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NORMA

TÉCNICA

ECUATORIANA

NORMA TÉCNICA ECUATORIANA Quito – Ecuador NTE INEN 1500 Segunda revisión 2017-09 LECHE CRUDA. DETERMINACIÓN DE

Quito Ecuador

NTE INEN 1500

Segunda revisión

2017-09

LECHE CRUDA. DETERMINACIÓN DE LA ADULTERACIÓN. MÉTODOS DE ENSAYO CUALITATIVOS

RAW MILK. DETERMINATION OF ADULTERATION. QUALITATIVE TEST METHODS

ICS: 67.100

15

Páginas

NTE INEN 1500

2017-09

LECHE CRUDA DETERMINACIÓN DE LA ADULTERACIÓN MÉTODOS DE ENSAYO CUALITATIVOS

1. OBJETO Y CAMPO DE APLICACIÓN

Esta norma establece los métodos de ensayo cualitativos para la determinación de la adulteración de leche cruda.

Esta norma aplica a métodos de ensayo cualitativos para la detección de las siguientes sustancias: formaldehído, peróxido de hidrógeno, hipocloritos y cloraminas, neutralizantes alcalinos (óxidos, hidróxidos, carbonatos y bicarbonatos), componentes de amonio, urea, jabones y detergentes, almidones y sacarosa, y gelatina.

2. REFERENCIAS NORMATIVAS

Los siguientes documentos, en su totalidad o en parte, son indispensables para la aplicación de este documento. Para referencias fechadas, solamente aplica la edición citada. Para referencias sin fecha, aplica la última edición (incluyendo cualquier enmienda).

NTE INEN-ISO 707, Leche y productos lácteos - Directrices para la toma de muestras

NTE INEN-ISO 3696, Agua para uso en análisis de laboratorio - Especificación y métodos de ensayo

3. TÉRMINOS Y DEFINICIONES

Para los efectos de esta norma, se adoptan las siguientes definiciones

3.1

leche cruda Leche que no ha sido sometida a ningún tipo de calentamiento, es decir, su temperatura no ha

superado la de la leche inmediatamente después de ser extraída de la ubre (no más de 40°C).

[FUENTE: NTE INEN 9:2012, 3.2.1]

3.2

adulteración de leche cruda Acto por el cual se altera la leche cruda, siendo privada en forma parcial o total, de sus elementos útiles o característicos, reemplazándolos o no, por otros inertes o extraños de cualquier naturaleza, para disimular u ocultar alteraciones o calidad deficiente.

4. TOMA DE MUESTRAS

La toma de muestras debe realizarse de acuerdo con NTE INEN-ISO 707 de manera que se obtengan muestras representativas del producto.

5. PREPARACIÓN DE LA MUESTRA

La muestra de leche cruda debe homogeneizarse previo a la realización de cada ensayo.

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6. MÉTODOS PARA LA DETECCIÓN DE FORMALDEHÍDO

6.1

Método I: Prueba de Hehner

6.1.1

Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

NOTA. De aquí en adelante el agua de grado 1, grado 2 o grado 3 de uso para análisis de laboratorio se denominará simplemente agua.

6.1.1.1 solución cloruro de hierro (III) (FeCl 3 ) recién preparada

Diluir 1 g de cloruro de hierro en 100 mL de agua.

6.1.1.2 ácido

volumétrica de 0,98 (98 % de H 2 SO 4 )

tetraoxosulfúrico

(VI)

(ácido

sulfúrico

=

6.1.1.3 tubos de ensayo, 20 mL

6.1.1.4 pipetas graduadas, 2 mL

6.1.1.5 gotero

H 2 SO 4 ),

concentración

en

fracción

6.1.2

Procedimiento

6.1.2.1

A 2 mL de ácido sulfúrico (6.1.1.2) añadir una gota de la solución de cloruro de hierro

(6.1.1.1) y agitar.

6.1.2.2 Pipetear 2 mL de la muestra de leche cruda homogenizada y colocar en un tubo de

ensayo (6.1.1.3), añadir 2 mL del ácido sulfúrico con el cloruro de hierro (6.1.2.1) lentamente por las paredes del tubo de ensayo.

PRECAUCIÓN: Si se agrega ácido sulfúrico desde la parte superior y no desde las paredes del tubo de ensayo, puede quemar los sólidos de la leche y afectar al resultado final.

6.1.3 Expresión de los resultados

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración púrpura en la interfase entre el ácido y la leche.

6.2

Método II: Prueba del ácido cromotrópico

6.2.1

Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

6.2.1.1 solución de ácido tetraoxosulfúrico (VI) (ácido sulfúrico = H 2 SO 4 ), fracción volumétrica

de 0,72 (72 % de H 2 SO 4 )

6.2.1.2 solución saturada de ácido 4,5-dihidroxinaftaleno-2,7-disulfónico (ácido cromotrópico

= C 10 H 8 O 8 S 2 ), en ácido sulfúrico

Disolver aproximadamente 500 mg de ácido cromotrópico en 100 mL de la solución de ácido sulfúrico (6.2.1.1).

6.2.1.3 tubos de ensayo, 20 mL

6.2.1.4 pipetas graduadas, 5 mL

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6.2.3 Procedimiento

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Pipetear 1 mL de la muestra de leche cruda y colocar en un tubo de ensayo (6.2.1.3), añadir 1 mL de la solución saturada de ácido cromotrópico (6.2.1.2) mezclar bien y observar el color.

6.2.4 Expresión de resultados

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración amarilla.

7. MÉTODOS PARA LA DETECCIÓN DE PERÓXIDO DE HIDRÓGENO

7.1

Método I: Arnold y Mentzer (óxido de vanadio)

7.1.1

Principio

El óxido de vanadio (V 2 O 5 ) en presencia de ácido sulfúrico (H 2 SO 4 ) reacciona con el peróxido de hidrógeno (dióxido de hidrógeno (H 2 O 2 )), dando un compuesto de color rojo o rosado.

7.1.2 Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

7.1.2.1 solución de ácido tetraoxosulfúrico (VI) (ácido sulfúrico = H 2 SO 4 ), fracción volumétrica

de 0,98 (98 % de H 2 SO 4 )

Diluir 6 mL de ácido sulfúrico (7.1.2.1), en 94 mL de agua.

7.1.2.2 solución de pentaóxido de divanadio (óxido de vanadio = V 2 O 5 )

Pesar 1 g de óxido de vanadio y disolver en 100 mL de ácido sulfúrico diluido (7.1.2.1).

7.1.2.3 tubos de ensayo, 20 mL

7.1.2.4 pipetas graduadas, 5 mL y 10 mL

7.1.3

Equipo

7.1.3.1

balanza electrónica

7.1.4

Procedimiento

7.1.4.1

Pipetear 10 mL de leche cruda en un tubo de ensayo (7.1.2.3), añadir de 10 a 20 gotas de

la solución de óxido de vanadio (7.1.2.2) y agitar.

7.1.5 Expresión de resultados

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración roja o rosada.

7.2

Método II: Yoduro de potasio y almidón

7.2.1

Principio

La catalasa natural de la leche destruye al peróxido añadido. El yoduro de potasio reacciona con el peróxido de hidrógeno dando una coloración azul.

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7.2.2 Reactivos y materiales

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Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

7.2.2.1 solución de yoduro de potasio (KI)

Pesar 20 g de yoduro de potasio y disolver en agua hasta obtener un volumen de 100 mL. Esta solución debe preparase en cada ensayo.

7.2.2.2 solución

(hidroximetil) oxan-3-il] oxi-oxano-3,4,5-triol (solución de almidón = (C 6 H 10 O 5 ) n )

de

(2R,3S,4S,5R,6R)-2-(hidroximetil)-6-[(2R,3S,4R,5R,6S)-4,5,6-trihidroxi-2-

Pesar 1 g de almidón soluble, disolver en 20 mL de agua fría, luego colocar 55 mL de agua caliente y someter a ebullición, enfriar, luego añadir agua hasta un volumen de 100 mL.

7.2.2.3 solución yoduro de potasio (7.2.2.1) almidón (7.2.2.2), relación 1:1

Mezclar volúmenes iguales de la solución de yoduro de potasio (7.2.2.1) y de la solución de almidón (7.2.2.2).

7.2.2.4 tubos de ensayo, 20 mL

7.2.2.5 pipetas graduadas, 1 mL

7.2.3 Procedimiento A

Pipetear 1 mL de leche cruda y colocar en el tubo de ensayo (7.2.2.4) y añadir 1 mL de la solución de yoduro de potasio-almidón (7.2.2.3) y agitar.

7.2.4 Procedimiento B

Pipetear 1 mL de leche cruda y colocar en el tubo de ensayo (7.2.2.4) y añadir 1 mL de la solución de yoduro de potasio (7.2.2.1) y agitar.

7.2.5 Expresión de resultados

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración púrpura, del procedimiento A.

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración amarilla, del procedimiento B.

 

8.

MÉTODO DE ENSAYO PARA LA DETECCIÓN DE HIPOCLORITOS Y CLORAMINAS

8.1

Principio

La presencia de hipocloritos (ClO−) o cloraminas (NH 2 Cl) en leche cruda son detectados por acción del ácido clorhídrico (HCl) y yoduro de potasio (KI), se forma cloro libre, presentando cambios de color dependiendo de su concentración.

8.2 Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

8.2.1 solución de yoduro de potasio (KI)

Disolver 7,0 g de yoduro de potasio en 100 mL de agua. Esta solución debe preparase en cada ensayo.

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8.2.2 solución de cloruro de hidrógeno (ácido clorhídrico = HCl)

A 200 mL de agua añadir con cuidado 100 mL de ácido clorhídrico, fracción volumétrica de 0,365 a 0,385 (36,5 % a 38,5 % de HCl).

8.2.3 solución

(hidroximetil) oxan-3-il] oxi-oxano-3,4,5-triol (solución de almidón = (C 6 H 10 O 5 ) n )

de

(2R,3S,4S,5R,6R)-2-(hidroximetil)-6-[(2R,3S,4R,5R,6S)-4,5,6-trihidroxi-2-

Hervir 1 g de almidón soluble en 100 mL de agua. Enfriar antes de usar.

8.2.4

pipetas graduadas, 2 mL y 5 mL

8.2.5

tubos de ensayo, 20 mL

8.2.6

varillas de vidrio de extremo plano

8.3

Equipo

8.3.1

baño de agua con temperatura controlada

8.4

Procedimiento

8.4.1

Ensayo I

Pipetear 5 mL de leche cruda y colocar en un tubo de ensayo (8.2.5), añadir 1,5 mL de la solución de yoduro de potasio (8.2.1), mezclar completamente y observar el color.

8.4.2 Ensayo II

Si no cambia de color, pipetear en un tubo de ensayo (8.2.5) 4 mL de la solución de ácido clorhídrico (8.2.2), mezclar bien con una varilla de vidrio de extremo plano y observar el color de la cuajada.

8.4.3 Ensayo III

Colocar en el baño de agua (8.3.1) a temperatura de 85 °C y dejar por 10 minutos (durante este tiempo la cuajada sube a la superficie), enfriar rápidamente colocando el tubo en agua fría. Anotar el color de la cuajada y del líquido.

8.4.4 Ensayo IV

Añadir de 0,5 mL a 1 mL de la solución de almidón (8.2.3) al líquido por debajo de la cuajada. Observar el color inmediatamente.

8.5 Expresión de los resultados

La concentración de cloro libre puede determinarse a partir de la Tabla 1.

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TABLA 1. Reacciones de los diferentes ensayos para detectar la concentración de cloro libre

Prueba

 

Concentración de cloro libre

 

1 : 1 000

1 : 2 000

1 : 5 000

1 : 10 000

1 : 25 000

1 : 50 000

Ensayo I

Marrón

Amarillo

Amarillo

- -

 

-

amarillento

oscuro

pálido

Ensayo II

Marrón

Amarillo

Amarillo

- -

 

-

amarillento

oscuro

claro

Ensayo III

Marrón

Amarillo

Amarillo

Amarillo

Amarillo

amarillo

amarillento

oscuro

pálido

Ensayo IV

Azul-púrpura

Azul-púrpura

Azul-púrpura

Rojo oscuro-

Rojo-

Rojo pálido - púrpura

púrpura

púrpura

9. MÉTODOS PARA LA DETECCIÓN DE NEUTRALIZANTES ALCALINOS

Existen diversas sustancias alcalinas que neutralizan al ácido láctico desarrollado por la fermentación de la lactosa realizada por microorganismos específicos, dentro de estas sustancias alcalinas están los carbonatos, hidróxidos, bicarbonatos y óxidos.

9.1

Método I: Prueba del ácido rosólico (aurina)

9.1.1

Principio

El ácido rosólico es un indicador de pH que tiene un rango de viraje entre 6,8 a 8,0. Esta prueba es utilizada para detectar la presencia de hidróxidos, carbonatos, bicarbonatos de sodio o calcio añadidos a la leche cruda.

9.1.2 Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

9.1.2.1 solución de etanol (alcohol etílico = C 2 H 5 OH), fracción volumétrica 0,95 (95 % etanol)

Medir 95 mL de etanol absoluto en un matraz aforado de 100 mL y completar a este volumen utilizando agua y mezclar bien.

9.1.2.2 solución de 4-[bis(p-hidroxifenil) metileno]-2,5- Ciclohexadieno-1-ona (ácido rosólico

= C 19 H 14 O 3 )

Pesar 100 mg de ácido rosólico en polvo y colocar en un balón aforado (9.1.2.5) y disolver en 30 mL de la solución de etanol (9.1.2.1) y completar con agua hasta 100 mL.

9.1.2.3 tubos de ensayo, 20 mL

9.1.2.4 pipetas graduadas, 2 mL

9.1.2.5 balones aforados, 100 mL

9.1.3

Equipo

9.1.3.1

balanza electrónica

9.1.4

Procedimiento

Pipetear 10 mL de leche cruda en un tubo de ensayo (9.1.2.3) y añadir 10 mL de la solución de etanol (9.1.2.1). Añadir unas 2 a 3 gotas de la solución de ácido rosólico (9.1.2.2) y mezclar.

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9.1.5 Expresión de resultados

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Reportar el resultado como positivo si existe una coloración roja-rosada.

9.2

Método II: Prueba de rojo fenol

9.2.1

Principio

El método de rojo fenol es una prueba cualitativa que consisten en añadir a la muestra una cantidad de solución de rojo de fenol; la formación de un color rojo intenso indica que sí existe presencia de neutralizantes en la leche cruda.

9.2.2 Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

9.2.2.1 solución de 4,4'-(1,1-Dióxido-3H-2,1-benzoxatiol-3,3-diil) difenol o fenolsulfonftaleina

(rojo fenol = C 19 H 14 O 5 S)

Pesar 0,05 g de rojo fenol y disolver en 7 mL de hidróxido de sodio (NaOH) 0,02 N y aforar a 100 mL con agua.

9.2.2.2 solución de hidrogencarbonato (IV) de sodio (bicarbonato de sodio = NaHCO 3 )

Pesar 5 g de bicarbonato de sodio y diluir con agua previamente hervida y fría, y luego completar hasta 100 mL.

9.2.2.3 solución testigo de leche cruda

Agregar 2 mL de metanal (formol = CH 2 O) al 37 % (fracción volumétrica de 0,37) en 1 L de leche cruda, para conservar la muestra.

9.2.2.4 soluciones patrón de leche con bicarbonato de sodio

Medir las siguientes cantidades de la solución de bicarbonato de sodio (9.2.2.2) y colocar en balones aforados y completar con leche hasta el volumen de 100 mL.

Balón aforado de 100

Solución de bicarbonato de

% Bicarbonato de sodio en leche cruda

mL

sodio 50 mg/mL

1

1 mL

0,05

2

2 mL

0,10

3

3 mL

0,15

NOTA. Estas soluciones deben conservarse en refrigeración y diariamente serán analizadas como patrón de comparación.

9.2.2.5 tubos de ensayo, 20 mL

9.2.2.6 pipetas graduadas, 5 mL

9.2.2.7 balones aforados, 100 mL

9.2.2.8 micropipetas, 100 L

9.2.3 Procedimiento

Medir 5 mL de la muestra de leche cruda, añadir 5 mL de agua y 0,5 mL de la solución de rojo fenol (9.2.2.1). Agitar suavemente y observar el color.

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9.2.4 Expresión de resultados

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Reportar el resultado como positivo si existe una coloración roja intensa.

NOTA. Comparar la coloración con las soluciones patrón.

10. MÉTODO DE ENSAYO PARA LA DETECCIÓN DE COMPONENTES DE AMONIO

10.1

Método I

10.1.1

Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

10.1.1.1

solución de hidróxido de sodio (NaOH), 2 g/100 mL

10.1.1.2

solución de hipoclorito de sodio (NaClO), 2 g/100 mL

10.1.1.3

solución de fenol (C 6 H 6 O), fracción volumétrica 0,05 (5 % de C 6 H 6 O)

10.1.1.4

tubos de ensayo, 20 mL

10.1.1.5

pipetas graduadas, 1 mL

10.1.2

Equipo

10.1.2.1

baño de agua

10.1.3

Procedimiento

10.1.3.1

Pipetear 1,0 mL de leche cruda en un tubo de ensayo (10.1.1.4), añadir 0,5 mL de la

solución de hidróxido de sodio (10.1.1.1), 0,5 mL de la solución de hipoclorito de sodio (10.1.1.2) y 0,5 mL de la solución de fenol (10.1.1.3).

10.1.3.2

Calentar durante 20 segundos en un baño de agua hirviendo (10.1.2.1).

10.1.4

Expresión de resultados

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración azul oscuro, este color indica la presencia de sulfato de amonio; un color rosa indica que la muestra está libre de sulfato de amonio.

10.2

Método II. Reactivo de Nessler

10.2.1

Reactivos

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696

10.2.1.1 reactivo de Nessler

10.2.1.1.1 Preparar las siguientes soluciones:

Solución A Pesar 0,8 g de cloruro de mercurio (II) (HgCl 2 ) y disolver en 15 mL de agua.

Solución B Pesar 6 g de hidróxido de sodio (NaOH) y disolver en 15 mL de agua.

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Solución C Pesar 0,6 g de yoduro de potasio (Kl) y disolver en 15 mL de agua.

10.2.1.1.2 Añadir en un balón aforado (10.2.1.3) la solución A y la solución B, mezclar bien. A esta

mezcla, añadir la solución C, mezclar y diluir el contenido con agua hasta alcanzar el volumen de 50 mL.

10.2.1.1.3 Decantar la capa inferior de la capa superior que es transparente, usando un embudo

de separación de vidrio (10.2.1.6), almacenar en una botella de vidrio bien cerrada.

10.2.1.2

matraces graduados, 50 mL

10.2.1.3

balón aforado, 50 mL

10.2.1.4

probetas, 50 mL

10.2.1.5

tubos de ensayo, 20 mL

10.2.1.6

embudo de separación de vidrio

10.2.2

Equipo

10.2.2.1

balanza electrónica

10.2.3

Procedimiento

Pipetear 5 mL de muestra de leche cruda en un tubo de ensayo (10.2.1.5), añadir 1 mL del reactivo de Nessler (10.2.1.1) y mezclar bien el contenido del tubo. Observar el color.

10.2.4 Expresión de resultados

La formación inmediata de un ligero color gris indica la presencia de una baja concentración de compuestos de amonio.

11. MÉTODO DE ENSAYO PARA LA DETECCIÓN DE UREA

11.1 Principio

La urea (Diaminometanal, CON 2 H 4 ) es un componente natural de la leche y forma una parte importante de la proteína de la leche, la concentración de urea varía de entre 20 mg/100 mL a 70 mg/100 mL. Un contenido mayor a 70 mg/100 mL indica que fue añadida urea a la leche cruda. La urea en leche cruda es detectada usando 4-Dimetilaminobenzaldehído (DMAB), el método se basa en el principio de que la urea forma un complejo amarillo con DMAB en una solución poco ácida a temperatura ambiente.

11.2 Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

11.2.1

cloruro de hidrógeno (ácido clorhídrico = HCl), fracción volumétrica 0,355 (35,5 % de

HCl)

11.2.2

etanol (alcohol etílico = C 2 H 5 OH), fracción volumétrica 0,96 (96 % de etanol)

11.2.3

solución de 4-Dimetilaminobenzaldehído, (DMAB = CH₁₁NO)

Pesar 1,6 g de DMAB y disolver en 100 mL de etanol (11.2.2) y añadir 10 mL de ácido clorhídrico

(11.2.1).

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11.2.4 matraces graduados, 250 mL

11.2.5 pipetas graduadas, 1 mL y 10 mL

11.3 Equipo

11.3.1 balanza electrónica

11.4 Procedimiento

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Pipetear en un tubo de ensayo 1 mL de leche cruda y añadir 1 mL de la solución de DMAB. Observar el color.

11.5 Expresión de resultados

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración amarilla.

12. MÉTODO DE ENSAYO PARA LA DETECCIÓN DE JABONES Y DETERGENTES

12.1 Principio

El ácido alquil benceno sulfónico (ABS) o el detergente aniónico pueden estar presente en la leche cruda debido a la adición intencional o debido a un lavado insuficiente de los materiales o equipos de ordeño. El siguiente método se basa en la interacción iónica entre el detergente aniónico y un colorante catiónico. Los detergentes aniónicos tienen una propiedad para formar un complejo con tintes catiónicos. La solubilidad del colorante y del complejo “colorante-detergente” es menos polar en comparación que el colorante solo. El método se realiza mediante la adición de solución de colorante de azul de metileno y cloroformo a la leche cruda seguido de una centrifugación.

12.2 Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

12.2.1 solución colorante de 3,7-bis (dimetilamino)-Cloruro de fenazationio-Cloruro de

tetrametiltionina (azul de metileno = C 16 H 18 N 3 ClS)

Disolver 12,5 mg de azul de metileno en 100 mL de agua. Proteger la solución de la luz directa del sol.

12.2.2 triclorometano (cloroformo = CHCl 3 )

PRECAUCIÓN: El cloroformo es inflamable y tóxico al inhalar, se recomienda no pipetear directamente con la boca.

12.2.3

tubos de ensayo, 20 mL

12.2.4

pipetas graduadas, 1 mL y 2 mL

12.3

Equipo

12.3.1

centrifugadora

12.4

Procedimiento

12.4.1

Pipetear 1 mL de la muestra de leche cruda en un tubo de ensayo (12.2.3). Añadir 1 mL de

solución de azul de metileno (12.2.1) y en seguida añadir 2 mL de cloroformo (12.2.2). Mezclar durante unos 15 segundos y centrifugar aproximadamente a 115,19 rad/s (1 100 rpm) durante 3 min.

 

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12.4.2

Observar la intensidad del color azul en la capa inferior y superior.

12.5

Expresión de resultados

12.5.1

La formación de un color azul intenso en la capa inferior indica la presencia de detergente

en la leche cruda.

12.5.2 La formación de un color azul intenso en la capa superior indica la ausencia de detergente

en la leche cruda.

13. MÉTODO PARA LA DETECCIÓN DE ALMIDONES Y SACAROSA

13.1

Método para detectar almidones

13.1.1

Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

13.1.1.1 solución de iodo (I)

Disolver 2,6 g de yodo y 3 g de yoduro de potasio (KI) con suficiente cantidad de agua y completar hasta el volumen de 200 mL

13.1.1.2

recipiente con agua y hielo

13.1.1.3

tubos de ensayo, 20 mL

13.1.1.4

pipeta graduada, 5 mL

13.1.1.5

gotero

13.1.1.6

balón aforado, 200 mL

13.1.2

Equipo

13.1.2.1

fuente de calor

13.1.3

Procedimiento

Pipetear 5 mL de leche cruda en un tubo de ensayo (13.1.1.3), someter a ebullición, enfriar en el recipiente que contienen agua con hielo y agregar 5 gotas la solución de iodo (13.1.1.1).

13.1.4 Expresión de resultados

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración azul.

13.2

Método para detectar sacarosa: Seliwanoff Modificado

13.2.1

Principio

La fructosa en el azúcar de caña (sacarosa) reacciona con resorcinol en ácido clorhídrico para dar color rojo.

13.2.2 Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

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2017-09

13.2.2.1 cloruro de hidrógeno

de ácido clorhídrico)

(ácido clorhídrico = HCl), fracción volumétrica de 0,355 (35,5 %

13.2.2.2 solución de resorcinol (C 6 H 4 (OH) 2 )

Pesar 0,5 g de resorcinol (C 6 H 4 (OH) 2 ) en aproximadamente 40 mL de agua. Añadir 35 mL de ácido clorhídrico (13.2.2.1) y completar con agua hasta un volumen de 100 mL.

NOTA. Las escamas de resorcinol deben ser de color blanco.

13.2.2.3 balón aforado, 100 mL

13.2.2.4 tubos de ensayo, 20 mL

13.2.2.5 pipetas graduadas, 1 mL

13.2.3 Equipo

13.2.3.1 baño de agua

13.2.4

Procedimiento

13.2.4.1

Pipetear 1 mL de leche cruda en un tubo de ensayo

(13.2.2.4). Añadir 1 mL de la

solución de resorcinol (13.2.2.2) y mezclar.

13.2.4.2 Colocar el tubo de ensayo en un baño de agua (13.2.3.1)

Retirar el tubo y observar el color.

13.2.5 Expresión de resultados

hirviendo durante 5 min.

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración rosada.

14. MÉTODO PARA LA DETECCIÓN DE GELATINA

14.1 Reactivos y materiales

Utilizar solo reactivos de calidad analítica reconocida y agua de uso para análisis de laboratorio que cumpla con NTE INEN-ISO 3696.

14.1.1

solución de nitrato de mercurio (II) (Hg(NO 3 ) 2 )

14.1.2

solución saturada de 2,4,6-Trinitrofenol (ácido pícrico = C 6 H 2 OH(NO 2 ) 3 )

14.1.3

tubos de ensayo, 50 mL

14.1.4

pipetas graduadas, 10 mL y 20 mL

14.2

Procedimiento

14.2.1

Pipetear en un tubo de ensayo (14.1.3) 10 mL de leche cruda, y añadir 10 mL de la

solución de nitrato de mercurio (II) (14.1.1). Agitar la mezcla y añadir 20 mL de agua, agitar otra vez, dejar en reposo 5 minutos y filtrar.

14.2.2 Si hay gelatina presente, el filtrado se verá opaco, no se conseguirá obtener un filtrado

más claro.

14.2.3 Pipetear en un tubo de ensayo una porción del filtrado y añadir un volumen igual de la

solución saturada de ácido pícrico (14.1.2). Se producirá una precipitación en función de la cantidad considerable de gelatina, cantidades menores se mostrará una nubosidad.

NTE INEN 1500

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NOTA. El ensayo es aplicable también a otros productos lácteos, como productos fermentados, agrios, cultivos lácticos, leches maduras, crema o mantequilla, crema de leche esterilizada, leche evaporada o queso requesón. Hay que tener cuidado en reconocer el precipitado producido por el ácido pícrico al añadirse a los filtrados de nitrato de mercurio en ausencia de gelatina. Las muestras con o sin cuajo y libres de gelatina, dan un precipitado distinto a lo anterior. Sin embargo, estos precipitados difieren en características a los producidos por el ácido pícrico con gelatina. El precipitado de gelatina-ácido pícrico estará finamente dividido, y será más apto para permanecer en suspensión, y se adherirá firmemente al fondo del tubo de ensayo, el cual se enjuagará con dificultad. Los precipitados producidos por el ácido pícrico en ausencia de gelatina son flóculos que se separarán fácilmente (dejando el suero prácticamente transparente), no se adherirán a las paredes del tubo de ensayo y se eliminarán fácilmente enjuagando con agua. Cuando la gelatina esté presente, el precipitado de ácido pícrico permanecerá en suspensión mucho después de que se haya formado el precipitado floculante, con el paso del tiempo se encontrará que se adherirá firmemente al fondo y a los lados del tubo de ensayo. Si la gelatina está presente en una concentración relativamente alta (1 %), el precipitado de ácido pícrico será voluminoso y se asentará con bastante rapidez.

14.3 Expresión de resultados

Reportar el resultado como positivo si existe una coloración amarilla en el precipitado.

NTE INEN 1500

ANEXO A

(Informativo)

2017-09

DETERMINACIÓN DE LA ADULTERACIÓN DE LECHE CRUDA CON LA UTILIZACIÓN DE PRUEBAS RÁPIDAS DENOMINADAS “KITS”

Existen pruebas rápidas para la determinación de adulterantes en leche cruda, las cuales están conformadas por un conjunto de reactivos y utensilios que siguiendo las instrucciones del fabricante permiten conseguir el objetivo esperado. Estas pruebas rápidas, “KITS”, son usadas como métodos de ensayos rápidos más no definitivos, siempre y cuando estos provean resultados de medición apropiados y confiables para su uso previsto en la evaluación de la veracidad de los resultados.

NOTA. Los resultados obtenidos con los métodos normalizados son determinantes en caso de litigio.

NTE INEN 1500

BIBLIOGRAFÍA

AOAC 931.08, Formaldhyde in Food

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AOAC 957.08, Hydrogen Peroxide in Milk. Qualitative Color Test

AOAC 911.08, Hypochlorites and Chloramines in Milk. Colorimetric Method Procedure

AOAC 920.106, Gelatin in Milk and Milk products. Qualitative Test

FOOD SAFETY AND STANDARDS AUTHORITY OF INDIA (FSSI). Manual of methods of analysis of foods - Milk and milk products. MINISTRY OF HEALTH AND FAMILY WELFARE GOVERNMENT OF INDIA. NEW DELHI 2016. P 7-28. Disponible en:

IS 1479-2:1961, (Reaffirmed 2009) Methods of test for dairy industry - Part II chemical analysis of milk. Disponible en: https://law.resource.org/pub/in/bis/S06/is.1479.2.1961.pdf [Consulta: 2016-10-

17]

IS 1470-1:1960, (Reaffirmed 2003) Methods of test for dairy industry Part I Rapid examination of milk. Disponible en: https://law.resource.org/pub/in/bis/S06/is.1479.1.1960.pdf [Consulta: 2016-10-

17]

PEE/CL/017, Procedimiento específico de ensayo. “Determinación de neutralizantes mediante la prueba de rojo fenol”. AGENCIA ECUATORIANA DE ASEGURAMIENTO DE LA CALIDAD DEL AGRO (AGROCALIDAD). Revisión 1. 2015

INFORMACIÓN COMPLEMENTARIA

Documento:

TÍTULO: LECHE CRUDA. DETERMINACIÓN DE LA

Código ICS:

NTE INEN 1500 Segunda revisión

ADULTERACIÓN. MÉTODOS DE ENSAYO CUALITATIVOS

67.100

ORIGINAL:

REVISIÓN:

Fecha de iniciación del estudio:

La Subsecretaría de la Calidad del Ministerio de Industrias y Productividad aprobó este proyecto de norma Oficialización con el Carácter de Voluntaria por Resolución No. 11 139 de 2011-05-20 publicado en el Registro Oficial No. 481 de 2011-06-30

Fecha de iniciación del estudio: 2016-07-21

Fechas de consulta pública: Desde 2016-08-09 hasta 2016-10-07

Comité Técnico de Normalización: Leche y Productos Lácteos

Fecha de iniciación: 2016-10-24 Integrantes del Comité:

Fecha de aprobación: 2017-03-14

NOMBRES:

INSTITUCIÓN REPRESENTADA:

Ana Nieto (Presidenta) Mónica Quinatoa Homero Arteaga América Fey Andrea Arboleda Paúl Bohóquez Mayra García Eder Ocaña Jara Santiago León Margoth Casco (Secretaria Técnica)

ARCSA MSP LA HOLANDESA REYLECHE MIPRO AGROCALIDAD AGROCALIDAD INIAP PROFESIONAL INDEPENDIENTE INEN

Otros trámites: Esta NTE INEN 1500:2017 (Segunda revisión) reemplaza a la NTE INEN 1500:2011 (Primera revisión).

La Subsecretaría de la Calidad del Ministerio de Industrias y Productividad aprobó este proyecto de norma.

Oficializada como: Voluntaria Registro Oficial No. 75 de 2017-09-08

Por Resolución No.

17428 de

2017-08-07

Servicio Ecuatoriano de Normalización, INEN - Baquerizo Moreno E8-29 y Av. 6 de Diciembre Casilla 17-01-3999 Telfs: (593 2)3 825960 al 3 825999 Dirección Ejecutiva: direccion@normalizacion.gob.ec Dirección de Normalización: consultanormalizacion@normalizacion.gob.ec Centro de Información: centrodeinformacion@normalizacion.gob.ec URL:www.normalizacion.gob.ec