Morella pubescens, conocido por los nombres comunes de laurel, laurel de cera, olivo,

olivo de cera, es un árbol que se adapta fácilmente y crece de manera espontánea cerca
de los ríos, quebradas, en zonas erosionadas, pendientes abruptas, orillas de senderos y
caminos y en periferias de los bosques. En algunos sitios alcanza alturas hasta de doce
metros, además de Colombia, crece en Costa Rica, Venezuela, Ecuador, Perú y Bolivia.

Los agricultores de la zona norte del departamento de Nariño (Colombia), benefician la

semilla con el propósito obtener la cera de Laurel, la cual, se emplea para la fabricación
de panela, velas, jabones, betún, cera para pisos, crema para manos, labiales y
recubrimiento de quesos, productos que según archivos del grupo de investigación PIFIL
de la Universidad de Nariño, se encuentran en la etapa de estudio de mercado a fin de
viabilizar su producción mediante microempresas de productores de laurel de la zona
norte del departamento de Nariño.

Son pocas las investigaciones realizadas con relación a la extracción y composición de

los aceites esenciales del laurel de cera a pesar del carácter aromático de sus hojas. Dentro
de las técnicas que han utilizado para la extracción de aceite esencial, se encuentra: la
destilación y extracción por arrastre de vapor. Es importante utilizar nuevas técnicas de
extracción para determinar el rendimiento y las propiedades , como puede ser por fluidos
supercríticos

Un fluido supercrítico es una sustancia que se encuentra por encima de su temperatura crítica y
su presión crítica (punto crítico) como se observa en la figura 4-4. En estas condiciones no son
gases, ni líquidos, pero poseen propiedades de ambos que los hacen muy interesantes en
procesos de extracción y en cromatografía. Las propiedades físicas como la viscosidad, la
difusividad y la densidad, son las que más interesan a la hora de llevar a cabo algunas de sus
aplicaciones y éstas se pueden controlar modificando las condiciones de presión y temperatura

El CO2 es el fluido supercrítico más utilizado debido a que es no tóxico, no inflamable, no

corrosivo, incoloro, no es costoso, se elimina fácilmente, no deja residuos, sus condiciones
críticas son relativamente fáciles de alcanzar y se consigue con diferentes grados de pureza, se
puede trabajar a baja temperatura y por tanto, se pueden separar compuestos termolábiles, se
puede obtener a partir de procesos de fermentación alcohólica y ayuda a prevenir la Las ventajas
de los fluidos supercríticos son: 1. Poseen alto coeficiente de difusión y viscosidad más baja que
los líquidos; 2. Ausencia de tensión superficial, la cual aumenta la operación de extracción dada
la rápida penetración de estos al interior de los poros de la matriz heterogénea; 3. La selectividad
durante la extracción puede ser manipulada dada la variación de las diferentes condiciones de
operación temperatura y presión afectando la solubilidad de varios componentes en el fluido
supercrítico; 4. La extracción con fluidos supercríticos no deja residuos químicos; 5. La extracción
con CO2 supercrítico permite su fácil recuperación por procesos de reciclaje. El CO2 supercrítico
también ha sido usado en innumerables aplicaciones industriales que incluyen diferentes
campos como: alimentos, agricultura, acuicultura, pesticidas, procesos microbianos,
petroquímica y farmacéutica

Actividad antioxidante: No es posible hacer una medida directa, pero la mayoría de los métodos
se basan en el uso de sistemas generadores de radicales, los cuales son métodos de inhibición
donde se emplea una especie generadora de radicales libres y una sustancia detectora de estas
especies. Su efecto se analiza por métodos espectrofotométricos UV-Vis. Entre los métodos se
encuentran: Método ABTS+ : Consiste en generar el radical ABTS a partir del ácido 2,2’-azino-
bis-(3- etilbenzotiazolin)-6-sulfónico, donde el radical catiónico obtenido es un compuesto
Capítulo 4. Marco Teórico 17 estable, de color verde- azulado y con un espectro de absorción
máximo a 734 nm (UVvis). La ventaja del radical es su estabilidad cuando se encuentra en
refrigeración y lejos de la luz. Estos factores permiten almacenar una solución de trabajo por
aproximadamente seis meses. Además este absorbe en la región cercana al infrarrojo (645, 734
y 815 nm), evitando interferencias con las antocianinas (Kuskoski, et al., 2004; Okezie 2002,
citados por Cerón y Lopez, 2013). El método permite expresar los resultados de acuerdo a la
capacidad del antioxidante para donar un hidrógeno y estabilizar al radical ABTS° + . La
decoloración que la solución de ABTS° + experimenta en la reacción, se compara con la
decoloración hecha por un antioxidante patrón derivado de la vitamina E conocido como Trolox
(6-Hidroxi2,5,7,8-tetrametilcroman-2-ácido carboxílico), mediante una curva de calibración. Por
esta razón el resultado se expresa como capacidad antioxidante en equivalentes trolox ó TEAC
(Trolox Equivalent Antioxidant Capacity) (Okezie 2002, citado por Jimenez y Villareal, 2008).
Método del DPPH* : Consiste en determinar la capacidad de captura del radical libre DPPH* por
parte de los compuestos antioxidantes (Samaniego, 2006). El procedimiento seguido para
determinar la actividad antioxidante se basa en el método descrito por Brand-Williams et al.,
(1995) y descrito por Malacrida y Neuza (2012), el cual consiste en la medición a 517 nm de la
reducción del radical estable 1,1-difenil-2-picrilhidrazilo (DPPH.). La absorbancia característica
de este radical que posee un color violeta intenso, disminuye en presencia de un antioxidante.
Por lo tanto, es posible cuantificar la capacidad captadora de radicales libres que poseen
determinados compuestos mediante la determinación del grado de decoloración que provocan
a una solución de DPPH (Figura 4-5).

Las hojas y tallos de Morella pubescens, se recolectaron en zona rural del municipio de
San Pablo, norte del departamento de Nariño (Colombia). La identificación taxonómica
de las muestras se llevó a cabo en el Herbario de la Universidad de Nariño de acuerdo
con el trabajo de Parra [5].

El material vegetal (solo hojas) se pesó, se separó de piedras, impurezas y otros

elementos extraños y se dejó secar a la sombra a temperatura ambiente por espacio de
ocho días, luego se trituró en un molino de martillos y se tamizó utilizando tamices de la
serie ASTM de 8, 14, 30 y 50 mallas.

Análisis
Rendimiento
Densidad relativa del aceite esencial a 20°C:
Determinación del Índice de Acidez
Determinación de la solubilidad en etanol
Determinación del Índice de Refracción
Determinación Rotación óptica
Análisis cromatográfico

EVALUACIÓN DE LA ACTIVIDAD ANTIOXIDANTE En la actualidad se han desarrollado un gran

número de métodos para evaluar la capacidad antioxidante total de alimentos, suplementos
dietarios, extractos vegetales o compuestos puros. Sin embargo, pocos de ellos se utilizan con
regularidad debido a limitaciones relacionadas con los requerimientos metodológicos y la
selección de las fuentes de radicales libres (Prior, et al., 2005; Schauss, et al., 2006). Las
evaluaciones fundamentadas en el uso de radicales como el DPPH y ABTS.+ son considerados
por la comunidad científica como los métodos espectrofotométricos más comunes utilizados
para la determinación de la capacidad antioxidante de alimentos, bebidas y extractos vegetales
(Bendini, et al., 2006), debido a que los procedimientos requeridos en estas metodologías son
simples, rápidos, sensibles y reproducibles (Ozcelik, et al., 2003). Los antioxidantes pueden
desactivar los radicales por dos mecanismos principalmente: transferencia de átomos de
hidrógeno y transferencia de electrones. Los resultados finales son los mismos
independientemente del mecanismo, pero la energía cinética y potencial de las reacciones
difieren (Prior, et al., 2005; Antolovich, et al., 2002; Moon y Shibamoto, 2009)

Existen algunos métodos que miden la capacidad para secuestrar los radicales formados en los
procesos de peroxidación lipídica. Uno de ellos consiste en medir la concentración de
antioxidante requerido para secuestrar el 50% de los radicales en un tiempo determinado. Los
radicales comúnmente utilizados son el 2,2-difenil-1- picrilhidracilo (DPPH• ) y ácido 2,2’-azino-
bis-(3- etiltiazolinabencenosulfónico- 6) (ABTS+• ).

ORAC (Capacidad de absorbancia del radical oxígeno)

este método permite medir la inhibición del antioxidante causada por el radical piróxilo que
induce oxidaciones; por lo tanto, a medida que la molécula fluorescente (fluoresceína) es
atacada y dañada por los radicales, se va perdiendo su fluorescencia. La función de los
antioxidantes es la de proteger las moléculas que tienen tendencia a oxidarse, y cuanto más
capacidad antioxidante tiene un compuesto o alimento mayor es la capacidad de mantener la
emisión de luz por parte de la molécula fluorescente. El grado de protección frente a la oxidación
se cuantifica con un medidor de fluorescencia y se reporta en términos de "equivalentes de
Trolox" (TE) (Ou, et al., 2002; Huang et al., 2005).

Catión-radical ABTS+•
El efecto protector de los AE y de las sustancias de referencia se determina, entre otros, por el
método descrito por Re R. et al. (1999), el cual se fundamenta en la capacidad que tienen
algunos compuestos para atrapar radicales, i.e. ABTS+. . La técnica se usa ampliamente para
muestras biológicas, alimentos, compuestos puros o extractos de plantas de naturaleza hidrófila
o lipofílica (Kuskoski, et al., 2005; Re et al. 1999)