UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR

LABORATORIO DE MANEJO INTEGRADO DE ENFERMEDADES

PROFESOR: Raúl Anguiz

INFORME DE PRÁCTICAS
PRÁCTICA N°: 4
TÍTULO: VISITA A LOS LABORATORIOS DE SENASA-LA MOLINA
INTEGRANTES:

- Anaya, André
- More, Mayra
- Moreno, Paula
- Vargas, Judith
HORARIO DE PRÁCTICAS

DIA : miercoles

HORA: 16:00 – 18:00

FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 20/08/17

FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 27/09/17

LIMA - PERÚ
 I. Objetivos
- Conocer los servicios que brinda SENASA en temas de sanidad vegetal
- Identificar las funciones de cada laboratorio y su servicio al público agrario

II. SENASA
Es el Servicio Nacional de Sanidad Agraria en un organismo de MINAGRI encargado
de la sanidad animal y vegetal del país. Por parte de la sanidad vegetal cuenta con
una Unidad del Centro de Diagnóstico de Sanidad Vegetal (UCDSV) con
profesionales en el diagnóstico de enfermedades.
La metodología de toma y envío de muestras se hace de acuerdo al instructivo ITR-
SARVF-02 aprobado por la DSV / SARVF.
Las muestras serán recibidas por la UCDSV, donde se chequeara su estado de
conservación, peso, cantidad, etc y se hará la verificación de la información reportada
en la solicitud, de encontrarse conforme pasarán al área de clínica para la preparación
y distribución a los laboratorios correspondientes.
La entrega de los resultados de los diagnósticos dependerá del tipo de muestra
(semilla, parte vegetativa: raíz, tallo, hoja, fruto u otro) y del método de ensayo
empleado y cuyos plazos de entrega están especificados en la guía de servicios de
la UCDSV.
Una vez obtenidos los resultados, éstos serán inmediatamente escaneados a las
Direcciones Ejecutivas del SENASA y cada laboratorio emitirá un informe mensual a
la Subdirección de Análisis de Riesgo y Vigilancia Fitosanitaria – SARVF.

III. Laboratorios de Sanidad Vegetal de SENASA

El Centro de Diagnóstico de Sanidad Vegetal del SENASA cuenta con 8 laboratorios
(Laboratorio de Entomología, Micología, Bacteriología, Virología, Nematología,
Malezas, de Análisis de semillas y de Biología molecular), de los cuales el estudio de
5 de estos laboratorios son importantes para el curso de Manejo Integrado de
Enfermedades:

Laboratorio de Micología
Desarrollar procedimientos de diagnóstico para determinar especies o subespecies de hongos
fitopatógenos, en cultivos y semillas de especies hortícolas, forrajeras, industriales, ornamentales,
forestales y frutales.
Las metodologías de diagnóstico son técnicas fitopatológicas tradicionales (observación de síntomas,
montajes de estructuras del patógeno directamente de la muestra y aislamientos en medios de cultivos
selectivos y/o diferenciales, y uso de claves taxonómicas) (SENASA, 2017).
SERVICIOS: Tarifa de Servicio de Diagnóstico y Análisis
Denominación de Precio incluido I.G.V TOTAL (S/) Duración de servicio
servicio

Diagnóstico micológico en 2,32 82,36 6 - 7 dias

semilla

Diagnóstico micológico en 2,38 84,49 7 - 10 dias

vegetales

Diagnóstico micológico en 2,12 75,26 5 - 7 dias

turba y suelo
El proceso de diagnóstico, para la detección oportuna de enfermedades de origen fungoso, se lleva a
cabo mediante en uso de técnicas artificiales (cámara húmeda y medios de cultivos sintéticos, que
proporciona las condiciones favorables de humedad y temperatura al patógeno para que se desarrolle
y pueda ser identificado. En su detección se aplican técnicas tradicionales, esto es observación
morfológica de las estructuras de reproducción mediante el uso de microscopios y estereoscopios, así
como técnicas moleculares, con el uso de termociclador y camara electroforesis.

Laboratorio de Bacteriología
Unidad encargada de realizar el diagnóstico de enfermedades de etiología bacteriana;
cuenta con las áreas de Cultivo, Brucelosis, Leptospirosis y Tuberculosis; coopera
con las áreas de Vigilancia, Programas y Defensa Zoosanitaria de la Dirección de
Sanidad Animal, en la vigilancia, control y erradicación de la Brucelosis, Tuberculosis,
Ántrax, Salmonelosis, y Clostridiosis; y también en diagnósticos bacteriológicos de
aquellas que soliciten los usuarios (SENASA, 2017).
Permiso fitosanitario de importación (PFI)
De acuerdo al Reglamento de Cuarentena Vegetal, el Permiso Fitosanitario de
Importación (PFI) es el documento oficial emitido por el SENASA, que autoriza la
importación de un envío de plantas, productos vegetales y otros artículos
reglamentados.
La semilla es el insumo más importante de la producción, es el fundamento de la
cosecha si está con el potencial genético requerido para lograr cultivos con altos
rendimientos, por lo tanto es de suma importancia tener un correcto análisis de esta
antes de la compra y venta.
El lote de semillas:
Para poder evaluar la calidad de semillas, es necesario efectuar un muestreo
representativo. Cuando un lote de semillas excede los 400 quintales, este debe
subdividirse en lotes más pequeños, que no exceda a dicha cantidad. El lote debe ser
lo más uniforme posible y no presentar durante el muestreo signos de
heterogeneidad. Las semillas del lote deberán estar empacadas en sacos o en
cualquier otro tipo de envases sellados y etiquetados o con marca para su
identificación mediante una simple designación del lote. En el caso de semillas a
granel o en envases que no puedan sellarse, se podrá tomar muestras pero se emitirá
un certificado sobre la totalidad del lote.
La toma de muestras deberá realizarse únicamente por personas capacitadas,
experimentadas y acreditadas en el muestreo de semillas e incluso reconocidas
individualmente por laboratorios nacionales o internacionales correspondientes.

Medios de cultivo para el patógeno que se quiere buscar

En la visita se hablaron de varios métodos pero hubieron dos a los cuales se les puso
más énfasis, uno es el de agar nutritivo y el otro de carbonato de calcio.
Agar nutritivo: Es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo
de bacteria. Es muy útil porque permanece sólido incluso a relativas altas
temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie,
por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas. En un caldo de nutrientes, la
bacteria crece en el líquido, y aparece como una sustancia espesa, con colonias
difícilmente observables.
Contiene:
- 0.5 % Peptona
- 0.3 % extracto de carne/extracto de levadura
- 1.5 % agar
- 0.5% NaCl
- Agua destilada
- pH casi neutro (6.8) a 25 °C.
Carbonato de calcio: Compuesto químico muy abundante en la naturaleza, que se
encuentra en rocas como la calcita, aragonita, vaterita, el mármol entre otras, de igual
forma se encuentra en gran cantidad en esqueletos de moluscos, corales, conchas o
la cáscara de huevo.
pH: alcalino
Prueba Elisa (en el caso de SENASA trabajan con 5 elisas mayormente): Técnica de
inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado que es el patógeno se detecta
mediante un anticuerpo enlazado que son las inmunoglobulinas a una enzima capaz
de generar un producto detectable.
Materiales que se emplean: Microplacas de 96 pocillos de plástico tratado, para
aumentar su capacidad de adsorción (en su superficie) de moléculas, y con fondos
de pocillo ópticamente claros que permitan realizar las medidas de densidad óptica
en instrumentos específicos, espectrofotómetros de lectura de placas que han
recibido el nombre de lectores ELISA.
Cada kit de estos es único y para cada tipo de Elisa y cada uno con diversos
protocolos donde la peroxidasa determina de acuerdo a su coloración, finalmente al
cabo de 3 días ya se pueden obtener resultados muy certeros sobre esto.

Laboratorio de VirologíaEl laboratorio de virología con el que cuenta SENASA

dispone de diferentes áreas como: Serología, Aislamiento y Cultivo de Células.
Todas estas áreas trabajan en el análisis de distintas muestras como sueros u
 órganos con el propósito de detectar la presencia de anticuerpos específicos y/o
identificar y aislar el agente viral. Este laboratorio emplea diferentes pruebas como
la Inmunodifusión en Gel Agar (IDGA), Ensayo Inmunoenzimático (ELISA),
Inmunofluorescencia Directa (IFD), aislamiento de virus en cultivo de células e
inoculación de animales de laboratorio para el diagnóstico de Anemia Infecciosa
Equina, Peste Porcina Clásica, Rabia silvestre, Diarrea Viral Bovina, Síndrome
Respiratorio Reproductivo Porcino, entre otras
(SENASA, 2017).
Luego de realizar las pruebas con ELISA, se necesita un control positivo y negativo
para comparar las muestras. Si no tenemos el control negativo, no se puede identificar
el virus.
En el Perú no se permite el diagnóstico se los virus usando plantas indicadoras, ya
que en SENASA prefieren evitar exponer el virus a los cultivos.
Agentes cuarentenarios
Los virus en frutales recientemente estudiados por SENASA son los que afectan al
cultivo de arándano, ya que es un frutal que está entrando al mercado nacional.
Virus encontrados en el arándano:
- Blueberry Leaf Mottle Virus (BLMoV) muestra síntomas de moteado y necrosis
en la hojas.
- Blueberry Red Ringspot virus (BRRV), el arándano de un año presenta
manchas circulares rojas sobre el tallo y también causa daño a las hojas de
Cranberry, produciendo la enfermedad de manchas anulares.
- Blueberry Scorch Virus (BlScV) hace que se vean líneas necróticas típicas,
como quemaduras, en la hojas.
- Blueberry Shock Virus (BlShV) produce hojas con clorosis y manchas.
- Blueberry Shoe String Virus (BSSV) causa síntomas de tiras rojas sobre el
tallo.
- Peach Rosette Mosaic Virus (PRMV) causa distorsión en hojas.
En el caso de plantas forestales, no se han encontrado evidencia de virus pero se
sospecha que sí están presentes, como se ven en la semillas del pino.

Métodos de muestreo para la detección de virus

Los métodos de muestreo sirven para la detección e identificación del agente
patógeno, en estos casos un virus, viéndose una distribución en plantas irregular.
Selección de muestras: Se colectaron ramas con hojas de 10 a 15 cm de largo, las
ramas no deben ser viejas, pero tampoco deben ser de los brotes recién formados o
nuevos. Si son plantines pequeños y no presentan ramas, se colectan de 15 a 20
hojas expandidas.
Envío de muestras: Se debe realizar en el menor tiempo posible y mantener una
temperatura menor a 4°C, de no ser así las muestras comienzan a descomponerse y
no se pueden tratar ese tipo de tejido. Se descartan muestras deshidratadas enviadas
sólo en una bolsa plástico o sólo en una bolsa de papel, también las muestras
oxidadas o deterioradas, cuando hay poca cantidad de muestra o no es parte vegetal
adecuada.

Laboratorio de Nematología
El laboratorio de nematología que se encuentra en SENASA tiene como principal y unica funcion
determinar la presencia de nemátodos fitoparásitos de importancia económica en sus formas móviles
y enquistadas en suelo, raíces y tejido vegetal.
Los métodos de extracción que utilizan en el laboratorio son de acuerdo a los objetivos propuestos con
el muestreo son:
Baermann modificado (bandejitas): Este método es para la determinación de nematodos de formas
móviles, consiste primero en cortar los tubos de PVC en anillos de un ancho de 5 cm y adaptarlos a
las bandejitas de tal modo que no choque con la base de la bandejita, pegar una malla en uno de los
extremos del tubo, luego se coloca un pedazo de papel higiénico doblado o papel tisú en el interior del
tubo de PVC de modo que lo cubra completamente, después se coloca 50 g de suelo homogeneizado
dentro del tubo de PVC y luego este mismo se pone dentro de la bandejita y se llena de agua que no
sea destilada ya que puede matar a los nematodos que se quiere obtener, se deja reposar por 48 horas
y se retira el suelo y el agua con los nematodos y se pasa por un tamiz a una placa petri pequeña para
facilitar el conteo de los nematodos del tamiz viendose en el microscopio.
Método de la centrífuga: Este método es para nematodos móviles de suelo, en que se utiliza azúcar
pero en laboratorio de SENASA no se utiliza ya que se encuentra descalibrada su centrífuga y el
nematodo estaría aproximadamente 10 min en agua azucarada lo que lo dañaria la muestra y sería
más difícil poder observar al microscopio.
Fenwick modificado: Este método solo es para formas enquistadas, que consta en colocar 50 ml de
suelo seco, en un beaker de 250 ml y llenarlo de agua hasta masomenos 2 cm del borde superior y
luego se dejar reposar por 2 min para que así los quistes floten en la superficie del agua y se dirigen
a los bordes del beaker. Por el color marrón contrastan con el beaker y pueden ser extraídos con el
pincel o algún otro objeto que no lo dañe y se coloca en una placa petri que está con un disco de papel
filtro y luego se humedece y se pone bajo un microscopio de disección con iluminación directa de arriba
hacia abajo para poder observar mejor los quistes y contarlos. Asimismo cabe resaltar que en cada
quiste se puede encontrar entre 400-500 huevos de nemátodos.
Para la identificación de especies de nemátodos fitoparásitos: Se utiliza la taxonomía
convencional y para la identificación de especies de Meloidogyne y Globodera se hace mediante la
comparación de patrones perineales.
Después de hacer los análisis y dar los resultados el sobrante que queda se lleva a la autoclave para
poder ser eliminado y se puede recomendar una medida de control.

Laboratorio de Biología Molecular

Moderno laboratorio implementado por el JICA, utiliza la técnica molecular
denominada reacción en cadena de la polimerasa (PCR) para el control de calidad de
biológicos con la finalidad de evaluar la presencia de agentes extraños o
contaminantes; asimismo realiza la identificación molecular de la cepa utilizada en la
producción de vacunas y diferenciación de cepas vacúnales y cepas de campo.
Además, la técnica molecular se utiliza como Prueba confirmatoria para
enfermedades como la Influenza Aviar, Enfermedad de Newcastle, Ántrax, Brucella,
Fiebre Aftosa, Babesiosis y Cólera Porcino.
En función al avance en el uso y aplicación de técnicas moleculares se viene
implementando con fines de diagnóstico la técnica de PCR en Tiempo Real.
(SENASA, 2017).

IV. Conclusiones
- Se concluye que en cultivos de agroexportación el cultivo más afectado es el
tomate y el nematodo más importante es el meloidogyne.
- Cuando analizan el suelo se encuentran nematodos que afectan a la planta y
la maleza.
- Además, SENASA sólo nos brinda el servicio de detección de los patógenos,
las soluciones ya dependen del usuario y el tipo de manejo que realizará a su
terreno afectado.

VI. Bibliografía;

- José M.. (2015). Nematología en hortalizas y frutales. 22 septiembre, Sitio web:

http://bv.ujcm.edu.pe/links/cur_agronomica/ModNematologiaHortalizasFrutas.p
df
- SENASA (2017). Centro de diagnóstico de sanidad vegetal.Recuperado
de:http://www.senasa.gob.pe/senasa/centro-de-diagnóstico-de-sanidad-vegetal
- Gertrudis Torrico Cabezas María Medina Anguita. (2012). MEDIOS DE
CULTIVO EN UN LABORATORIO DE MICROBIOLOGÍA. 24/09/17, de
wordpress Sitio web:
https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-un-
laboratorio-de-microbiologc3ada.pdf
- Victor Manuel Herrera Chacon. (2015). LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA.
25/09/17, de SENASA Sitio web: https://www.senasa.gob.pe/senasa/laboratorio-
de-bacteriologia/
- Victor Manuel Herrera Chacon. . 2016. Manual de Procedimientos para la Certi
cación O cial de Semillas. En Organización de las Naciones Unidas para la
Alimentación y la Agricultura Tegucigalpa (1, 28) Honduras.
- SENASA (online). Toma y envío de muestras para el diagnóstico de virus
fitopatógenos. Laboratorio de Virología. Recuperado de:
http://www.senasa.gob.pe/senasa/wp-
content/uploads/jer/CUARENTENAVEG/Microsoft%20PowerPoint%20-
%20LAB.%20VIROLOGIA.pdf

VII. Anexos: