UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA

FACULTADA DE INGENIERIA
E.A.P. INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

“Año del Diálogo y la Reconciliación Nacional”

TEMA
Espectrofotometria
ESTUDIANTE
MENDOZA ESQUIVEL Christian Alexander
CODIGO
0201612014
GRUPO
“A”
CICLO
VI
PROFESOR
ACUÑA DOMINGUEZ Julio Abraham
CURSO
Análisis Instrumental de Productos Agroindustriales

2018
Nuevo Chimbote - Perú
 ESPECTROFOTOMETRIA

I. INTRODUCCION
La espectrofotometría es un método científico utilizado para medir cuánta
luz absorbe una sustancia química, midiendo la intensidad de la luz
cuando un haz luminoso pasa a través de la solución muestra, basándose
en la Ley de Beer-Lambert. Esta medición también puede usarse para
medir la cantidad de un producto químico conocido en una sustancia.
II. OBJETIVOS
 Determinar la longitud de onda adecuada (longitud de onda de
máxima absorción) y los niveles de concentración también
adecuados para el análisis cuantitativo por espectrofotometría.
III. FUNDAMENTE TEORICO
La espectrofotometría es uno de los métodos de análisis más usados, y se
basa en la relación que existe entre la absorción de luz por parte de un
compuesto y su concentración. Cuando se hace incidir luz monocromática
(de una sola longitud de onda) sobre un medio homogéneo, una parte de
la luz incidente es absorbida por el medio y otra transmitida, como
consecuencia de la intensidad del rayo de luz sea atenuada desde Po a P,
siendo Po la intensidad de la luz incidente y P la intensidad del rayo de luz
transmitido. Dependiendo del compuesto y el tipo de absorción a medir,
la muestra puede estar en fase líquida, sólida o gaseosa. En las regiones
visibles y ultravioleta del espectro electromagnético, la muestra es
generalmente disuelta para formar una solución.
Cada sustancia tiene su propio espectro de absorción, el cual es una curva
que muestra la cantidad de energía radiante absorbida, Absorbancia, por
la sustancia en cada longitud de onda del espectro electromagnético, es
decir, a una determinada longitud de onda de la energía radiante, cada
sustancia absorbe una cantidad de radiación que es distinta a la que
absorbe otro compuesto.
 Figura 1. Espectro de absorción de dos compuestos diferentes

LEY DE LAMBERT

Esta ley establece que cuando pasa luz monocromática por un medio
homogéneo, la disminución de la intensidad del haz de luz incidente es
proporcional al espesor del medio, lo que equivale a decir que la intensidad
de la luz transmitida disminuye exponencialmente al aumentar
aritméticamente el espesor del medio absorbente

Figura 2. Ley de Lambert

𝑷
= 𝒆−𝒌𝒃
𝑷𝟎
Po: Intensidad de la luz incidente
P: Intensidad de la luz transmitida
b: Espesor del medio absorbente
k: Constante, cuyo valor depende de la naturaleza
del soluto, de la longitud de onda de la luz
incidente, del espesor del medio absorbente y
de la naturaleza del medio.
TRANSMITANCIA
Es la razón entre la luz monocromática transmitida (P) por una muestra y
la energía o luz incidente (Po) sobre ella.
ABSORBANCIA
Se define como la cantidad de energía radiante absorbida por una sustancia
pura o en solución.
IV. MATERIALES Y METODOS
MATERIALES
 Espectrofotómetro UV – VIS – Marca Tuner
 Celda de Cuarzo
 Fiolas de 250 ml, 100 ml y 25 ml.
 Pipetas volumétricas de 25 ml, 10 ml y 5 ml.
 Embudo de vidrio
 Papel filtro
 Papel Tissue
 Anaranjado de metilo

MÉTODOS
A. DETERMINACION DE LA LONGITUD DE ONDA DE
MAXIMA ABSORCIÓN
 Pesar 0.1 gramos de anaranjado de metileno.
 Colocar a una fiola de 100 ml. Y aforar con Agua destilada.
 Hacer diluciones de 1.0 ppm, 1.5 ppm, 2.0 ppm, 3.0 ppm
 Preparar Blanco
 Leer la absorbancia vs longitud de onda desde 400 – 700 nm.
 Graficar la absorbancia vs la longitud de onda para cada una
de las concentraciones realizadas.
B. DETERMINACION DEL RANGO DE CONCENTRACION
ADECUADO
 Trabajar con max seleccionada.
 Preparar el rango suficiente de concentraciones (hasta donde
se desvié la ley de Beer).
 Leer Absorbancia vs   a max.
 Graficar
 Fijar el rango óptimo o adecuado.
 C. DETERMINACION DEL COEFICIENTE DE EXTINCION
MOLAR
ε= E / cd
Dónde:
ε = Coeficiente de extinción molar.
c = concentración molar
d = espesor de la cubeta
E = Densidad óptica de Extinción.

V. RESULTADOS
ABSORBANCIA VS LONGITUD EN CADA CONCENTRACIÓN
o 1 ppm
Sample-1
3

2
Absorbance(Abs)

-1
200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100
Wavelength(nm)

o 2 ppm
Sample-1
3

2
Absorbance(Abs)

-1
200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100
Wavelength(nm)
 o 3 ppm
Sample-1
3

Absorbance(Abs)
1

-1
200 300 400 500 600 700 800 900 1000 1100
Wavelength(nm)

CONCENTRACION V.S. ABSORBANCIA

Concentración (ppm) Longitud de Onda Absorbancia

(nm)
1 338 1.3802

2 330 1.5051

3 330 1.5051

CONCENTRACIÓN VS ABSORBANCIA A
max
1.52
1.5
1.48
1.46
1.44
1.42
1.4
1.38
1.36
0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5
COEFICIENTE DE EXTINCIÓN MOLAR (Ɛ)

 1 ppm
𝐴
ɛ=
𝑙𝑐
1.3802
ɛ=
(1 cm ∗ 0.000998859 g/L)

ɛ = 1381.776607 L/cm.g

 2 ppm

1.5051
ɛ=
(1 cm ∗ 0.001997718 g/L)

ɛ = 753.4096404 L/cm.g

 3 ppm

1.5051
ɛ=
(1 cm ∗ 0.002996577 g/L)

ɛ = 502.2730936 L/cm.g

VI. CONCLUSIÓN
 En un análisis espectrofotométrico obtendremos la transmitancia
la cual nos indica la cantidad de energía que logró atravesar el
medio absorbente y la absorbancia que expresa la cantidad de
energía que quedó absorbida en las moléculas del medio
absorbente.
 Existe una relación inversamente proporcional entre la intensidad
de un medio y la longitud de onda a la que es expuesta el medio.
VII. CUESTIONARIO
1) Qué tipo de soluciones no cumplen la ley de Lambert- Beer.
  La ley de Bourguer – Lambert – Beer predice, para una longitud
de onda constante y paso óptico fijo, una relación lineal entre
Absorbancia y Concentración con pendiente e l b e intercepto cero.
Sin embargo esta ley sólo se cumple estrictamente o está limitada
para soluciones diluidas, generalmente concentraciones menores o
iguales que 10-2 M. La suposición de que es independiente de la
concentración de una sustancia para una longitud de onda dada,
sólo se cumple en soluciones diluidas ya que ԑno es constante para
soluciones concentradas, sino que depende del índice de refracción
de la solución.
2) De acuerdo al color de la sustancia analizada, ¿cuál sería la
longitud de onda más apropiada para realizar la lectura
espectrofotométrica?
El anaranjado de metilo es visible entre 581 – 618 nm y la longitud
más apropiada es 490nm

3) Consulte aplicaciones industriales de espectrofotometría de

absorción.
Se puede utilizar para analizar la concentración de más de 62 metales
diferentes en una solución. También se emplea en análisis de aguas
pues se puede determinar los metales pesados como el cromo y
plomo; también en los suelos para determinar la fertilidad de los
mismos y la presencia de residuos de placiguidas; en los alimentos
también los vemos, puesto que se utiliza para determinar la cantidad
de potasio en productos como la leche en polvo, frutas, etc. y en la
arqueología, es de utilidad para establecer los elementos metálicos a
través de una tabla periódica. Por tanto, podemos decir que la EAA,
es el método de análisis óptico más usado en las investigaciones
químicas y biológicas, puesto que es el más efectivo, el cual ha sido
de mucha ayuda a personas como físicos, químicos e ingenieros para
hallar valores muy precisos.
Se utiliza:
 Identificar compuestos por su espectro de absorción.
  Conocer la concentración de un compuesto en una disolución.
Determinar la glucosa en sangre en un laboratorio de análisis
químico.
VIII. BIBLIOGRAFIA
Borfost R. y Scholz, M.1964. Spektroskopische Methoden in der
organischen. Chemie. Berlin. Sánchez, D.1995.
Walton y Reyes. 1978. Análisis químico e instrumental moderno.
Editorial Reverte S.A. España.