UNIVERSIDAD NACIONAL “HERMILIO VALDIZÁN”

ESCUELA PROFESIONAL INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

ANÁLISIS POR INSTRUMENTACIÓN
Ing. César Cueto Rosales
SIXTO LUSTRE, Edward L

PRÁCTICA N° 06
EVALUACION DE LA CAPACIDAD ANTIOXIDANTE MÉTODO DEL (Catión 2,2,-azinobis
3 –etilenbenzotiazolino-6 ácido sulfónico) (ABTS+).

I. INTRODUCCIÓN
Existe la tendencia mundial hacia un mayor consumo de frutas y hortalizas por ser componentes
importantes de la alimentación humana, su aporte en vitaminas, minerales, fibra y por el papel
nutraceutico representan una ayuda para mantener una buena salud, esto también es motivado por la
creciente preocupación por una dieta equilibrada, con menor cantidad de carbohidratos, grasas,
aceites y con una mayor participación de vegetales. Este cambio se da debido a las menores
necesidades calóricas de la vida moderna, caracterizadas por un mayor confort y sedentarismo, otro
factor que determina esta tendencia, es la importancia de la dieta en la salud y la longevidad. (Jacoby
E, 2006)
Las especies de pasifloras reciben diferentes usos, en una revisión del genero relacionada con la
morfología, microscopia, usos tradicionales, fito-constituyentes, farmacología, aplicaciones en
medicina y toxicología, se encontró en maracuyá. (Lopez, 2008)
La balanza analítica Es una de balanza que permite hacer pesajes con gran rapidez y exactitud, los
datos arrojados son muchos más específicos. Su característica más importante es que poseen un
margen de error muy bajo, lo que la hace ideal para usar en mediciones muy precisas. Las balanzas
analíticas generalmente son digitales, y algunas pueden desplegar la información en distintos
sistemas de unidades; por ejemplo, se puede mostrar la masa de una sustancia en gramos, con una
precisión de 0,00001 g (0,01 mg). Es importante aclarar que la exactitud y la precisión son dos
conceptos diferentes y que deben diferenciarse y distinguirse uno del otro, pues son vitales en el
momento de realizar un análisis de calibración de balanzas.
Establecer la capacidad antioxidante total en un solo estado de maduración del fruto, se emplea para
conocer este atributo en especies de interés económico, en este sentido diferentes especies frutícolas
se han evaluado, calificándose al maracuyá amarillo y la granadilla, con baja capacidad antioxidante,
en tanto que la curuba, fue categorizada en la escala mas alta y la guayaba con capacidad
antioxidante media. (Dhawan k, 2004)

II. OBJETIVOS  El objetivo de esta práctica será

evaluar la capacidad antioxidante de
la pulpa de maracuyá.
III. MATERIALES Y METODOS: -Micropipetas.
-Tips (1000 y 200µl).
Materiales -Tela organza.
-Tubos de ensayo.
3.1 MUESTRA. -Gradilla.
-Cubetas de poliestireno para
Maracuyá (pasiflora edulis). espectrofotómetro (1.5 ml).

3.2 MATERIALES.

-Vasos precipitados.
 3.3 EQUIPOS %𝐼𝑁𝐻 𝐴𝐵𝑇𝑆
𝐴𝑏𝑠𝑖 − 𝐴𝑏𝑠𝑓
 Balanza analítica = 𝑥100
𝐴𝑏𝑠𝑖
 Espectrofotómetro Dónde:
𝐴𝑏𝑠𝑖 : Absorbancia del radical
 Agitador magnético ABTS+ al inicio de la reacción.
𝐴𝑏𝑠𝑓 : Absorbancia del radical
 Mini centrifuga
ABTS+ al final de la reacción.
El valor de IC50, obtuvo
IV. PROCEDIMIENTOS: reemplazando en la ecuación
y=ax+b que se observa en la
gráfica
a) Preparación de la solución de
trabajo.
V. RESULTADOS Y
StocK de ABTS+: Se mezcló 5
ml de 7mM ABTS en agua con DISCUSIONES
88 µl de 140 mM de persulfato
Resultados:
de potasio, se dejó reposar por 12
– 16 h antes del uso, estuvo
protegido de la luz. Figura 1. Absorbancia de diferentes
La solución de trabajo de concentraciones.
ABTS+: Se diluyó el stock en Gráfico 1.
etanol de 1:70 y se ajustó la Absorbancia de la concentración 0.501
Abs=0.9-1.2 a 734 nm. g/ml.
Absorbancia vs tiempo de la dilución 1/2
b) Se cortó el maracuyá y se
extrajo la pulpa. Figura 2. 1
Posteriormente se pesó 10.0161
0.8
Absorvancia

g aproximadamente. Figura 3.
Se diluyó en 10 ml de agua 0.6
bidestilada. 0.4
La concentración de la dilución
es 1.00161 g/ml. 0.2
Se centrifugo 4.5 ml de la 0
dilución en una mini centrífuga 0 1 2 3 4
13000 rpm/ 5 min. Figura4 Tiempo(min)
Después de se preparó las Gráfico 2.
diluciones 1/2, 1/4, y 1/6. Absorbancia de la concentración 0.125
c) Coeficiente de inhibición g/ml.
(IC50).
Se determinó mediante un
análisis de regresión de Absorbancia Vs tiempo de la dilución 1/4
inhibición versus la
0.95
concentración necesaria de los
extractos, para inhibir el 50% del
0.9
Absorvancia

radical ABTS+.
Se hizo reaccionar 100 µl de
0.85
cada dilución (1/2, 1/4, y 1/6) en
cubetas con 900 µl de ABTS+
0.8
luego se registró las absorbancias
a 374 nm en intervalos de 30
0.75
segundos durante 3.5 minutos.
0 1 2 3 4
Figura 4. Tiempo(min)
Para calcular el porcentaje de
inhibición del radical DPPH se
hizo uso de la siguiente formula.

2
Gráfico 3. VI. CONCLUSIONES
Absorbancia de la concentración 0.021
g/ml.
 Se aplicó La capacidad antioxidante
Absorbancia Vs tiempo de la dilución 1/6 de una mezcla no viene dada solo por
la suma de las capacidades
1 antioxidantes de cada uno de sus
0.8 componentes; también depende del
Absorvancia

0.6 microambiente en que se encuentra el

0.4
compuesto. Los compuestos
interactúan entre si pudiendo
0.2 producirse efectos sinérgicos o
0 inhibitorios.
0 1 2 3
Tiempo(min)
VII. RECOMENDACIONES
Tabla 1.  Evaluar otras partes del
Absorbancia de diferentes maracuyá para determinar si
concentraciones y %INH. presenta mayor capacidad
T(mi C=0.125 C=0.020 antioxidante, además de
n) C=0.500 2 g/ml 9 g/ml cuantificar sus componentes
8 g/ml 1/4 1/6 bioactivos.
1/2  Cuantificar los compuestos
0 0.92 A 0.92 A 0.921 A fenólicos, especialmente
0.3 0.317 A 0.813 A 0.639 A flavonoides y fenoles,
1 0.257 A 0.8 A 0.607 A identificado en el extracto etano
1.3 0.224 A 0.792 A 0.588 A lico 1:2.
2 0.202 A 0.787 A 0.574 A  Desarrollar formulaciones de
2.3 0.186 A 0.783 A 0.565 A bebidas funcionales a base de
3 0.173 A 0.78 A 0.558 A pulpa de maracuyá, en vista a la
3.3 0.163 A 0.77 A 0.553 A presencia de compuestos
%INH 82.28 16.30 39.96 bioactivos con capacidad
antioxidante.

Gráfico 4.
%INB ABTS y concentración.
REFERENCIAS
Dhawan k, D. S. (2004). Passiflora. Journal
of ethnopharmacology., 1-23.
%INC vs Concentración
100.00 y = 31.99x - 18.467 Jacoby E, K. I. (2006). la promoción del
R² = 0.9779 consumo de frutas y verduras en
80.00
%INC vs America Latina. Buena oportunidad
60.00
%INC

Concentración de acción intersectorial por una

40.00 alimentación saludable. Chil. Nutr.
20.00 Linear (%INC Lopez, A. (2008). Manual para la
vs
0.00 Concentración prepracion y venta de frutas y
0.1252 0.0209 0.5008 ) hortalizas. Del campo al mercado.
Concentración (g/ml) En: organización de las Naciones
Unidas para la Agricultura y la
Cálculo del IC50.
𝑦 = 31.99𝑥 − 18.467 Alimentación FAO. Boletín de
50 = 31.99𝐼𝐶50 − 18.467 servicios agrícolas de la FAO, 151.
𝐼𝐶50 = 2.14 𝑔/𝑚𝑙