I.

INTRODUCCIÓN

El mantenimiento de la vida animal depende de la disponibilidad de energía química en forma de

alimentos. Sin embargo, la ingesta de los alimentos por los organismos no es constante, ni
tampoco lo es la demanda de energía. Ello obliga a almacenar las sustancias en exceso
metabolizables cuando son abundantes para ser utilizadas en caso de necesidad. La glucosa se
almacena en los animales en forma de glucógeno, en tanto que las plantas lo hacen en forma de
almidón. El papel funcional del glucógeno es constituir una reserva de glucosa capaz de ser
movilizada rápidamente.

En el musculo, el glucógeno aparece en forma de partículas de peso molecular superior a 2x107

daltons, en el hígado, estas partículas forman agregados que pueden llegar a superar los 109
daltons. Esta variabilidad en el tamaño indica que las moléculas de glucógeno no son homogéneas.
Dichos agregados (gránulos de glucógeno) contienen las enzimas reguladoras de las vías de
síntesis y degradación del polisacárido. Sin embargo, a diferencia de lo que ocurre en los
complejos multienzimáticos, en el granulo de glucógeno las enzimas no están presentes en
proporciones definidas y constantes.

Desde un punto de vista cuantitativo, la mayor parte del glucógeno del organismo se encuentra en
el hígado y en los músculos, aunque existe en todos los tejidos. En general, El contenido de tejido
hepático varía en gran medida según la dieta, mientras que el del musculo lo hace con el ejercicio.
En un animal bien alimentado el contenido del glucógeno hepático es de aproximadamente 65
g/kg de tejido. Este valor puede ser mayor después de la ingestión de gran cantidad de
carbohidratos. Por el contrario, disminuye en los periodos comprendidos entre las ingestas, sobre
todo después del ayuno nocturno, llegando a ser muy bajo, en el grupo prolongado.

El musculo esquelético suele contener alrededor de 14 g de glucógeno por kg de tejido. Este valor
no varía apenas con el desayuno nocturno o con una dieta rica en carbohidratos, sin embargo, el
contenido disminuye hasta valores 100 veces inferiores después del ejercicio prolongado.
II. RESULTADOS

Tubos
Reactivos (mL)
Blanco Estándar Muestra
Agua destilada 0.25 mL - -
Estándar de glucosa
- 0.25 mL -
5 mg%
Muestra problema - - 0.25mL
Colocar en Baño María con hielo por 5 minutos y añadir gota a gota reactivo de antrona.
Reactivo de antrona 1.5 mL 1.5 mL 1.5 mL
Colocar los tubos en Baño María hirviente por 10 minutos, luego enfriar y leer a 620nm.
Mesa 1 0.268 0.023 (Error)
Mesa 2 0.201 0.057
Mesa 3 0.253 0.020 (Error)
Absorbancia620nm Mesa 4 0.263 0.042
Mesa 5 0.218 0.06
Mesa 6 0.289 0.061
Promedio 0.249 0.055

 Hallando la concentración de la muestra

Sol. Estándar 5mg%

5 mg ---------------- 100 mL 125x10-4 mg ------------- 1.75 mL

125x10-4 mg ------- 0.25 mL 7.14x10-3 mg ------------- 1 mL

CST = 7.14x10-3mg

CM = CSTxAM/AST

CM = 1.58x10-3 mg/mL

 Hallando la cantidad de glucosa contenida en 0.5 gramos de hígado

1.58x10-3 mg ------------ 1 mL 2.77x10-3 mg ------------- 0.25 mL

2.77x10-3 mg ------------ 1.75 mL 1.108 mg ------------------ 100 mL

Se hallaron 1.108 mg de glucosa en 0.5 gramos de hígado

 Multiplicando por el factor de conversión (0.9) para pasar a glucógeno y determinar el

porcentaje de glucógeno obtenido

0.9x1.108 = 0.9972 mg glucógeno

0.5 gr Hígado ---------------- 100%

 0.9972x10-3 gr --------------- X

X = 0.199 %

III. DISCUSIONES

Las propiedades físicas y químicas de muchos polisacáridos neutros difieren bastante de otras
biomoléculas, para permitir su fácil aislamiento. El glucógeno se liberó del hígado por
calentamiento con una base fuerte, hasta la destrucción total del tejido. Al añadir alcohol etílico al
homogeneizado anterior, precipitan numerosas sustancias de peso molecular elevado, como las
proteínas y los ácidos nucleicos, en tanto que el glucógeno continúa disuelto. El glucógeno puede
separarse de los monosacáridos y otros compuestos hidrosolubles por precipitación con alcohol,
porque los polisacáridos son mucho menos solubles en alcohol acuoso que los monosacáridos. La
determinación del grado de pureza de la preparación obtenida se pudo realizar mediante el
tratamiento con antrona y comparando con una solución estándar de glucógeno. El método de
aislamiento utilizado en este protocolo se basa en las propiedades químicas del glucógeno no
compartidas por otras sustancias presentes en el hígado.

- Según González (2007) Uno de los métodos que se utiliza para determinar glucógeno es el
método enzimático de la glucosa oxidasa – peroxidasa (GOD – POD), que es un método muy
específico y sensible. La glucosa oxidasa (β-D-glucosa-oxígeno oxidorreductasa: GOD) transforma
la β-D-glucosa en ácido D-glucónico, liberando agua oxigenada. Esta reacción se acopla con una
reacción redox catalizada por una peroxidasa, de modo que se produce un sustrato coloreado. El
sustrato coloreado presenta un máximo de absorbancia a λ = 505 nm. Aplicando la ley de Beer -
Lambert, y teniendo en cuenta que la concentración de la cromobase es directamente
proporcional a la concentración de glucosa libre, es posible determinar la concentración inicial de
glucosa en la muestra. Para ello es necesario determinar la absorbancia de una solución de glucosa
de concentración conocida (patrón de glucosa), o bien realizar una recta patrón con diferentes
concentraciones de glucosa.

IV. CONCLUSIONES

 Para la determinación de glucógeno hepático se tiene que transformar el glucógeno a

glucosa mediante una hidrolisis alcalina y su posterior reacción con el reactivo antrona;
aunque, tranquilamente se pudo haber utilizado el reactivo de Somogy.
 Para realizar los cálculos no fue necesario hacer una curva de calibración, en esta ocasión
se utilizó el factor de calibración, que es el promedio aritmético de las proporciones que
hay entre la concentración y absorbancia de los tubos de trabajo.
 La concentración obtenida fue la de glucosa, mas no la de glucógeno, por lo cual se
multiplico por 0.9 (factor de conversión glucosa-glucógeno) para obtener la concentración
de glucógeno.
 De acuerdo con nuestros resultados obtenidos en nuestra mesa de trabajo concluimos que
la concentración de glucógeno en el hígado es el 0.128% del peso del hígado.

V. BIBLIOGRAFÍA

- González, V. 2007. Técnicas espectroscópicas de Laboratorio. Editorial Reverté. Sevilla,

España.
- Lehninger, Albert L. "Bioquímica. Las Bases Moleculares de la Estructura y Función
Celular". 1991. 2da. Edición. Editorial: Ediciones Omega S,A. Barcelona. Páginas:
272,443,444,445,659,660,661,823,824,825,826.
- Mathews, Christopher K., Van Holde, K.E. "Bioquímica". 1998. 1a. edición. Editorial: Mc
Graw Hill –Interamericana. Madrid, España. Páginas:
521,522,523,626,627,628,629,630,631,632,633.
- Murray, Robert K., Granner, Daryl K., Mayes, Peter, A., Rodwell, Víctor W.F. "Bioquímica
de Harper". 1992. 14a. edición. Editorial: El Manual Moderno. Páginas:
132,133,150,164,172,173,174,175,176,177,178,179,647.
4) ¿Qué es el glucógeno y cuál es su estructura química?
El glucógeno es la forma principal de almacenaje de carbohidratos en los animales, se
encuentra en proporción mayor en el hígado (hasta 6%) y en el músculo, donde rara vez
excede de 1%. Sin embargo, debido a su masa mayor, el músculo almacena tres a cuatro
veces la cantidad de glucógeno que tiene el hígado como reserva. Al igual que el
almidón, es un polímero ramificado de alfa-glucosa.

En las células hepáticas, el glucógeno

aparece en forma de grandes gránulos,
constituidos por agrupaciones de simples
moléculas, muy ramificadas, por lo que
tiene un peso molecular muy elevado. A
semejanza de la amilopectina, el
glucógeno es un polisacárido de la D-
glucosa con enlaces alfa 1-4, sin embargo,
está más ramificado, y su molécula es más
reducida que la amilopectina; las
ramificaciones aparecen cada 8 a 12
residuos de glucosa.

El glucógeno puede aislarse de

los tejidos animales digiriéndolos con disoluciones calientes de KOH en las que los
enlaces no reductores alfa 1-4 y alfa 1-6 son estables.

La función del glucógeno muscular es actuar como una fuente de fácil disponibilidad de
unidades de hexosa para la glucólisis dentro del propio músculo. El glucógeno hepático
sirve en gran parte para exportar unidades de hexosa para la conservación de la glucosa
sanguínea, en particular entre comidas.

Después de 12 a 18 horas de ayuno, el hígado casi agota su reserva de glucógeno. El

glucógeno muscular sólo disminuye de manera significativa después de ejercicio vigoroso
prolongado. Puede inducirse un almacenaje mayor de glucógeno muscular
con dietas ricas en carbohidratos después de la depleción por el ejercicio. Las
"enfermedades por almacenamiento de glucógeno" son un grupo de trastornos
hereditarios que se caracterizan por movilización deficiente del glucógeno y depósito de
formas anormales del mismo, conduciendo a debilidad muscular e inclusive muerte.

5) ¿Por qué se realiza la hidrólisis básica?

El tejido hepático en presencia de una hidrólisis alcalina destruye a las proteínas y el

glucógeno queda intacto. El glucógeno es precipitado por su baja solubilidad con el
alcohol, luego se resuspende el glucógeno y se cuantifica expresado en mg de glucosa
por gramo de tejido hepático (previa hidrólisis ácida con ácido sulfúrico). El Ácido
Sulfúrico del reactivo Antrona hidroliza al glucógeno en unidades de glucosa, la cual es
convertida en hidroximetilfurfural por el mismo ácido y reacciona con antrona para dar
un compuesto coloreado.

6) ¿Por qué se emplea el ácido sulfúrico en la preparación del reactivo de

antrona?

El medio ácido hidroliza el enlace glicosídico de los oligosacáridos y los monosacáridos

resultantes reaccionan con la antrona, produciendo un color verde – azulado