Plan de travail :

 Partie théorique :
o Définition d’un milieu de culture
o Les types d’un milieu de culture
o A quoi sert chaque type
o Le king B
 Partie pratique :
o Matérielles
o Produits
o Les étapes de la préparation
Définition :
Milieu de culture :
Un milieu de culture est un support qui permet la culture de cellules, de bactéries, de
levures, de moisissures afin de permettre leur étude. En principe, les cellules trouvent dans
ce milieu les composants indispensables pour leur multiplication en grand nombre,
rapidement, mais aussi parfois des éléments qui permettront de privilégier un genre
bactérien ou une famille. Ainsi, selon le but de la culture, il est possible de placer les micro-
organismes dans des conditions optimales, ou tout à fait défavorables.

Il se compose d'une base (agar-agar, eau, minéraux...) ainsi que d'un indicateur coloré de
pH ou de réaction d'oxydo-réduction pour permettre de formuler des hypothèses sur le
genre.

Il existe aussi des bouillons de culture qui possèdent la même fonction, mais ces milieux ne
contiennent pas d'agar-agar, ils sont donc totalement liquides
Les type d’un milieu de culture et a quoi sert chaque type :

. Milieu chromogène : milieu de culture contenant des substrats qui permettent

la coloration des colonies cultivées.
. Milieu différentiel : milieu de culture permettant de mettre en évidence un
caractère particulier du microorganisme étudié.
. Milieu enrichi : milieu de culture enrichi grâce à un liquide riche en
molécules organiques, permettant le développement de microorganismes
exigeants.
. Milieu minimum : milieu de culture contenant les éléments strictement
nécessaires à la croissance d’un microorganisme.
. Milieu sélectif : milieu de culture qui favorisant ou empêche la croissance
de certains microorganismes.
. Milieu usuel : milieu de culture permettant la culture d’une grande variété de
microorganismes non exigeants.
 Gélose KING B
DOMAINE D’UTILISATION :

La gélose King B permet la production de fluorescéine (ou pyoverdine), pigment jaune vert
fluorescent sous lumière ultra-violette, par certains Pseudomonas. Le milieu est utilisé
principalement dans l’analyse de l’eau pour la détection et la différenciation de
Pseudomonas aeruginosa qui produit ce pigment fluorescent contrairement à certaines
espèces de Pseudomonas qui n’en produisent pas.

Historique :
Le milieu a été décrit par King, Ward et Raney en 1954, puis la formule a été modifiée selon
les recommandations de la Pharmacopée américaine. Les auteurs ont également mis au point le
milieu King A qui favorise la production de pyocyanine (pigment fluorescent bleu) au
détriment de
la pyoverdine

PRINCIPES :
La gélose King B favorise la production de pyoverdine et inhibe par ailleurs la production de
pyocyanine. La fluorescéine produite par les Pseudomonas est un pigment jaune vert
fluorescent qui est facilement détecté sur ce milieu.
Le phosphate dipotassique augmente la concentration en phosphore apporté par la peptone et
stimule ainsi la production de fluorescéine, tout en inhibant la production de pyocyanine.
Le sulfate de magnésium apporte les cations nécessaires à la production de pyoverdine.

FORMULE - TYPE du milieu complet :

(pouvant être ajustée de façon à obtenir des performances optimales)
Pour 1 litre de milieu :

Peptone ......................................................................................... 20,0 g

- Glycérol....................................................................................... 10,0 mL
- Phosphate dipotassique .................................................................. 1,5 g
- Sulfate de magnésium, 7 H2O ......................................................... 1,5 g
- Agar agar bactériologique.............................................................. 15,0 g
Matériels :

 Agitateur
 Balance
 Autoclave
 Bécher
 Spatule
 Boîte pétri
 Eau distillée


Produits :

1. Agar
2. Peptone
3. Magnésium sulfate heptahydrate
4. Potassium hydrogen
5. Gylose

photo des produits utiliser

Les différents étapes de préparation :

Photos des produits utiliser et le mélange des produits

Photo de la solution