CÁTEDRA DE FISIOLOGÍA: PRÁCTICA DE LA FUNCIÓN RENAL EN EL HOMBRE.

Profesora Virginia De Frías.

El riñón interviene en la homeostasis del organismo. Interviene en diversas funciones de vital importancia para el
organismo: mantiene la volemia, regula el equilibrio de electrolíticos en el compartimiento extracelular, regula la
presión arterial, mantiene el equilibrio ácido básico, interviene en la síntesis de eritropoyetina, interviene en la
síntesis de 1, 25-dihidroxicolecalciferol, elimina del organismo los productos de desecho que se producen por el
metabolismo celular a través de la producción de orina.
La depuración de la creatinina endógena por el riñón, es una estimación de la tasa de filtración glomerular, ya que
la creatinina se filtra libremente por los capilares glomerulares y no se reabsorbe, se secreción se considera
despreciable (valores mínimos), de modo tal que se considera una sustancia inerte en los túbulos renales, estas
son las razones para considerar a la creatinina el marcador ideal para determinar la tasa de filtración glomerular.
La creatinina es un producto del catabolismo muscular, su producción diaria es prácticamente constante y su
eliminación (exclusivamente renal) también es constante (en una dieta baja en proteínas y sin efectuar ejercicio
físico intenso).
La creatinina proviene del metabolismo de la creatina y de la fosfocreatina, que se encuentran en el tejido
muscular y se filtran a través de los capilares glomerulares, se produce a partir de dos reacciones irreversibles: (1)
el paso de la creatina a fosfato de creatina, en presencia de la enzima creatina fosfoquinasa y (2) la conversión de
fosfato de creatina a creatinina.

Figura 1. Metabolismo de creatina y síntesis de Creatinina.

Cuando la función renal es menor, el índice de creatinina aumenta porque los productos de desecho se están
acumulando en la sangre. Como la eliminación es igual a la producción diaria. La eliminación alcanza unos valores
entre 15 a 25 mg/kg/día. La depuración de creatinina se determina, por métodos espectrofotométricos, que
permiten conocer la concentración de creatinina en la orina y en el plasma, conociendo la tasa de flujo urinario, se
puede aplicar la ecuación de la depuración (o clearence o aclaramiento) de creatinina.

Podemos establecer que la eliminación de creatinina es constante

[Creatinina]orina = (mg/ml) x V (mg/ml) = constante.
En la siguiente figura se indica la concentración plasmática de creatinina en función de la depuración de
creatinina.

Figura 2. Concentración plasmática de creatinina en función del clearence (DEPURACIÓN,

ACLARAMIENTO) de creatinina.
En este gráfico se observa que si la concentración de creatinina plasmática es de 1 mg/100 ml, la depuración de
creatinina será de 100 ml/min en donde [Creatinina]orina = (mg/ml) x V (mg/ml) = constante = 1mg/ml. Si esta
misma persona llega a presentar una TFG de 50 ml/min, la creatinina en el plasma se elevará a 2 mg/100ml y si
su TFG es de 5ml/min su concentración plasmática de creatinina se elevara a 20 (considerando que la TFG= Cl
creatinina).

Concepto de depuración plasmática renal- Aclaramiento renal- Clearence

Es necesario recordar que cualquier sustancia excretada en la orina está contenida en el plasma. El ultra filtrado
es plasma libre de proteínas, células sanguíneas, y de otras sustancias contenidas en el plasma de alto peso
molecular.
Si se considera que el volumen de plasma que fluye por los riñones y que contiene un soluto X es llamado flujo
plasmático para el soluto X, entonces:
La depuración es el volumen de plasma que es depurado de un soluto en la unidad de tiempo. Definido también
como el volumen virtual de plasma, del cual se remueve una determinada sustancia en la unidad de tiempo,
representa la habilidad del riñón para remover una sustancia del plasma sanguíneo. Las unidades de depuración
renal son ml/min, L/h, L/d.
Clx= Ux x V
Px
En donde Ux y Px representan las concentraciones del soluto X en la orina y en el plasma respectivamente y V es
la tasa de flujo urinario.

De acuerdo con el principio de Fick, lo que entra a un órgano debe ser igual a lo que sale, entonces, la carga
filtrada de creatinina será igual que la carga excretada.

Carga filtrada de creatinina (mg/min)= [Creatinina]plasmática(mg/ml) x TFG (ml/min).

Carga excretada = [Creatinina]orina (mg/ml) x V (mg/ml).

Carga filtrada = carga excretada, entonces:

[Creatinina]plasmática(mg/ml) x TFG (ml/min)= [Creatinina]orina (mg/ml) x V (mg/ml).

TFG (ml/min)= [Creatinina]orina (mg/ml) x V (mg/ml).

[Creatinina]plasmática(mg/ml)

si el soluto es inerte en los túbulos renales, como la creatinina endógena entonces:

La tasa de filtración glomerular es igual a la depuración (clearence) de creatinina
TFG= Tasa de filtración glomerular.
V= Tasa de flujo urinario
Para determinar la depuración renal de creatinina, utilizamos el kit de Creatinina directa (método colorimétrico).
Este procedimiento directo de creatinina, esta basado en la reacción de Jaffé, en el cual la creatinina reacciona
con el ácido pícrico en solución alcalina, para formar el tautómero de picrato de creatinina. La intensidad de la
reacción es proporcional a la concentración de creatinina en las muestras (determinar la absorbancia del estándar
y muestras de λ =510 nm).

Reactivos de la práctica
Laboratorio Biogamma C.A.- Kit de determinación de creatinina:
Solución saturada de ácido pícrico
Reactivo alcalino de hidróxido de sodio (NaOH).
Estándar de creatinina.
MUESTRAS
Suero: Este procedimiento permite cuantificar la concentración de creatinina en el suero (el plasma no es
recomendable). La creatinina es estable en el suero, durante 7 días, 28 días de refrigeración y por lo menos 180
días si se congela, para la reacción se requieren 200 µl del suero ( 0.2 ml) y 200 µl de orina diluida.
Un día antes de la realización de la práctica, los tres estudiantes que han sido previamente seleccionados
por el grupo deberán prepararse de la siguiente manera:
Estudiante No 1: Restricción total de agua durante 24 horas.
Estudiante No 2 : Debe tomar 2.5 litros de agua, 24 horas antes de la realización de la práctica.
Estudiante No 3: Tomar 6 litros de agua, 24 horas antes de la realización de la práctica.
Nota: la orina recolectada deberán almacenarla en un pote y debe de mantenerse todo el momento
refrigerada
Se debe desechar la primera muestra de orina.
No debe ingerir leche, carne quesos, leche.
No se debe efectuar ejercicio físico el día en que se recolectan las muestras de orina (24 h antes de la practica).
El estudiante DEBE leer el protocolo de la práctica previamente.
Es indispensable que cada estudiante traiga dos pares de guantes y la bata.
El estudiante debe conocer los conceptos de depuración y de tasa de filtración glomerular antes de entrar en la práctica.
Se efectuará un quiz breve antes de realizar la actividad práctica.

PROTOCOLO:
ORINA
Mezcle bien todas la muestras, si la recolección se efectuó en diferentes envases.
Medir los volúmenes urinarios, en los cilindros graduados, registrar el valor del volumen total de orina recolectado
en 24 h. Medir la densidad de la orina en los cilindros graduados, antes de desechar la orina.
Colocar 100 ml de orina en un pote de recolección de orina para determinar las concentraciones de electrolitos
(este análisis servirá para determinar la osmolaridad).
Llenar un tubo Falcón de orina y desechar el resto.
Determinar el pH de la orina.
Proceder a realizar la determinación de Creatinina en la orina:
Diluir la muestra de orina a razón de 1:10. Se diluye hasta 10 veces la alícuota con agua destilada, y se trabajara
con esta orina diluida para determinar la concentración de creatinina

Tomar 200 l de la orina diluida (1:10), añadir 1,5 ml del ácido pícrico y 1,5 ml del reactivo alcalino, colocar
las muestras en baño maría a 37 C durante 15 min. Preparar el estándar
( 200 l de creatinina) y el blanco con H2O destilada añadir 1,5 ml del ácido pícrico y 1,5 ml del reactivo
alcalino, colocar las muestras en baño maría a 37 C durante 15 min.

Para determinar la concentración de creatinina en la orina, si se conoce la absorbancia y la concentración del

estándar y la absorbancia de la muestra de orina, entonces tenemos que se debe utilizar la siguiente formula:

[Creatinina]orina (mg/dl) = (Absorbancia muestra orina/Absorbancia del estándar) x 10 x[Creatinina]estándar

El factor 10 representa el factor de dilución de la orina.

Se debe de trabajar en las mismas unidades.
[Creatinina]estándar= 6mg/dl.
Tasa de flujo urinario
No de horas de recolección de la orina X 60 = total de minutos
Tasa de flujo urinario (ml/min) = Volumen total de orina
Total de minutos

SUERO
Las muestras de sangre se centrifugaran para separar el suero de las células sanguíneas.
Uno de los tubos de sangre servirá para determinar electrolitos (se reserva).
Las muestras de sangre se centrifugarán (6000 rpm por 10 min) para separar el suero de las células sanguíneas.
Tomar una pequeña muestra del suero para determinar el pH
Tomar 200 l de suero añadir 1,50 ml del ácido pícrico y 1,5 ml del reactivo alcalino, colocar las muestras en baño
maría a 37 C durante 15 min.
Preparar el estándar ( 200 l de creatinina) y el blanco con H2O destilada añadir 1,5 ml del ácido pícrico y 1,5 ml
del reactivo alcalino, colocar las muestras en baño maría a 37 C durante 15 min.
Calibrar el espectrofotómetro, encenderlo 10 min. antes de su uso Determinar la absorbancia del estándar, y de
cada una de las muestras problemas a una long de onda de 510 nM. Utilice el blanco para efectos de calibración.
[Creatinina]suero (mg/dl) = (Absorbancia muestra suero/Absorbancia del estándar) x [Creatinina]estándar
[Creatinina]estándar = 6mg/dl en suero

DATOS DEL VOLUNTARIO SANO Y RESULTADOS DE LA PRÁCTICA

Nombre del voluntario

Condición
Peso (Kg.)

Talla(m)

Edad

ASCT ( Nomograma de Dubois, m 2)

0 litros 2.5 litros 6 litros

Volumen de orina (ml)
t de recolección de la orina
Tasa de flujo urinario
(ml/min.)
Densidad de la orina
Factor de dilución de la orina:
Creatinina estándar (mg/dl)
Suero 6 mg/dl
long de onda:_______________.

RESULTADOS
Absorbancia
Estándar
Blanco
Orina voluntario 0 L
Suero voluntario 0 L
Orina voluntario 2.5 L
Suero voluntario 2.5 L
Orina voluntario 6 L
Suero voluntario 6 L

Condición 0L 2.5 L 6L
Osmolaridad p (mOsm/L)
Osmolaridad orina (mOsm/L)
Densidad de la orina
Cp creatinina (mg/dl)
Co creatinina (mg/dl)
CL creatinina (ml/min)
CLCR= Cro X V / Crp
Clearence osmolar
Closm= Osmo x V / Osm p

Clearence de agua libre (ml/min)

Cl H2O = V – Cl osm
Transporte de H20 libre (ml/min)
Clearence o depuración corregida =
CLCR X 1.73 m2/ ASCT (m2)
pH orina

pH suero

TFG (según sus resultados obtenidos en

la practica)
TFG (ecuación Cockcroft-Gault)
Lecturas adicionales
Para comprender mas este tema es necesario tener muy claro los siguientes conceptos básicos:
Ósmosis: es la difusión neta de agua, a través de una membrana con una permeabilidad selectiva, desde el
compartimiento en donde se encuentra con una alta concentración de agua hacia el compartimiento en donde su
concentración es baja. Cuando se añade un soluto al agua pura se reduce la concentración de agua en la mezcla.
Osmoles es el número total de partículas osmóticamente activas en una solución.
Mol es la cantidad de una sustancia que contienen el numero de moléculas igual al numero de Avogadro. La masa
en gramos de un mol de una sustancia es el mismo que el numero de la masa atómica en una molécula de una
sustancia.
Número de Avogadro es el numero de moléculas en un mol de una sustancia, tiene un valor de 6,22 X 1023.
Molaridad numero de moles de un soluto en 1 L de una solución.
Molalidad número de moles de un soluto en 1 kg de solvente (mol/kg).
Osmolaridad de una solución se refiere al número de osmoles de un soluto en 1 lt. de una solución.
En el caso de solutos no cargados 1 mol del soluto = 1 osmol.

En el caso de 2 electrolitos que se disocian completamente tenemos que 1 mol del soluto = 2 osmol.
Existen electrolitos que no se disocian en su totalidad y dependen de un factores o del coeficiente crioscópico (G),
para establecer la equivalencia entre un mol y un osmol de un electrolito se multiplica el número de moles por el
coeficiente crioscópico específico para esa sustancia.

Cálculo de la osmolaridad plasmática

Osmolaridadp (mOsmol/L) = 1,86 Na+p + Glucosap (mg/dl)/18 + Ureap (mg/dl)/5.5

Osmolaridad p efectiva= 1,86 Na++p + Glucosa/18

Osmolaridad de la orina = (densidad de la orina - 1) x 35

Osmolaridad de la orina= 2 Na+ + K+ + Glucosa(mg/dl)//18 + Urea/5.5

Osmolalidad de una solución es el número de osmoles de un soluto en 1 kg de solvente.

Presión osmótica es la presión hidrostática que se requiere para oponerse o detener el movimiento de agua a
través de una barrera semipermeable en respuesta a un gradiente osmótico (la diferencia en la concentración de
partículas osmóticamente activas en una solución.
Tonicidad es la osmolaridad efectiva y es igual a la suma de la concentración de solutos que tienen la capacidad
de ejercer una fuerza osmótica a través de la membrana.
La presión oncótica se refiere a la presión determinada por la presencia de proteínas en el compartimiento
vascular e intersticial que tiende a atraer moléculas de agua. Los capilares sanguíneos son poco permeables a
las proteínas, éstas se acumulan en el plasma sanguíneo, resultando menos abundantes en el líquido intersticial.
En los capilares sanguíneos, en la proximidad del extremo arteriolar se producirá un extenso proceso de filtración
y en el extremo venoso del capilar, se producirá un extenso proceso de reabsorción definido por la ecuación de
Starling, en donde el flujo hidráulico esta determinado por la diferencia de presiones hidrostática (PH) en el capilar
y en el compartimiento intersticial y la diferencia de presiones oncóticas o coloidoosmóticas (), en el capilar con
respecto al compartimiento intersticial, multiplicando ésta diferencia por el coeficiente de filtración (Kf), que
expresa la permeabilidad del capilar.

Q = Kf (PHcapilar –PH intersticial)- ( capilar-  intersticial)

Hipernatremia: las concentraciones de Na+p son superiores a 145 mm (mmol/l).
hiponatremia: las concentraciones de Na+p son inferiores a 135 mm (mmol/l).
hiperkalemia: las concentraciones de K+p son superiores a 5 mm (mmol/l).
hipokalemia: las concentraciones de K+p son inferiores a 3.5 mm (mmol/l).

Para determinar la depuración corregida de creatinina se toma en cuanta el área de superficie corporal obtenida
con el nomograma de Dubois.

Cl creatinina= V x [Creatinina] orina x 1.73

[Creatinina] plasma ASC

Cálculo práctico de la TFG utilizando la ecuación de ecuación de Cockcroft-Gault (CG)

Se determina la tasa de filtración glomerular, y por lo tanto la depuración de creatinina como un estimado de la
función renal en el hombre ya que al variar este valor, es un índice de enfermedades renales como la insuficiencia
renal crónica.

Realice un esquema de los resultados obtenidos a partir de las muestras de la orina diluida, concentrada y normal,
analice los resultados y mencione brevemente sus conclusiones.

Determinacion de la densidad, mediante el uso del densitómetro.

Un densímetro, es un instrumento que sirve para determinar la densidad relativa de los líquidos sin necesidad de
calcular antes su masa y volumen. Normalmente, está hecho de vidrio y consiste en un cilindro hueco con un
bulbo pesado en su extremo para que pueda flotar en posición vertical.
El densímetro se introduce gradualmente en el líquido para que flote libremente y verticalmente. A continuación se
observa en la escala el punto en el que la superficie del líquido toca el cilindro del densímetro. Los densímetros
generalmente contienen una escala de papel dentro de ellos, para que se pueda leer directamente la densidad
específica.
NOMOGRAMA DE DUBOIS (ASC m2)