lineaweaver- Burk
1/Vo =(Km/Vmax)(1/S)+ (1/Vmax) ‫؞‬
Linear (Sustrato) Linear (Inhibidor)
Vmax= 1/b Km= m*Vmax
Fig 2. Líneas de tendencia lineal que muestran la relación entre los
inversos de la velocidad enzimática y sustrato de acuerdo con el Vmax= 1/1.6838= 0.593
Modelo de Lineaweaver-Burk. También se encuentran las ecuaciones Km=6X10-5*0.593=3.56
acordes a cada curva.
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DISCUSIÓN El inhibidor reduce la velocidad máxima pero K m

(la afinidad del enzima por el sustrato) sigue
siendo el mismo.
La concentración de sustrato influye en la
velocidad de reacción debido a que cuando éste
se encuentra a mayor concentración, la velocidad CONCLUSIÓN
de reacción aumenta, sin embargo, hay un punto -El inhibidor es de tipo no competitivo.
máximo en el cual la enzima comienza a disminuir -El modelo de Lineaweaver-Burk es mejor al de
su actividad enzimática debido a que ya no hay Michaelis-Menten.
más sustrato con cual reaccionar por lo cual se
desnaturaliza la enzima perdiendo la actividad
BIBLIOGRAFÍA
enzimática.
 Voet, D; Voet, J.G; Pratt, W.C; Gismondi,
La presencia de un inhibidor se puede observar ya
que la enzima se ve afectada por el inhibidor, M.I; Fundamentos de
observando así que hay una competencia entre bioquímica/fundamental of
enzima vs inhibidor, debido a que estos cuentan biochemistry, 2a ed; Medica
Panamericana; España; 2007; pp. 508-
con un Km diferente pero con una misma
509
velocidad máxima, dando como resultado un
 Thomas Peter Benet, bioquímica, Ed
relación competitiva entre enzima-sustrato.
Reverte, 2da Edición, España (1982) PP.
126-127
El tipo de inhibidor es un inhibidor reversible no
competitivo, aquí el inhibidor no se une al mismo
sitio que el sustrato.

El caso más simple de este tipo de mecanismos es

cuando el inhibidor y el substrato tienen la misma
tendencia a unirse al complejo enzima-substrato
o al enzima-inhibidor respectivamente, que al
enzima libre. Es decir KM = KIM y KI = KSI.

Su comparación con la ecuación de Michaelis del

sistema no inhibido indica que, mientras la
constante de Michaelis de ambos sistemas no
varía, la constante catalítica en el caso de
inhibición es más pequeña.