Pruebas de toxicidad en agua de tratamiento con fotocatálisis utilizando como

catalizador nanopartículas metálicas para degradar colorante RB5.

Material

- 30 tubos de vidrio de con rosca

- 30 cajas de Petri
- Gradilla
- Balanza analítica
- Encubadora a 28 °C
- Mechero bunsen
- Asa bacteriológica

Reactivos

- 4 muestras de cada una de las aguas (Aguas tratadas por método fotocatalítico)
- Agar Extracto de Malta (AEM)
- Agua desionizada

Microorganismo

- Aspergillus niger

Metodología

1. Se pesó 0.504 g de AEM y agregó esta cantidad de medio de cultivo a cada uno de los 30
tubos que se van a preparar.
2. En cada tubo se agregaron 6 muestras distintas de agua con diferentes catalizadores como
se muestra en la tabla 1 y un tubo más como blanco con agua desionizada.
Tabla 1.Cantidad de cajas a preparar por % de concentración de cada agua problema

Agua tratada con Concentración Tipo de 10 % de 50 % de 100%de

Catalizador y del colorante luz agua agua agua
colorante RB5 (ppm) tratada tratada tratada
(mL) (mL) (mL)
Agua desionizada ------------------ ------------ 15
Agua sin tratar 100 ------------ 1.5 7.5 15
Agua sin tratar 50 ------------ 1.5 7.5 15
Bario 100 UV 1.5 7.5 15
Bario 50 UV 1.5 7.5 15
Bario ------------------- Solar 1.5 7.5 15
Cobalto 50 UV 1.5 7.5 15
Cobalto ------------------- Solar 1.5 7.5 15
Níquel 50 UV 1.5 7.5 15
Níquel ------------------- Solar 1.5 7.5 15
Plata 50 UV 1.5 7.5 15
Plata ------------------- Solar 1.5 7.5 15
 Nota: los las soluciones que solo tienen contenido de 10 y 50 % de agua problema se les
adicionó 13.5 y 7.5 mL de agua desionizada correspondientemente.

3. Se llevaron los tubos a baño maría para homogeneizar perfectamente el agar, esto se
realizó a una temperatura de ebullición (aproximadamente 90 °C).
4. Mientras se homogeneiza el agar en la solución, se preparó una solución de
oligoelementos, esta se anexara a las cajas que se prepararán como nutriente para el
crecimiento del hongo, contiene los siguientes reactivos disueltos en 50 mL de agua
desionizada, tabla 2:
Tabla 2. Reactivos a utilizar para preparación de oligoelemntos en 50 mL de agua.

Reactivo Cantidad (g)

Sulfato de Zinc 0.11
Sulfato de Manganeso 0.033
Cloruro de Cobalto 0.008
Sulfato de cobre 0.008

5. Después de disuelto el agar y preparada la solución se llevaron a esterilizar a la autoclave a

90 °C, 121 psi y 20 min.
6. Pasado el tiempo de esterilización se sacaron los tubos y la solución se dejó enfriar hasta
el momento de poder manipularse y se vertió cada uno de los tubos en una caja
etiquetada correspondientemente con las características de cada solución y se les
adicionó 500 µL de oligoelementos a cada caja, se esperó a que solidificarán.
7. Ya solidificadas las soluciones en las cajas se prosiguió a realizar la inoculación del
microorganismo mediante la técnica de inoculación por picadura, la cual consiste en tomar
un poco de muestra con el asa bacteriológica estéril previamente y realizar una picadura
en el medio de cultivo en el que se hará crecer.
8. Ya realizada la inoculación se lleva a la incubadora a condiciones de 28 °C y monitorea el
crecimiento diariamente.
 Resultados

Día 1. Hay crecimiento de pequeñas hifas en la mayoría de las cajas. Las cajas que tenían
contenido de agua con tratamiento de Ag con luz UV, Ba luz UV (a 50 y 100 ppm) y Co luz UV al
100% de volumen la soluciones no solidificaron, aun no presenta crecimiento.

Día 2. Hay mayor crecimiento en las cajas mostrando esporulación y en las que no
solidificaron, comenzó el crecimiento de las hifas.

Día 3. El crecimiento ya es abundante y se muestra de la siguiente manera figura (1-)

- Blanco

Figura 1. Blanco de Aspergillus niger al día 3

- Blanco de agua con colorante RB5 a 100 ppm

a) b) c)

Figura 2. a) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 100%, se observa una mayor expansión de las hifas y bastante
esporulación, aquí la espora de diferente color probablemente por degradación del colorante; b) crecimiento de hongo con contenido de agua
problema al 50 %, crecimiento de hifas y basta esporulación; c) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 10 %, en esta caja se
ve bastante dispersión de esporas en la caja.
 - Blanco de colorante RB5 a 50 ppm. La caja con contenido de muestra al 10 % no se
muestra debido a la presencia de un hongo oportunista que infecto la caja y fue imposible
abrirla para evitar contaminación del mismo en el sitio.

a) b)

Figura 3. a) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 100%, se observa una mayor expansión de
las hifas y poca esporulación; b) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 50 %, crecimiento de
hifas y basta esporulación.

- Bario Luz UV con agua con colorante a 100 ppm.

a) b) c)

Figura 4. a) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 100%, se observa una mayor expansión de las hifas y bastante
esporulación, aquí la distribución puede variar debido a que el medio no solificó completamente; b) crecimiento de hongo con contenido de
agua problema al 50 %, crecimiento de hifas y basta esporulación; c) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 10 %, en esta
caja se ve bastante dispersión de esporas en la caja.
 - Bario Luz UV con agua con colorante a 50 ppm

a) b) c)

Figura 5. a) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 100%, en esta caja por la falta de solidificación no se distingue un
crecimiento proporcional; b) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 50 %; c) crecimiento de hongo con contenido de
agua problema al 10 %, en esta caja se ve mayor dispersión de esporas en la caja

- Bario Luz Solar

a) b) c)

Figura 6. a) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 100%, se observa una mayor expansión de las hifas y poca esporulación;
b) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 50 %, crecimiento de hifas y poca esporulación; c) crecimiento de hongo con
contenido de agua problema al 10 %, en esta caja se ve mayor dispersión de esporas en la caja.
 - Ag Luz UV con agua con colorante a 50 ppm

a) b) c)

Figura 7. a) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 100%, en esta caja por la falta de solidificación no se distingue un
crecimiento proporcional; b) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 50 %; c) crecimiento de hongo con contenido de agua
problema al 10 %, en esta caja se ve mayor dispersión de esporas.

- Ag Luz Solar

a) b) c)
Figura 8. a) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 100; b) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al
50 %; c) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 10 %, en esta caja se ve mayor dispersión de esporas en la caja.
 - Cobalto Luz UV con agua con colorante a 50 ppm

a) b) c)
Figura 9. a) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 100%, se observa una mayor expansión de las hifas y bastante
esporulación, aquí la distribución puede variar debido a que el medio no solificó completamente; b) crecimiento de hongo con contenido de
agua problema al 50 %, crecimiento de hifas y esporulación; c) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 10 %, en esta caja se
ve bastante dispersión de esporas en la caja.

- Co Luz Solar

a)
b) c)

Figura 10. a) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 100%, se observa una mayor expansión de las hifas y poca
esporulación; b) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 50 %, crecimiento de hifas y poca esporulación; c) crecimiento de
hongo con contenido de agua problema al 10 %, en esta caja se ve mayor dispersión de esporas en la caja.
 - Níquel Luz UV con agua con colorante a 50 ppm

a) b)
c)

Figura 11.a) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 100%, se observa una mayor expansión de las hifas y bastante
esporulación; b) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 50 %, crecimiento de hifas y poca esporulación; c) crecimiento de
hongo con contenido de agua problema al 10 %, en esta caja se ve mayor dispersión de esporas en la caja..

- Níquel Luz Solar

a) b) c)

Figura 12. a) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 100%, se observa una mayor expansión de las hifas y bastante
esporulación y contaminación por un hongo oportunista; b) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 50 %, crecimiento
de hifas y bastante esporulación; c) crecimiento de hongo con contenido de agua problema al 10 %, en esta caja se ve poca dispersión de
esporas en la caja.