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Les microalgues
Usines cellulaires
productrices de molécules
commerciales recombinantes
> Le champ d’application des microalgues a long- Jean-Paul Cadoret, Muriel Bardor, Patrice Lerouge,
REVUES
temps été contenu dans les domaines de l’aqua- Morgan Cabigliera, Vitalia Henriquez, Aude Carlier
culture, de l’alimention pour animaux d’élevage,
voire de complément pour l’alimentation humaine.
Les récents progrès accomplis en recherche fonda-
mentale et appliquée ont fait entrer les microalgues
dans l’ère de la génomique. Au-delà des compé-
J.P. Cadoret, A. Carlier :
tences acquises dans les systèmes de culture et la
SYNTHÈSE
Laboratoire PBA, IFREMER,
création de photobioréacteurs aux géométries ori- Centre de Nantes,
ginales, la transformation génétique est une réa- rue de l’Ile d’Yeu, BP 21105,
lité pour plusieurs dizaines de microalgues issues 44311 Nantes Cedex 03, France.
de groupes phylogénétiques différents. Un panel jean.paul.cadoret@ifremer.fr
M. Bardor, P. Lerouge :
de vecteurs d’expression génétique est disponible
Université de Rouen,
et de nombreux autres sont en cours d’élaboration. CNRS UMR 6037, IFRMP 23,
Même si des savoir-faire solides restent encore Faculté des Sciences,
à établir pour parvenir à l’expression de quanti- des interférons α et β, 76821 Mont-Saint-Aignan Cedex,
tés raisonnables de molécules recombinantes, les de l’interleukine-1 et France.
avancées actuelles justifient l’intérêt de sociétés du TNF (tumor necrosis M. Cabigliera : Algenics,
de biotechnologies et la création de start-up met- factor) [1]. Cependant, 5 rue d’Auvours,
ces organismes ne peu- 44000 Nantes, France.
tant en œuvre cette stratégie « usine cellulaire »
vent pas assembler des V. Henriquez : Laboratorio
chez les microalgues. < molécules complexes ni de Genética e Inmunología
assurer leur maturation Molecular, Instituto de Biologia,
via des modifications Pontificia Universidad Catolica
L’extraction de substances naturelles constitue la source post-traductionnelles de Valparaiso PO Box 4059,
principale d’approvisionnement pour nombre de molécu- comme les glycosyla- Valparaiso, Chili.
les pharmaceutiques. Dans la mesure où il est possible tions, l’isomérisation
d’identifier les gènes codant pour une molécule, ceux-ci cis/trans des prolines, les modifications de lipidation
peuvent être introduits dans des cellules en culture qui ou de phosphorylation. La présence de corps d’inclusion
deviennent alors autant d’usines cellulaires fabriquant qui rendent difficile la purification, et la production
le produit souhaité. Dans la dynamique créée par l’ar- d’endotoxines complètent cette liste de défauts. En
rivée de nouveaux systèmes d’expression végétaux, conséquence, la production de protéines recombinantes
les microalgues, organismes unicellulaires aquatiques, complexes requiert l’usage de systèmes d’expression
apportent des compléments stratégiques et devraient eucaryotes [2].
constituer à l’avenir un système performant de produc-
tion de molécules recombinantes commerciales. L’obstacle de la N-glycosylation
REVUES
Génome chloroplastique Génome nucléaire
SYNTHÈSE
de protéines étrangères (jusqu’à 47 % des protéines
peut être une limitation
solubles totales)
Les effets létaux des protéines toxiques peuvent L’accumulation de protéines toxiques à l’intérieure
Protéines toxiques
être minimisés grâce à la compartimentation du du cytosol peut provoquer de sérieux effets
et étrangères
chloroplaste pléiotropiques
Tableau I. Comparaison des deux voies d’expression : chloroplastique et nucléaire chez les plantes.
5
Action complémentaire indispensable aux voies chimiques et physiques pour la
dégradation ultime des hydrocarbures dans l’environnement. Figure 2.
REVUES
Microalgue Méthode de transformation Génome Référence
Microalgues vertes
Chloroplastique [21]
Mitochondrial [22]
SYNTHÈSE
Électroporation Nucléaire [23]
REVUES
de deux sociétés aux États-Unis. La stratégie est tangible
Antigène et son succès est exclusivement dépendant de choix judi-
Chlamydomonas cieux en termes d’espèces de microalgues, de molécules
VP1 fièvre aphteuse [44] exprimées et de ressource humaine. ‡
reinhardtii
Tableau III. Principales molécules produites chez les microalgues.
SUMMARY
Microalgae as cell factories
reinhardtii mais aussi chez la diatomée Cylindrotheca fusiformis. Dans producing recombinant commercial proteins
SYNTHÈSE
la voie nucléaire, l’événement le plus courant est une recombinaison dite Extraction of natural substances and chemical synthesis
non homologue. Plusieurs techniques ont tenté de favoriser l’intégration are the main sources of pharmaceutical molecules. When
en agrandissant la taille des vecteurs ou en incluant des marqueurs de possible, one may transfer the gene of the molecule
sélection particuliers, mais dans la plupart des cas l’on observe que in living cells creating individual factories producing
quelques intégrations aléatoires dans le génome (intégrations ectopi- on demand and in a safe way the requested molecule.
ques). Des travaux déterminants sur ce sujet ont été publiés et une piste Today, bacteria, yeast, mammalian cells and plants
pourrait consister à identifier un site silencieux à l’exemple de Chlamy- constitute the main plate-forms for various commercial
domonas reinhardtii. La transformation chloroplastique a été décrite products. Microalgae present numerous advantages and
pour la première fois chez l’algue unicellulaire Chlamydomonas rein- could offer a powerful tool for the production of com-
hardtii. Les promoteurs provenant des gènes chloroplastiques tels rbcL mercial molecules in a near future. ‡
(ribulose bisphosphate carboxylase/oxygènase sous-unité majeure) et
atpA (subunité λ-ATP synthase) de Chlamydomonas reinhardtii sont les
plus fréquents. Les gènes rapporteurs couramment utilisés pour les étu- Légende des figures 1 à 4 (photos) : Phaeodactylum
tricornutum exprimant la Green Fluorescent Protein
des d’expression des gènes dans le chloroplaste sont le gène gfp (green
(© A. Carlier/Ifremer).
fluorescent protein, GFP), luxCt (Luciferase, LUC) et le gène uidA (GUS).
Ces marqueurs fonctionnent dans d’autres groupes d’algues, comme par
exemple la diatomée Phaeodactylum tricornutum. Une telle entreprise REMERCIEMENTS
bénéficie grandement des avancées qu’offre la publication des données Nous tenons à remercier les deux évaluateurs anonymes pour
de séquençages complets des génomes. La liste s’étoffe et nous avons leur aide et critiques constructives
dorénavant accès aux génomes complets de Chlamydomonas reinardtii,
Cyanidoschison merolae, Thalassiosira pseudonana, Ostreococcus taurii RÉFÉRENCES
et Phaeodactylum tricornutum en cours d’annotation et à laquelle nos
équipes participent. 1. Schmidt FR. Recombinant expression systems in the pharmaceutical
industry. Appl Microbiol Biotechnol 2004 ; 65 : 363-72.
2. Hunt I. From gene to protein: a review of new and enabling technologies
Conclusion for multi-parallel protein expression. Protein Expr Purif 2005 ; 40 : 1-22.
3. Sodoyer R. Expression systems for the production of recombinant
pharmaceuticals. Biodrugs 2004 ; 18 : 51-62.
L’industrie pharmaceutique et les sociétés de biotechnologie sont 4. Lee E, Roth J, Paulson JC. Alteration of terminal glycosylation sequences
confrontées à un défi majeur : celui de disposer de systèmes de produc- on N-linked oligosaccharides of Chinese hamster ovary cells by
expression of beta- galactoside alpha 2,6-sialyltransferase. J Biol Chem
tion de protéines recombinantes qui puissent répondre à leurs contrain- 1989 ; 264 : 13848-55.
tes à la fois en terme de qualité, de quantité produite et de rentabilité. 5. Paccalet T, Bardor M, Rihouey C, et al. Synthesis of sialic acid in plants.
Il existe au niveau mondial un déficit de capacité de production de ces Plant Biotech J 2007 ; 5: 12-25.
6. Hamilton SR, Davidson RC, Sethuraman N, et al. Humanization of yeast
protéines recombinantes, car les systèmes actuellement disponibles ne to produce complex terminally sialylated glycoproteins. Science 2006 ;
permettent pas de produire en quantité suffisante des protéines de qua- 313 : 1441-3.
7. Hiatt A, Caffferkey R, Bowdish C. Production of antibodies in transgenic
lité pour un coût raisonnable. Ce besoin va s’accentuer dans les années plants. Nature 1989 ; 342 : 76-8.
à venir. Depuis la fin des années 1990, plus de 280 protéines recombi- 8. Ma JKC, Chikwarnba R, Sparrow P, et al. Plant-derived pharmaceuticals
nantes thérapeutiques, dont une vingtaine d’anticorps monoclonaux, - the road forward. Trends Plant Sci 2005 ; 10 : 580-5.
9. Bardor M, Faveeuw C, Fitchette AC, et al. Immunoreactivity in mammals
sont commercialisées, représentant un chiffre d’affaires estimé à près of two typical plant glyco-epitopes, core alpha(1,3)-fucose and core
de 49 milliards de dollars US en 2006. Ce domaine d’activité connaît xylose. Glycobiology 2003 ; 13 : 427-34.
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