Zona Centro Bogotá Cundinamarca ZCBC.

Escuela de Ciencias Básicas Tecnología e Ingeniería ECBTI.

Especialización en procesos de alimentos y biomateriales

Práctica Biotecnología alimentaria

IBETH RODRIGUEZ
TUTORA
Ingeniera de alimentos
Msc. Ciencia y tecnología de alimentos

José Acevedo y Gómez

 PRACTICA 1.

RECUENTO DE CELULAS
VIABLES EN CONDICIONES DE
ESTRÉS
Cinética de Crecimiento microbiano

Cuantificación
Turbidimetría
Peso seco

Recuento en
placa
Práctica de Cinética de crecimiento en condiciones de
estrés

Levadura

96 h 72 h 48 h 24 h

Recuento en cámara Nebauer

1,5% v/v 3,5% v/v 5,5% v/v 1,5 mL de muestras diluidas

+ azul de metileno
Adicionar alcohol en diferentes concentraciones

1,5% v/v 3,5% v/v 5,5% v/v

Incubar 24 h Realizar diluciones en solución salina 10-1, 10-2, 10-3

• Células viables: borde redondo y
brillantes

• 1 cuadrado : 16 cuadros
1
𝑐𝑒𝑙𝑢𝑙𝑎𝑠∗𝑓𝑑
• Células/mL =
1𝑚𝑚∗1𝑚𝑚∗0.1 𝑚𝑚∗5/25

• El azúl de metileno colorea las no

viables
Cuantificación de Biomasa

Eliminar sobrenadante
Levadura (0.3g) + 150ml 10ml Solución
Extracto de malta (5 Centrifugar 2000rpm x
días) 20mn

Precipitado + 30ml
Solución isotónica
5ml Solución λ= 600nm (Abs 1.7 – 2.0)
Peso de la biomasa Secado 100°c x 24h

Solución levadura Solución

Tubo
concentrada (ml) isotónica (ml)
0 0 1
1 0,1 0,9
2 0,2 0,8
3 0,3 0,7
4 0,4 0,6
5 0,5 0,5
λ= 600nm 10 diluciones
6 0,6 0,4
7 0,7 0,3
8 0,8 0,2
9 0,9 0,1
10 1 0
 Cuantificación de Biomasa

r2 > 0.97
Abs 0-1

1,5% v/v 3,5% v/v 5,5% v/v

10 mL

[ ] Biomasa seca
(g/L)

V1C1=V2C2

λ= 600nm Precipitado + ? ml Solución isotónica, Eliminar sobrenadante

revisar dilución
 PRACTICA 2.

Consumo de sustrato
Requerimientos de carbohidratos

Procesos de
Lactosa
fermentación
Carbohidratos
Glucosa

Sacarosa

Celulosa
Cuantificación de azúcares

Oxidación reducción

Azúcares
Acido dinitrosalicílico
reductores
Práctica de Consumo de sustrato – Curva de calibración

Tubo Solución de glucosa Agua (mL)

(mL)
0 0 1
1 0,1 0,9
2 0,2 0,8
3 0,3 0,7
4 0,4 0,6
5 0,5 0,5
6 0,6 0,4
Solución Glucosa (0,3g) 10 diluciones 7 0,7 0,3
+ 100ml de Agua 8 0,8 0,2
9 0,9 0,1
10 1 0

λ= 600nm Adicionar 5ml Agua Adicionar 1ml DNS

Baño de hielo x 5mn
Calentamiento en baño
maría (Ebullición ) x
10min

Realizar por duplicado

Cálculos curva de calibración

Considerar:

• Dilución inicial de glucosa (0.2g/100ml)=

concentración inicial
• Cada dilución
• C1V1=C2V2
Abs 0-1

r2 > 0,98

Ecuación de la curva de calibración

Y = mx + b
Y= abs
mg glucosa / mL m=pendiente
x = concentración
b=intercepto
Práctica de Consumo de sustrato – medición muestras

Muestras diluir ?µL Adicionar 1ml DNS

en 980 µL agua Adicionar Agua de
Calentamiento en Baño de hielo x 5mn acuerdo a la
baño maría (Ebullición absorbancia
Y = mx +b ) x 10min
x= Y-b/m
X = concentración mg
glucosa/mL

Factor de dilución = 980 µL

mg λ= 600nm
glucosa/ Absorbancia a los
mL 300 min < 1

Realizar por duplicado

tiempo
 PRACTICA 3.
Producción de etanol a
partir de residuos o
subproductos de frutas
 Material más
abundante

Hidrolisis Hidrólisis ácida

enzimática o alcalina

Pretratamientos Pretratamientos
fisicoquímicos biológicos
 Problemas
biocombustibles
ambientales

Fuente
renovable y
abundante
Producción de etanol a partir de residuos o subproductos
de frutas

Secar 24 h a 100 °C

180 15

Adicionar 2 g de
sulfato de calcio
Adicionar 300 mL Moler
NaOH 0,1N

Separar Adicionar H2SO4

5% (100mL / 50 g)
121°C 15 min Extraer el jarabe
al sólido
Producción de etanol a partir de residuos o subproductos
de frutas

Ajustar pH Realizar
Adicionar 0,002 g fosfato de
a 5,0 con cuantificación de
amonio - (NH4)3PO4 y urea
NaOH 5 N azúcares (usar
20µL)

Diluir hasta el 30% y Incubar en

adicionar Levadura 1 anaerobiosis a 30°C y Realizar destilación Medir concentración
% P/V por 12 horas de alcohol