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El bloqueo del receptor del punto de control TIGIT

previene el agotamiento de las células NK y
produce una potente inmunidad antitumoral.
El bloqueo del punto de control mejora la función de las células T efectoras y ha provocado una remisión a largo plazo en un
subconjunto de pacientes con un amplio espectro de cánceres. Se cree que el TIGIT es un receptor de control que interviene en la
mediación del agotamiento de las células T en los tumores; sin embargo, la relevancia del TIGIT para la disfunción de las células
asesinas naturales (NK) sigue siendo poco conocida. Aquí encontramos que el TIGIT, pero no las otras moléculas de punto de
control CTLA-4 y PD-1, estaba asociado con el agotamiento de las células NK en ratones portadores de tumores y pacientes con
cáncer de colon. El bloqueo del TIGIT previno el agotamiento de las células NK y promovió la inmunidad del tumor dependiente de
células NK en varios modelos de ratones portadores de tumores. Además, el bloqueo de TIGIT dio lugar a una potente inmunidad
de las células T tumorales específicas de una manera dependiente de las células NK, a una terapia mejorada con anticuerpos contra
el ligando PD-1 PD-L1 y a una inmunidad sostenida de la memoria en los modelos de retardo tumoral. Este trabajo demuestra que
el TIGIT constituye un punto de control no apreciado anteriormente en las células NK y que la selección del TIGIT solo o en
combinación con otros receptores de puntos de control es una estrategia terapéutica anticancerosa prometedora.

N
Las células asesinas auriculares (NK) son células TIGIT está asociada con la progresión tumoral en pacientes
esenciales antitumorales efectoras1,2. La actividad de las portadores de tumores13,14. Por lo tanto, el bloqueo de TIGIT
células NK está regulada por un repertorio de células de co- podría ser un complemento prometedor para las actuales
señalización (ya sean co-estimuladoras o co-inhibidoras). inmunoterapias antitumorales basadas en puntos de control
receptores de superficie que reconocen sus respectivos ligandos inmunológico. Sin embargo, los mecanismos de acción por los
en las células diana o células presentadoras de antígenos. A cuales tal bloqueo funciona para aumentar la inmunidad
diferencia de las células T desencadenadas por antígenos, para las antitumoral no han sido completamente explorados, lo cual es
cuales se requiere señalización co-estimulante para una activación crítico para la dirección de los próximos ensayos clínicos.
óptima, las células NK no están dominadas por un solo receptor. En este estudio, encontramos que la expresión de TIGIT en las
En cambio, la integración de señales coestimulantes y señales células NK que infiltran el tumor se asoció con la progresión del
coinhibitorias determina la capacidad de respuesta de las células tumor y se relacionó con el agotamiento funcional de las células
NK3. NK. Se encontró que la deficiencia de TIGIT en las células NK
Los receptores de co-señalización han atraído una gran fue suficiente para retrasar el crecimiento tumoral in vivo y que el
atención debido al éxito de su objetivo de inmunoterapia4-6. Para bloqueo de TIGIT mediante anticuerpos monoclonales revirtió el
aprovechar mejor la función efector de las células inmunitarias agotamiento de las células NK antitumorales en múltiples
antitumorales y ampliar el beneficio terapéutico actual de los modelos tumorales y posteriormente mejoró la supervivencia
tratamientos existentes basados en la coseñalización, es esencial general del huésped. Además, demostramos que el bloqueo de
explorar el potencial terapéutico de los receptores de TIGIT subvertía directamente el agotamiento de las células NK
coseñalización emergentes7. Además, los efectos tumorales, independientemente del sistema inmunitario
inmunoestimulantes de las inmunoterapias actuales, como el adaptativo, y que la presencia de células NK era crítica para los
bloqueo de los receptores inmunológicos CTLA-4 y PD-1, se efectos terapéuticos del bloqueo de TIGIT o del ligando PD-1 PD-
limitan a las células T, debido al perfil de expresión de dichas L1 o del bloqueo combinado de ambos puntos de control. Estos
moléculas. No se ha investigado el potencial terapéutico de la hallazgos demuestran que la vía de señalización TIGIT asociada
activación simultánea de células T antitumorales y células NK. con las células NK tiene un papel en la evasión del sistema
El receptor coinhibitorio TIGIT ("inmunoglobulina de células inmunitario por parte de los tumores y que la reversión del
T e inhibidor de inmunorreceptor basado en tirosina") se expresa agotamiento de las células NK es crítica para los efectos
tanto en las células T como en las células NK8,9. Múltiples terapéuticos de la inmunoterapia antitumoral basada en el bloqueo
grupos8,10-12 han demostrado que el TIGIT contribuye a la del TIGIT.
inmunotolerancia al inhibir no sólo las respuestas inmunitarias
mediadas por las células T8,12, sino también las mediadas por las Resultados
células NK10,11 a través de la unión de su ligando, CD155, en La expresión alta de TIGIT se asocia con el agotamiento de las
células presentadoras de antígenos o células diana. En particular, células NK tumorinfiltrantes. La expresión de TIGIT está
el bloqueo del TIGIT puede revertir el agotamiento de la aumentada en las células T durante la progresión del tumor13 ,15.
inmunidad antitumoral mediada por linfocitos T citotóxicos (CTL, Aquí encontramos que la expresión de TIGIT fue
por sus siglas en inglés) e inhibir el crecimiento tumoral en significativamente más alta en las células NK en regiones
modelos de tumores preclínicos13. Además, la expresión de intratumorales (TI) que en las regiones peritumorales (PT) en

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pacientes con cáncer de colon (Fig. 1a), mientras que la expresión
de TIGIT en las células T CD8+ en TI
no fue significativamente diferente de la de dichas células en
regiones de fisioterapia del mismo paciente (P >0,05 (prueba t de
dos colas emparejadas); Fig. 1a suplementaria). Sobre la base de
los resultados de los tumores humanos, investigamos la expresión
de TIGIT en células NK en modelos de tumores en ratones. En
modelos de metástasis pulmonares en ratones de melanoma B16
o cáncer de mama 4T1, una alta frecuencia de células NK (Fig. 1b
y Suplementario Fig. 1b) y células T CD8+ (Suplementario Fig.
1c) tuvieron expresión superficial de TIGIT en el bazo, el hígado
y los pulmones (donde los nódulos tumorales metastásicos
crecieron con el tiempo). Este aumento de TIGIT en las células
NK tumorales o células T CD8+ también se observó en cuatro
modelos de ratón de tumores administrados por vía subcutánea,
incluyendo el cáncer de colon CT26, el cáncer de mama 4T1 y el
melanoma B16, y el fibrosarcoma inducido con el carcinógeno
químico metilcolantreno (MCA) (Fig. 1c y Fig. 1d,e).
Encontramos que aunque una alta frecuencia de células T CD8+
y células T CD4+ infiltrantes tenía expresión superficial tanto de
PD-1 como de CTLA-4 (Fig. suplementaria 1f,g), sólo había una
baja frecuencia de células NK infiltrantes con expresión
superficial de PD-1 (menos del 10%) o CTLA-4 (menos del 20%)
(Fig. 1d), con una expresión generalmente muy por debajo de la
expresión de TIGIT en células NK de ratones (control) no
tratados. Estos datos indicaron que el TIGIT se correlacionó con
la progresión tumoral más específicamente en las células NK que
en otras células de estos modelos tumorales. A continuación,
analizamos los subconjuntos de TIGIT+ entre los linfocitos
tumorales-infiltrantes. Encontramos que las células T T TIGIT+
eran principalmente PD-1+ (Fig. 1e) o CTLA4+ (Fig. 1f y Fig. 1h
Suplementaria) en los cuatro modelos portadores de tumores. Por
otro lado, las células TIGIT+ NK eran en su mayoría tanto PD-1-
(Fig. 1e) como CTLA-4- (Fig. 1f). Esto planteó la posibilidad de
que la terapia anti-PD-1 y antiCTLA-4 no pueda revertir la
disfunción de las células NK en ambientes tumorales.
Comparamos el fenotipo de los subconjuntos de células
TIGIT+ NK con el de los subconjuntos de células TIGIT- NK.
Encontramos que una frecuencia más baja de células TIGIT+ NK
tumorinfiltrantes que las células TIGIT- NK expresaba las
citocinas IFN-γ y TNF, el marcador lisosómico CD107a y la
molécula citotóxica TRAIL (Fig. 1g), lo que sugería que las
células TIGIT+ NK poseían funciones efectoras reducidas y
potencial antitumoral.
y CD226 y una frecuencia más baja que expresa CD96 (Fig. 2d),
en ratones Tigit-/- que en ratones de tipo salvaje con metástasis de
melanoma B16. Además, criamos ratones Tigitfl/fl con ratones
Ncr1iCre/+ para realizar la eliminación de TIGIT
específicamente en células NK de la descendencia de
Tigitfl/flNcr1iCre/+. Observamos que la deficiencia específica de
células NK en TIGIT (en ratones Tigitfl/flNcr1iCre/+; Fig.
suplementaria 3a) resultó en una supervivencia significativamente
prolongada de ratones en relación con la de ratones
Tigitfl/flNcr1+/+ o ratones de tipo silvestre (Fig. 2e), similar a los
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Inmunidad natural
Además, una frecuencia más baja de células TIGIT+ NK tenía
expresión superficial del receptor activador CD22616 y receptores
inhibidores expresados de frecuencia más alta, incluyendo
CD9617, LAG3 y TIM3, en ratones portadores de tumores CT26
(Fig. 1h) y ratones portadores de melanoma B16 (Fig. 1i
Suplementaria). Mientras tanto, se observaron cambios modestos
pero significativos en las células TIGIT+ NK para los receptores
que se unen a las principales moléculas del complejo de
histocompatibilidad clase I, con una mayor frecuencia de células
que expresan Ly49A y una menor frecuencia de células que
expresan Ly49C/I, así como una menor frecuencia de células que
expresan el receptor activador NKG2D e, inesperadamente, el
receptor inhibidor NKG2A, por razones desconocidas (P < 0).01
y P < 0,001 (prueba t de dos colas emparejadas); Fig. 1i
suplementaria). Además, una mayor frecuencia de células TIGIT+
NK mostraron apoptosis (Fig. 1i). Así, similar a las células T PD-
1+, las células TIGIT+ NK manifestaron un fenotipo agotado.
Además, el ligando TIGIT CD155 fue abundante en tumores
humanos (Fig. 2a Suplementaria) y ratones (Fig. 2b
Suplementaria), mientras que la abundancia de CD112 fue mucho
menor (Fig. 2 Suplementaria); por lo tanto, el CD155 constituyó
la mayoría de los ligandos TIGIT en el microentorno tumoral.
Después de unirse al ligando, TIGIT podría transducir señales
inhibitorias a las células NK8. Por lo tanto, la mayor expresión de
CD155 en el microambiente tumoral podría causar más inhibición
de las células TIGIT+ y conducir al agotamiento de las células
TIGIT+ NK.
La deficiencia de TIGIT alivia el agotamiento de las células
NK y retarda el crecimiento del tumor. Se ha informado que el
TIGIT está implicado en el agotamiento de las células T CD8+13
y en la inducción de células T reguladoras18 en la progresión del
tumor. Sin embargo, el papel del TIGIT en las respuestas
antitumorales mediadas por células NK aún no ha sido
investigado. Aquí, inyectamos por vía intravenosa células de
melanoma B16 en ratones Tigit-/- (Fig. 3a suplementaria).
Encontramos que la deficiencia genética en Tigit resultó en menos
metástasis pulmonares (Fig. 2a) y mejoró la supervivencia general
de los ratones (Fig. 2b) después de dicha inyección. También
observamos una frecuencia más alta de células T CD8+
infiltrantes que expresan TNF y una frecuencia más baja que
expresan PD-1 (Fig. 2c), y una frecuencia más alta de células NK
infiltrantes que expresan CD107a, TNF
resultados obtenidos para ratones Tigitfl//-. La deficiencia
específica de células NK en el TIGIT también llevó a una mayor
frecuencia de células NK que expresan CD226 y una menor
frecuencia de células NK que expresan CD96 (Fig. 3b
suplementaria), lo que indica que el TIGIT podría mediar
directamente en el agotamiento de las células NK que infiltran el
tumor. La deficiencia específica de células NK en TIGIT resultó
en una menor frecuencia de la infiltración tumoral de células T
CD8+ que expresan TIGIT y del receptor TIM3 (Fig. 3c
suplementaria), lo que sugirió que las células NK que expresan
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TIGIT también podrían contribuir indirectamente al agotamiento
de las células T CD8+. Por lo tanto, la expresión de TIGIT en las
células NK tuvo un efecto no redundante sobre el deterioro de las
respuestas antitumorales.
El bloqueo del TIGIT previene el agotamiento de las células
NK en ratones portadores de tumores. Para evaluar los efectos
del bloqueo del TIGIT sobre la función de las células NK en
ratones portadores de tumores, tratamos a los ratones con
anticuerpos monoclonales (mAb) contra el TIGIT en el contexto
de tumores de colon (Fig. 3a-e), tumores de mama (Fig. 3f-h) y
fibrosarcomas inducidos químicamente (Fig. 3i-k). En ratones
portadores de tumores CT26 (Fig. 3a), encontramos que el
crecimiento tumoral fue inhibido por el bloqueo de TIGIT, como
se muestra por un menor volumen tumoral (Fig. 3b) y una mejor
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supervivencia general del ratón (Fig. 3c). También detectamos
una masa tumoral más pequeña 30 días después del desafío (Fig.
3d), así como una mayor frecuencia de células NK tumorales
infiltrantes que expresan CD107a, TNF, IFN-γ y CD226, en
ratones tratados con mAb a TIGIT que en ratones tratados con el
anticuerpo de control IgG (Fig. 3e). Estos datos indicaron que el
bloqueo de TIGIT revirtió el agotamiento de las células NK que
infiltran el tumor. Los efectos terapéuticos se acompañaron de una
mayor frecuencia de células T CD8+ tumorales infiltrantes con
expresión superficial de CD107a, TNF e IFN-γ (Fig. 4a
suplementaria), lo que indicaba que el tratamiento con anticuerpos
contra TIGIT (anti-TIGIT) también revertía el agotamiento por
CTL. En línea con estos hallazgos, en el 4T1-pulmonar
modelo de metástasis (Fig. 3f), el tratamiento con anti-TIGIT redujo la metástasis tumoral con bloqueo de TIGIT en
varios puntos de tiempo después de la inoculación del tumor (Fig. 3g,h). En el modelo de fibrosarcoma inducido por
MCA, en el que un químico mutagénico indujo tumores espontáneos, con una variación considerable entre ratones
individuales en el crecimiento tumoral (Fig. 3i), el tratamiento con anti-TIGIT retrasó el crecimiento tumoral y prolongó
la supervivencia general del ratón (Fig. 3j,k). Por lo tanto, además de sus efectos sobre los CTL, el bloqueo de TIGIT
impidió el agotamiento de las células NK en ratones portadores de tumores.
El melanoma B16 es bien reconocido como un tumor agresivo con una inmunogenicidad deficiente19 ,20, y fue mal
controlado con cualquier monoterapia como anti-TIGIT (Fig. suplementaria 4b,c) o bloqueo de CTLA-4 o PD-121-25.
La citocina Flt3L se ha utilizado ampliamente para mejorar la eficacia inmunoterapéutica a través de su acción como
potente estimulador de las células dendríticas26-29, y cuando se combina con el bloqueo de CTLA4 o PD-1, acelera el
rechazo de tumores23,24. Dado que el Flt3L también puede estimular la expansión de la población y la función de las
células NK30,31, inyectamos hidrodinámicamente un plásmido que contiene el gen que codifica el ratón Flt3L (Flt3l)
en ratones para sobreexpresar el Flt3L del ratón in vivo y encontramos que dicha administración de Flt3l sola resultó
en una alta concentración de Flt3L en el suero (Fig. suplementaria 5a), junto con una alta frecuencia de células NK
funcionales, así como de células dendríticas en la sangre y los órganos del sistema inmunológico (Fig. suplementaria
5a-c). Cuando se usa junto con la administración de Flt3l, el bloqueo de TIGIT extendió sustancialmente la
supervivencia de los ratones portadores de tumores B16 (después de la inyección subcutánea de células B16), pero la
administración de Flt3l sola no mostró tal beneficio (Fig. 3l). Ese efecto terapéutico sobre la supervivencia global se
confirmó en un modelo de metástasis pulmonar B16 (con inyección intravenosa de células B16) (Fig. 3m), y su efecto
beneficioso sobre las metástasis tumorales también se confirmó, incluso en ratones que recibieron la inyección de un
gran número de células B16 tumorales (Fig. 3n). También, encontramos más infiltración de células NK activadas
(CD69+) en tumores en el grupo en el cual TIGIT fue bloqueado (Fig. suplementaria 5d), lo que indica que el bloqueo
de TIGIT mejoró la infiltración de células NK activadas en tumores. Colectivamente, estos resultados demostraron que
el bloqueo terapéutico del TIGIT in vivo mediante el uso de un mAb podría mejorar la inmunidad antitumoral al revertir
el agotamiento de las células NK que infiltran el tumor, dirigidas contra tumores fuerte o débilmente inmunogénicos,
tumores establecidos o metástasis.

El bloqueo del TIGIT previene el agotamiento de las células NK en ausencia de inmunidad adaptativa. Para
explorar si el bloqueo de TIGIT también podría mejorar la inmunidad antitumoral en ratones en ausencia del sistema
inmunológico adaptativo, evaluamos la expresión y función de TIGIT en ratones Rag2-/- inmunodeficientes, ratones
de la cepa de inmunodeficiencia combinada severa (SCID, por sus siglas en inglés) deficiente en células T, y ratones
de la cepa de diabetes no obesa (NOD, por sus siglas en inglés) -SCID, todo después de la inyección de células CT26.
Encontramos que una mayor frecuencia de células NK tenían expresión superficial de TIGIT, tanto en el bazo como en
los tumores CT26, para los tres grupos de ratones (Fig. 4a). También encontramos que una frecuencia más baja de
células TIGIT+ NK que de células TIGIT- NK expresaba IFN-γ o TNF (Fig. 4b) o CD226 (Fig. 4c) y una frecuencia
más alta de células TIGIT+ NK que de células TIGIT- NK expresaba el receptor inhibidor CD96 (Fig. 4c) tanto en el
bazo como en los tumores. A continuación, tratamos los ratones CT26 Rag2-/-, SCID y NODSCID portadores de
tumores con mAb a TIGIT (Fig. 4d). Encontramos que el tratamiento con anti-TIGIT retrasó el crecimiento tumoral
(Fig. 4e) y redujo la masa tumoral en ratones con SCID deficiente en células T (Fig. 4f). Tras el bloqueo del TIGIT, las
células NK tumorales infiltrantes mostraron una mejora en la función de los ratones SCID, como lo indica el aumento
de la frecuencia de dichas células que expresan CD107a, TNF, IFN-γ o CD226 (Fig. 4g). Debido a que el TIGIT se
expresó principalmente en las células T y en las células NK, estos efectos reversibles de agotamiento del anti-TIGIT
en ratones con SCID deficiente en células T sugirieron que el efecto se logró directamente a través de las células NK.
El efecto terapéutico del bloqueo de TIGIT fue confirmado en ratones Rag2-/- e incluso ratones NOD-SCID, un modelo
de ratón con deterioro funcional de las células NK (Fig. 6 suplementaria). Estos datos indicaron que la reversión del
agotamiento de las células NK y la mejora de las respuestas tumorales podrían lograrse con el bloqueo de TIGIT incluso
en ausencia de células inmunitarias adaptativas funcionales.

El bloqueo de TIGIT mejora la inmunidad adaptativa de una manera dependiente de células NK. Tanto las
células NK como las CTL expresaron TIGIT (Fig. 1a-c y Fig. Suplementaria 1a-h). Intentamos delinear el efecto de las
células NK sobre las células T en el contexto del bloqueo de TIGIT. Para ello, se eliminaron las células NK mediante
el uso de ratones deficientes en el gen que codifica el factor de transcripción E4BP4 (ratones Nfil3-knockout), que
carecen totalmente de células NK convencionales, o mediante el tratamiento de ratones con anticuerpos contra el
receptor de células NK NK1.1. En el modelo de metástasis pulmonar B16 (inyección intravenosa de células B16),
encontramos que la supresión de las células NK condujo a más metástasis pulmonares, junto con una mayor frecuencia
de células T CD8+ que expresan PD-1 y una menor frecuencia de células T CD8+ que expresan CD107a, IFN-γ o TNF
(Fig. 5a). Estos hallazgos indicaron que las células NK estaban normalmente involucradas en el control de la metástasis
de B16 y también mejoraron potencialmente la función de las células T CD8+ y/o previnieron su agotamiento. Además,
encontramos que la deficiencia de células NK abolió el efecto terapéutico del bloqueo de TIGIT incluso en presencia

1
de células T CD8+ que expresan TIGIT (Fig. 5b). Esto sugirió que los CTL estaban más severamente agotados en
ausencia de células NK, incluso bajo el bloqueo de TIGIT. Debido a que las células T CD4+ (como las células T
reguladoras) también expresaron TIGIT, se buscó determinar si el efecto terapéutico del bloqueo de TIGIT estaba
influenciado por estas células. Por lo tanto, establecimos un estudio con ratones deficientes en el co-receptor CD4
específico de células T (Cd4-/- ratones). En los ratones con células NK suficientes Cd4-/- con melanoma B16
subcutáneo, el bloqueo de TIGIT retuvo el efecto antitumoral (Fig. 5c), lo que sugirió que las células T CD4+ no eran
críticas en nuestro entorno. Sin embargo, con la remoción de las células NK, el efecto fue abolido incluso en presencia
de células T CD8+, y esto fue comparable a la remoción de células T CD8+ (Fig. 5c), lo que indicó que el bloqueo de
TIGIT en las células T CD8+ por sí solo era insuficiente para montar una inmunidad antitumoral efectiva en ausencia
de células NK. Estos datos demostraron que durante el bloqueo de TIGIT y la mejora de la inmunidad del tumor, las
células NK, al menos en parte, tuvieron un papel crítico en el apoyo de las células T CD8+. También encontramos que
el IFN-γ era importante, al menos parcialmente, para la función antitumoral de las células NK, porque el bloqueo del
TIGIT no ejercía ningún efecto antitumoral en ratones con deficiencia de IFN-γ (Fig. 5d). Estos resultados indicaron
que las células NK no sólo ejercieron un efecto antitumoral directo sino que también ayudaron a la función de las
células T CD8+, en el marco del bloqueo de TIGIT.
Para confirmar el papel antitumoral de las células NK durante el bloqueo de los puntos de control con anti-TIGIT o
anti-PD-L1, se comparó su eficacia terapéutica con o sin deleción de células NK. Se encontró que los efectos
terapéuticos de anti-TIGIT, anti-PD-L1 o anti-TIGIT más anti-PD-L1 dependían de la presencia de células NK (Fig.
5e,f), como lo indican la supervivencia global (Fig. 5e) y el peso del tumor (Fig. 5f). La ausencia de células NK también
resultó en una menor frecuencia de células T CD8+ tumorinfiltrantes que expresan IFN-γ o TNF, así como una
frecuencia elevada de células T CD8+ tumorinfiltrantes que expresan PD-1 (Fig. 5g), en ratones que reciben la terapia
de combinación. Por lo tanto, estos datos resaltan la importancia de las células NK no sólo en el tratamiento que implica
el bloqueo de TIGIT o PD-L1, sino también en el tratamiento combinado dirigido tanto a TIGIT como a PD-L1.

El bloqueo de TIGIT provoca una potente respuesta de memoria antitumoral. Los resultados reportados
anteriormente mostraron que el bloqueo de TIGIT provocó una potente inmunidad primaria adaptativa antitumoral de
una manera dependiente de las células NK. Luego investigamos si los ratones que habían sobrevivido al desafío del
tumor después del bloqueo de TIGIT tenían respuestas anamnésicas al desafío del tumor. Los ratones portadores de
tumores CT26 fueron tratados inicialmente con mAb a TIGIT y posteriormente se les administró una reinyección de
una cantidad cuádruple de células CT26 el día 175 después de la primera inoculación tumoral y en ausencia de
tratamiento adicional (Fig. 6a). Observamos que el crecimiento tumoral fue inhibido y la supervivencia de los ratones
aumentó, en comparación con la de los ratones no tumorales (Fig. 6b). Resultados similares se obtuvieron en ratones
portadores de tumores B16 (Fig. 6c) con dosis bajas y altas de retardo tumoral subcutáneo (Fig. 6d,e). Además, estos
ratones conservaron las respuestas de retirada del mercado al nuevo desafío del tumor intravenoso en el día 270 después
del primer desafío (Fig. 6f,g). En conjunto, estos resultados demostraron que la inmunoterapia anti-TIGIT por sí sola
provocó memoria inmunológica antitumoral.

Discusión
La terapia antitumoral inmunológica basada en puntos de control ha llamado mucho la atención6. Se cree que el bloqueo
de PD-L1, PD-1 y CTLA-4 aumenta la inmunidad antitumoral mediada por células T efectoras. Cómo extender los
beneficios clínicos a la mayoría de los pacientes con cáncer y explorar nuevas dianas terapéuticas han sido focos clave
de esta área. Al igual que los CTL antitumorales, las células NK son células efectoras antitumorales esenciales que
también son funcionalmente tolerantes en los microambientes tumorales. Sin embargo, estudios preclínicos limitados
han explorado el potencial de aumentar la inmunidad antitumoral mediada por células NK. TIGIT es un receptor
inhibidor de la superficie celular. A diferencia de la PD-1 y CTLA-4, el TIGIT se expresa tanto en las células T como
en las células NK8. Estudios emergentes han demostrado que el bloqueo de TIGIT podría ser un suplemento potencial
para las inmunoterapias existentes9,13,14,32,33. Sin embargo, los mecanismos de acción del bloqueo del TIGIT no se
comprenden plenamente. En el presente estudio, investigamos el papel del TIGIT en la regulación de la inmunidad
antitumoral mediada por células NK y la importancia de las células NK en la eficacia terapéutica de la inmunoterapia
tumoral basada en el bloqueo del TIGIT y la PD-L1. Encontramos que las células NK infiltrantes del tumor que expresan
TIGIT se asociaron con el agotamiento funcional de las células NK infiltrantes del tumor y la progresión del tumor en
los tumores de ratón. La deficiencia de TIGIT en las células NK solas inhibió significativamente el crecimiento tumoral
in vivo. El bloqueo del TIGIT revirtió el agotamiento de las células NK y mejoró la inmunidad antitumoral mediada
por células NK. Por lo tanto, las células NK son críticas para los efectos terapéuticos del bloqueo del TIGIT. Esto
sugiere que la presencia de células NK y el nivel de expresión de TIGIT en las células NK podrían ser críticos para el
resultado clínico de la inmunoterapia basada en TIGIT.
En nuestros modelos, la PD-1 y CTLA-4 fueron expresadas principalmente por células T tumorales y apenas fueron
expresadas por células NK tumorales, lo que sugiere que el bloqueo de la PD-1 y CTLA-4 podría afectar principalmente
a las células T, mientras que las células NK permanecerían funcionalmente agotadas. Además, tanto las células NK

2
como las células T infiltrantes tenían una alta expresión de TIGIT, lo que indicaba que el bloqueo de TIGIT, como
monoterapia, podría ser superior a la hora de revertir simultáneamente el agotamiento tanto de las células T como de
las células NK, mientras que el bloqueo único de otras moléculas (CTLA-4, PD-1 o KIR) puede recuperar la función
de un solo tipo de célula a la vez34. Nuestros datos también demostraron, por primera vez, que la presencia de células
NK era crítica para los efectos terapéuticos del bloqueo del TIGIT. Un estudio publicado ha reportado que el
agotamiento de las células CD8+, así como el bloqueo de CD226, disminuye los efectos terapéuticos del bloqueo de
TIGIT13. Aquí, encontramos que la ausencia de células NK disminuía los efectos terapéuticos del bloqueo del TIGIT,
y que el bloqueo del TIGIT revertía directamente el agotamiento de las células NK que infiltraban el tumor
independientemente de las células T, indicativo de un papel crítico para las células NK en los efectos terapéuticos del
bloqueo del TIGIT. En conjunto, estos hallazgos sugieren que la presencia de células NK podría ser crítica para el
resultado clínico de la inmunoterapia basada en TIGIT. Además, demostramos que el bloqueo de la PD-L1 también
dependía de las células NK. Dado que las células NK mejoran la función de las células T CD8+ y/o evitan su
agotamiento, el potencial revigorizante de las células T CD8+ del bloqueo de la PD-L1 podría verse comprometido en
ausencia de células NK. Esto podría explicar los efectos dependientes de las células NK del anti-PDL1 que observamos,
aunque no podemos excluir la posibilidad de efectos citotóxicos directos de las células NK en este contexto.
Un estudio publicado ha demostrado que el bloqueo dual de la PD-L1 y el TIGIT da lugar a una respuesta secundaria
al nuevo desafío del tumor13. Sin embargo, no se ha investigado la contribución de las células NK en este contexto.
Aquí, nuestros datos mostraron que las células NK normalmente actuaban para mantener la función de efector
antitumoral de las células T CD8+, lo que indicaría una función de ayuda de las células NK en la inmunidad CTL35 ,36.
En línea con esto, el aumento de la función de las células NK por la deficiencia específica de células NK en TIGIT o el
bloqueo de TIGIT podría proporcionar ayuda adicional para aumentar la inmunidad primaria mediada por células T
CD8+ y posiblemente para obtener una potente respuesta de memoria mediada por células T a un nuevo desafío tumoral,
como se muestra en nuestro estudio. Sin embargo, los mecanismos utilizados por las células NK en la inducción de
respuestas de la memoria después del bloqueo de TIGIT aún necesitan más investigación. En resumen, nuestros
hallazgos apoyan la noción de que el bloqueo de TIGIT mejora la inmunidad antitumoral del huésped de una manera
no redundante dependiente de células NK y que la presencia de células NK podría ser crítica para los efectos
terapéuticos de ciertas inmunoterapias.