TÉCNICAS ANALÍTICAS USADAS

EN EL CONTROL DE CALIDAD DE
PRODUCTOS FARMACÉUTICOS

1
 CLASIFICACION DE LAS TÉCNICAS ANALÍTICAS
Técnicas de separación
 Técnicas cromatográficas
 Electroforesis capilar

Otras técnicas instrumentales

 Espectrofotometría ultravioleta-visible
 Espectroscopía de infrarrojo e infrarrojo cercano
 Análisis termogravimétrico
 Análisis térmico diferencial
 Calorimetría diferencial de barrido
 Volumetría
 Difracción de rayos X
 RMN
 Microscopía óptica
 Rotación óptica
 Polarografía
2
 1. VOLUMETRÍA
 Titulación o valoración ácido-base
(antiácidos)

 Titulación a valoración por retroceso

(antibióticos)

Titulación o valoración por retroceso

 Se añade un exceso conocido de reactivo estándar a la
disolución, y luego se valora el exceso (no se valora el analito).

 Es útil si el punto final de la valoración por retroceso es más

fácil de identificar que el punto final de la valoración normal.

 También se usa si la reacción entre el analito y la sustancia

titulante es muy lenta.
3
 2. ESPECTROFOTOMETRÍA
Es la medida de la cantidad de
energía radiante que absorbe un
sistema químico en función de la
longitud de onda de la radiación, y
las mediciones a una determinada
longitud de onda.

 Espectro ultravioleta (UV)

 Espectro visible (Vis)

4
 CROMATOGRAFIA

Es una técnica capaz de separar compuestos basada en

diferencias de su afinidad por una fase estacionaria y
una móvil.

Sistema Cromatografico: Soluto

Fase Móvil
Fase
Estacionaria
5
 CROMATOGRAFIA
(chroma-color y graphein-escribir)
Los componentes de una mezcla se
disuelven en una fase móvil que se
desplaza a través de una fase Mikhail Tswett
1906
estacionaria.

Cada molécula interacciona en

distinta forma con la fase móvil y la
fase estacionaria.

La interacción depende de las

propiedades físicas de cada
molécula (separación).
6
 PROCESO FÍSICOQUÍMICO QUE RIGE LA
SEPARACIÓN
-Adsorción:
El soluto se adsorbe en la superficie de las
partículas sólidas de la fase estacionaria. Es un
fenómeno superficial, aumentado con la
formación de puentes de hidrógeno.

- Partición o Reparto:
El soluto se equilibra entre el líquido de la fase
estacionaria y la fase móvil, por diferencia de
solubilidad hasta llegar a un equilibrio.
7
- Intercambio Iónico:
Los aniones o cationes se separan en base a una
columna rellena con un intercambiador de iones
(resina).

- Exclusión Molecular, Filtración o Permeación

en Gel:
No existen interacciones entre la fase
estacionaria y el soluto. Se separa por tamaño de
partícula.
CROMATOGRAFÍA DE FILTRACIÓN/PERMEACIÓN EN GEL
Molec. GRANDES  RÁPIDAS

* Avanzan con mayor velocidad a través de

los espacios intersticiales (con f. móvil).

Molec. PEQUEÑAS  LENTAS

* Son retenidas por los poros de las

micropartículas y avanzan con menos
velocidad (con f. móvil).
PERFIL DE ELUCIÓN
APLICACIÓN grande
MUESTRA
pequeña
respuesta del detector

ELUCIÓN

1 2 3 4 5 6 7 8 9
fracción
 Fase Fase Técnica Proceso
estacionaria móvil cromatográfica cromatográfico

Adsorción
Capa fina
Líquida Interc. Iónico
Sólida Columna
Exclu. Molecular
Gas Columna Adsorción

Papel
Líquida Capa fina Partición
Líquida Columna

Gas Columna Partición

10
TERMINOLOGÍA Y PARÁMETROS CROMATOGRÁFICOS
Eluente: así se denomina a la fase móvil portadora de la
muestra.

Eluato: es el término con el que se define la salida del

solvente y el analito.

ELUENTE ELUATO
(entra) columna (sale)
Proceso de elución

Flujo: mide la velocidad de la fase móvil, se expresa como

gasto en volumen (mL/min) o gasto lineal (cm/min).

Cromatograma: Gráfica que expresa la respuesta del

detector en función del tiempo de elución.
11
 TERMINOLOGÍA Y PARÁMETROS
CROMATOGRÁFICOS

Fase normal. Cuando se trabaja con fase

estacionaria polar y fase móvil no polar.

Fase reversa. Cuando se emplea una fase

estacionaria no polar y fase móvil polar.

12
 ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO
Análisis cualitativo: se basa en la medida de parámetros
cromatográficos como tiempos y volúmenes de retención
(identificación).

Análisis cuantitativo: se basa en la medida de alturas o

áreas de picos que se relacionan con la concentración
(cuantificación).

Muestra

Estándar

13
 Los parámetros cromatográficos en análisis cualitativo:
tiempo de retención(tR) y volumen de retención (vR).

Tiempo de retención - TR: tiempo transcurrido desde el

instante de inyección de la muestra al máximo de pico.

Tiempo de retención ajustado T´R: (TR- tM): tiempo que

va desde el pico en el que no se retiene la sustancia hasta
el máximo de elución.

Tiempo muerto – tM: tiempo necesario para que la fase

móvil atraviese la columna.

14
 TIEMPO DE RETENCIÓN

tiempo de retención ajustado = t’r = tr - tm

15
 CROMATOGRAFIA PLANA

Es muy semejante a la cromatografía líquida tanto en

aplicaciones como en funcionamiento.

La fase móvil se mueve por capilaridad, gravedad o bajo

la acción de un campo eléctrico (electro-cromatografía).

a - distancia recorrida por

el analito.
b
a b - distancia recorrida por
el frente del solvente.

16
 Cromatografía en Capa Fina (TLC)

Sembrado:

Puntiforme Banda

Forma de sembrado: Manual (capilares jeringas)

17
 Cualitativa

x x x x x x

Identificación Pureza Ausencia

Cuantitativa Preparativa

x x x x

18
 Fase Estacionaria:

Silica Gel (Oxido de Silicio).

Alumina (Oxido de Aluminio).
Adsorción: Celulosa.
Florisil (Silicato de Magnesio).
Sulfato de Calcio.

Tierras de Diatomea
Exclusión molecular
Sephadex (geles)

19
 Fase Estacionaria:
Acido sulfónico

Intercambio Iónico: RSO2- H+

Catiónicas
Acido carbóxilico

RCO2- H+
Resinas
Ión amonio cuaternario

R3NR+ OH-
Aniónicas
Grupo amina

20
R3NH3+ OH-
 Fase Móvil

Polaridad
COOH Acidos carboxílicos
Alta OH Alcoholes
NH2 Aminas
SH Tioles
CHO Aldehídos
CO Cetonas
COOR Esteres
OCH3 Eteres
Baja Hidrocarburos No Saturados
Hidrocarburos Saturados

21
 Cromatografía en Capa Fina

22
 Revelado
El revelado difiere de acuerdo al objetivo planteado.

Técnica de bañado
Aplicación
Técnica de pulverización

Clasificación de reveladores

Destructivo H2SO4
I2
No Destructivo
Lámpara ultravioleta

23
 Revelado

H2SO4
Generales
Lámpara ultravioleta

Selectivo I2

Ftalato de anilina (azúcares)

Ninhidrina (Amino-ácidos)
Específico Resorcina (Cetosas)
Difenilamina + U.V. 254 (Clorados)

24
 Cromatografía Cuantitativa

Estimación del área de la mancha (por medida, pesada)

Determinación indirecta (raspado y valoración)
Determinación directa (Densitómetro)

Detector Fuente de luz

Placa
cromatográfica

25
 Compuesto a
Polaridad Disolventes Técnica
Cromatografiar
Compuestos Agua
iónicos Metanol
Acidos Etanol
Fenoles Acetona
Alcoholes Piridina
Aminas Eter dietil.
Esteres
Cloroformo
Aldehídos Benceno
Cetonas Tetracloruro
Nitro deriv. de Carbono
Halogeno deriv.
Ciclohexano
Hidrocarburos Eter de
alinfáticos petróleo
26
 CROMATOGRAFÍA SOBRE COLUMNA

Cromatografía Gas - Líquido

Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC)

27
 CROMATOGRAFÍA SOBRE COLUMNA

Cromatografía de Gases (sustancias volátiles).

Cromatografía Líquida de Alta Resolución (HPLC) –

cualquier tipo de sustancias.

28
 Fundamento

Todo el proceso de separación se lleva a cabo en la

columna.

A la salida de la columna existe un detector que detecta

cada componente eluído.

La respuesta adopta la forma de un pico más o menos

Gaussiano.

 Entre más resueltos aparezcan los picos es más eficaz la

separación.
29
 CROMATOGRAFÍA DE GASES

CROMATOGRAFÍA LÍQUIDA
(HPLC)
30
 PICOS CROMATOGRÁFICOS

Cuando se desea cuantificar se debe garantizar que los

picos estén bien resueltos.

Debe distinguirse muy bien el inicio y el final de cada pico

y su máximo.

31
 ANÁLISIS CROMATOGRÁFICO

 Separa
 Identifica
 Cuantifica

Análisis cualitativo:
 Factor de reparto
 Tiempo de retención
 Volúmenes de retención

Análisis cuantitativo:
 Altura de pico
 Área de pico
32
 ANÁLISIS CUANTITATIVO

 Todos los detectores de cromatografía producen señales

que son medidas, registradas e integradas.

 Para HPLC y GC se usan los mismos métodos de

cuantificación.

 En ambas cromatografías, la respuesta depende del tipo

de sustancia por lo que siempre se requieren
estándares.

 Los detectores cromatográficos de una respuesta/unidad

de concentración.
33
INSTRUMENTACIÓN

34
EQUIPO DE HPLC
 FASE ESTACIONARIA
Todos los tipos de cromatografía: modo de alta resolución.
Soporte común: partículas microporosas de sílice (diámetro
de 5 a 10 m.

36
 SOLVENTES
Los solventes utilizados deben ser muy puros (grado
cromatográfico).

Se puede utilizar un solo solvente o mezcla de solvente

(elución isocrática).
Se puede cambiar continuamente de composición del
disolvente (elución por gradiente).

37
 BOMBAS
La calidad de una bomba es
determinada por el grado de
estabilidad y reproducibilidad del
flujo que genera.

Se trabaja hasta 10 mL/min a

presiones hasta de 40 Mpa (400
atm).

38
 Inyector Manual (Rheodyne): Válvula de Inyección

39
 DETECTORES PARA HPLC

Se usan dispositivos que sean capaces de medir una

propiedad que responda a la concentración de la
sustancia a analizar.

TIPOS DE DETECTORES

Universales: miden cualquier cambio producido en la

fase móvil.

Otros: miden una propiedad de los solutos.

40
 DETECTOR ULTRAVIOLETA

 Es el detector más utilizado (muchos solutos absorben

luz UV).

 El sistema más simple emplea la emisión a 254 nm de

una lámpara de mercurio y detección a una sola longitud
de onda.

 También se utilizan una lámpara de deuterio y un

monocromador para mediciones a longitud de onda
variable.
 DETECTOR DE ÍNDICE DE REFRACCIÓN

Es casi universal, responde a casi cualquier soluto.

La sensibilidad es unas mil veces menor que la de un

detector ultravioleta, y no es útil en gradiente.

DETECTOR ELECTROQUÍMICO

Es bastante selectivo, porque sólo ciertos analitos se

oxidan o se reducen con facilidad.

Pueden detectarse por oxidación: fenoles, aminas

aromáticas, peróxido y mercaptanos. Y por reducción:
cetonas, aldehídos y nitrilos.
42
 OTROS DETECTORES

Límite de ¿Util con

Detector detección gradiente?
ultravioleta 0.1 - 1 si
índice de refracción 100 - 1000 no
elctroquímico 0.01 - 1 no
fluorescencia 0.001 - 0.01 si
conductividad 0.5 - 1 no
espectrofotometría de masa 0.1 - 1 si
infrarrojo de tranformada de Fourier 1000 si

43