Aplicaciones y limitaciones de los modelos de

ratón para comprender la aterosclerosis humana

Moritz von Scheidt, 1 Yuqi Zhao, 2 Zeyneb Kurt, 2 Calvin Pan, 3 Lingyao Zeng, 1 Xia Yang, 2 Heribert Schunkert, 1,4 y Aldons J.
Lusis3, *
1 Deutsches Herzzentrum M € unchen, Technische Universit € at M € unchen, 80333 Munich, Alemania
2 Departamento de Biología Integrativa y Fisiología.
3 Departamento de Medicina, Microbiología y Genética Humana, Escuela de Medicina David Geffen Universidad de California,
Los Ángeles, Los Ángeles, CA 90095, EE.UU.
4 Deutsches Zentrum f € ur Herz- und Kreislauferkrankungen (DZHK), sitio asociado Munich Heart Alliance, 80336 Munich,
Alemania

La mayor parte de la comprensión biológica de los mecanismos que subyacen a la enfermedad

arterial coronaria (CAD) se deriva de los estudios de modelos de ratón. La identificación de
múltiples loci CAD y genes candidatos fuertes en grandes estudios de asociación de genoma
humano (GWAS) presentó una oportunidad para examinar la relevancia de los modelos de ratón
para la enfermedad humana. Revisamos exhaustivamente la literatura de ratones, incluidos 827
genes derivados de la literatura, y la comparamos con datos humanos. En primer lugar, observamos
una sorprendente concordancia de los factores de riesgo para la aterosclerosis en ratones y
humanos. En segundo lugar, hubo una superposición altamente significativa de genes de ratón con
genes humanos identificados por GWAS. En particular, de los 46 genes con fuertes señales de
asociación en GWAS de CAD que se estudiaron en modelos de ratón, todos menos uno mostraron
efectos consistentes en los fenotipos relacionados con la aterosclerosis. En tercer lugar,
comparamos 178 vías asociadas con CAD derivadas de GWAS humanos con 263 de estudios con
ratones y observamos que la mayoría era consistente entre las especies.
Introducción
Durante los últimos 35 a 40 años, el ratón se ha convertido, con mucho, en el modelo animal más
utilizado para la investigación de la aterosclerosis. Los ratones y los seres humanos están
divergentes en unos 80 millones de años y, sin duda, han sido sometidos a muchas presiones
selectivas diferentes. Sin embargo, sus genomas han permanecido muy similares, con
aproximadamente el 95% de sus genes codificantes de proteínas, aunque los genes no codificantes y
las regiones reguladoras están considerablemente menos conservados. Lo último puede ser de
particular relevancia para el tema, ya que las variantes humanas que afectan el riesgo de
aterosclerosis lo hacen con mayor frecuencia mediante la modulación de la regulación génica en
lugar de la estructura de la proteína ( Nikpay et al., 2015, Samani et al., 2007, Seifert et al., 2016).

El propósito de esta revisión es evaluar exhaustivamente la consistencia de los hallazgos mediante

los cuales las alteraciones genéticas conducen a fenotipos relacionados con la aterosclerosis en
ratones y humanos. Discutimos brevemente el desarrollo de modelos de ratón y resumimos los
resultados de los estudios histológicos y genéticos de aterosclerosis utilizando modelos de ratón. En
total, revisamos un total de más de 9,000 publicaciones. Luego comparamos los resultados en
ratones con lo que se sabe actualmente sobre los factores que afectan el riesgo de enfermedad en los
seres humanos. Durante la última década, en particular, se han logrado avances espectaculares en el
mapeo y la caracterización funcional de los loci que contribuyen a formas comunes de enfermedad
arterial coronaria (CAD) (Ghosh et al., 2015, Mäkinen et al., 2014, McPherson y Tybjaerg-Hansen,
2016, Nikpay et al., 2015, Nurnberg et al., 2016, Samani et al., 2007, Seifert et al., 2016). Estas
comparaciones se realizan en tres niveles. Primero, examinamos la consistencia entre los resultados
del ratón y los diversos factores de riesgo que se han identificado en los estudios epidemiológicos y
genéticos en humanos. En segundo lugar, examinamos la superposición entre los hallazgos en el
ratón y los resultados recientes de los estudios de asociación del genoma humano (GWAS). En
tercer lugar, además de las comparaciones basadas en genes, construimos 263 vías de aterosclerosis
de ratones según nuestra búsqueda bibliográfica de genes y las comparamos con 178 vías conocidas
de CAD en humanos basadas en GWAS. Cada una de estas comparaciones tiene limitaciones, las
cuales discutimos. Sobre la base de nuestros hallazgos, hacemos algunas recomendaciones sobre las
estrategias de investigación más útiles para avanzar.

Antecedentes:
Modelos de ratón en la investigación de la aterosclerosis
Perspectiva historica
Desde principios de 1900, el ratón ha sido el modelo animal clásico para el análisis genético. La
investigación sobre el ratón como modelo de aterosclerosis comenzó a fines de los años 70 y
principios de los 80 con esfuerzos para caracterizar el metabolismo de las lipoproteínas en plasma y
desarrollar dietas que promuevan el desarrollo de lesiones ateroscleróticas en ratones (LeBoeuf et
al., 1983, Lusis et al., 1983, Paigen et al., 1987, Reue et al., 1984, Roberts y Thompson, 1976). Los
ratones tienen niveles muy bajos de lipoproteínas aterogénicas y, a diferencia de los conejos, los
hámsters y algunos otros modelos animales, no desarrollan lesiones significativas cuando se les
alimenta con una dieta de tipo occidental con alto contenido de grasa y colesterol. Sin embargo, se
encontró que la adición de ácido cólico a tales dietas dio lugar a lesiones aórticas que correspondían
a lesiones tempranas de rayas grasosas en humanos (Paigen et al., 1987, Roberts y Thompson,
1976). A principios de la década de 1990, se crearon modelos de ratones con niveles de colesterol
muy altos y lesiones relativamente avanzadas mediante ingeniería genética, incluidos
los ratones knockout para apolipoproteína E ( Apoe - / - ) y knockout para el receptor LDL ( Ldlr - / - )
(Ishibashi et al., 1994, Li et al., 1993, Plump et al., 1992, Warden et al., 1993).
Se utilizaron dos enfoques para identificar los factores genéticos que contribuyen a la aterosclerosis
en el ratón. El primero involucró el análisis genético de la variación natural en el ratón mediante el
análisis del locus de rasgos cuantitativos (QTL), un método analítico para el mapeo de genes que
subyacen a rasgos complejos. Tales estudios revelaron la considerable complejidad genética de la
aterosclerosis, pero la mala resolución del mapeo QTL dificultó la identificación de genes
(Rodríguez et al., 2013). El segundo enfoque involucró el análisis de genes hipotetizados para
desempeñar un papel en la aterosclerosis basada en la biología conocida, conocida como "genes
candidatos". En la mayoría de los estudios, la expresión de los genes candidatos se modificó a
través de la ingeniería genética (por ejemplo, la orientación genética). , generalmente seguido de un
análisis sobre un fondo hiperlipidémico para evaluar el desarrollo de la lesión. Tales estudios se han
realizado para muchos cientos de genes (Stylianou et al., 2012). A continuación, preguntamos cómo
encajan los resultados de estos estudios con lo que se sabe sobre la aterosclerosis humana, en
particular los resultados de los GWAS humanos.
Patología
En modelos experimentales como Apoe - / - o Ldlr - / -En ratones alimentados con dietas
"occidentales", el desarrollo de lesiones ateroscleróticas es similar al observado en estudios
patológicos de la enfermedad humana. El primer evento perceptible es la acumulación de partículas
de lipoproteínas que contienen apolipoproteína B agregada en el espacio íntimo. A esto le sigue el
reclutamiento de monocitos de sangre a la íntima en los sitios de acumulación de lipoproteínas y la
transformación posterior a macrófagos. Estas células luego proceden a absorber las lipoproteínas a
través de los receptores del eliminador o la fagocitosis para dar lugar a "células espumosas"
cargadas de colesterol que son el sello distintivo de la aterosclerosis temprana. A medida que las
lesiones crecen en tamaño, se forma un núcleo necrótico formado por células de espuma, cristales
de colesterol y células apoptóticas.Lusis, 2000). Además de los monocitos, los linfocitos T se
reclutan para las lesiones y, en ciertos antecedentes genéticos, se produce una calcificación intimal
y medial (Rattazzi et al., 2005).
Sin embargo, existen algunas diferencias distintas en comparación con la aterosclerosis
humana. Mientras que, como en los humanos, las lesiones en ratones tienden a ocurrir en regiones
de flujo sanguíneo alterado, los sitios principales de desarrollo de lesiones en ratones son la aorta y
las carótidas, no las arterias coronarias (Hu et al., 2005). Además, aunque el engrosamiento de la
íntima generalmente ocurre en lesiones tempranas en humanos, este no es el caso en ratones
(Schwartz et al., 1995). Además, los modelos de ratón rara vez muestran evidencia de rotura de la
lesión, un punto particularmente significativo, ya que aproximadamente tres cuartas partes de los
ataques cardíacos se producen por rotura de placa seguida de trombosis. Cabe señalar que ciertos
modelos de ratón, en particular el ratón combinado Srb-1 - / - / Apoe - / - , desarrollan lesiones
coronarias significativas, aunque no se han utilizado ampliamente en la investigación,
probablemente debido a la dificultad de la reproducción de alelos manipulados. un fondo de doble
nocaut (Zhang et al., 2005). Además, las lesiones en ciertos vasos, como la arteria innominada que
se ramifica desde la aorta, muestran una mayor complejidad que las lesiones aórticas, incluida la
presencia de fibrina en las lesiones, aunque no parecen ser un buen modelo para los estudios de los
mecanismos de rotura de la placa en humanos (Schwartz et al., 2007).
La mayoría de los estudios en ratones han evaluado solo el tamaño de las lesiones, no la
composición. Está claro que en los ratones, los antecedentes genéticos y los factores ambientales
pueden influir en el contenido relativo de macrófagos, células del músculo liso, linfocitos, depósitos
calcificados, colágeno y residuos necróticos (Bennett et al., 2006, Shaposhnik et al., 2007). Dada su
importancia en la vulnerabilidad de la placa, la evaluación cuantitativa de la composición de la
lesión es claramente de interés (Schwartz et al., 2000). Por otro lado, muchos estudios en humanos a
menudo carecen de cualquier caracterización patológica de las lesiones
ateroscleróticas. Específicamente, los GWAS a gran escala a menudo utilizan definiciones clínicas
para las manifestaciones de la enfermedad aterosclerótica que van desde los síntomas (p. Ej.,
Angina de pecho) y los hallazgos en estudios de imagen (p. Ej., Angiografía coronaria) hasta
manifestaciones clínicas (p. Ej., Infarto de miocardio y accidente cerebrovascular de gran tamaño).
Variación genética natural
Los estudios de variación natural en ratones se han centrado en la arquitectura genética general de la
aterosclerosis y las firmas moleculares asociadas con el desarrollo de lesiones (Hsu y Smith,
2013, Kayashima et al., 2015, Rodríguez et al., 2013, Welch, 2012). Por ejemplo, un gran cruce
entre las cepas C3H / HeJ y C57BL / 6J en un fondo Apoe - / - identificó numerosos loci
significativamente asociados con aterosclerosis, calcificación vascular y rasgos como la obesidad,
los niveles de insulina y los lípidos plasmáticos. El análisis de las vías usando ingenio reveló una
serie de vías fuertemente asociadas con la aterosclerosis, como el metabolismo del colesterol, la
fosforilación oxidativa mitocondrial y la inflamación (Wang et al., 2007).
Debido a la mala resolución del análisis de ligamiento en ratones (y humanos), muy pocos genes
nuevos que contribuyen a formas complejas de susceptibilidad a la aterosclerosis se identificaron en
base a cruces genéticos (Broeckel et al., 2002, Erdmann et al., 2013). Sin embargo, con el desarrollo
de tecnologías para la genotipificación de alta densidad, el mapeo de asociación de rasgos
complejos de resolución relativamente alta se ha hecho posible en ratones y en humanos. Dichos
análisis de asociación pueden realizarse utilizando poblaciones de ratones criados o utilizando
poblaciones de ratones criados después de la corrección de la estructura de la población (Bennett et
al., 2010, Valdar et al., 2006). Una ventaja del uso de ratones consanguíneos para tales análisis es
que se pueden examinar muchos fenotipos diferentes en los mismos antecedentes genéticos
(Bennett et al., 2015, Orozco et al., 2012, Parks et al., 2013).
Los estudios de variación natural en ratones han revelado que la aterosclerosis es un rasgo
altamente complejo, que involucra a muchos genes que contribuyen a una variedad de factores de
riesgo. Un estudio reciente de un gran conjunto de cepas puras conocidas como el Hybrid Mouse
Diversity Panel (HMDP) reveló una fuerte evidencia de asociación con inflamación, señalización de
óxido nítrico y niveles de trimetilamina-N-óxido (TMAO), así como factores de riesgo tradicionales
tales como los niveles de lípidos en plasma. Además, el estudio proporcionó pruebas sólidas de las
interacciones gen por gen así como las interacciones gen por ambiente (Bennett et al., 2015).
Modelos de ingeniería y estudios de drogas
Para investigar los mecanismos que contribuyen a la susceptibilidad de la aterosclerosis, se han
examinado cientos de "genes candidatos" por sus efectos sobre la aterosclerosis en ratones. Dichos
genes candidatos fueron elegidos en base a hipótesis generadas a partir de la comprensión de la
aterosclerosis humana y, por lo tanto, están sesgados de forma inherente. Al relacionar los
resultados de dichos estudios con la genética de la aterosclerosis humana, se deben tener en cuenta
una serie de otras advertencias, incluidas las diferencias en el tamaño del efecto, el problema de los
"genes pasajeros" y algunas consideraciones estadísticas. Tales factores de confusión se discuten en
una sección posterior.
Tabla 1 Asociación de ortólogos humano-ratón con bases de datos de enfermedades humanas

Término Cambio en el Genes de ratón FDR a p Valor b

pliegue
Enfermedad de la arteria 4.5 53 2.70E − 23 1.10E − 27
coronaria
Enfermedad isquémica del 4.4 32 1.20E − 12 5.40E − 17
corazón
Restenosis 4.3 47 2.90E − 19 1.30E − 23
Longevidad 4 47 8.40E − 17 4.90E − 21
Arterioesclerosis coronaria 3.9 100 5.80E − 39 3.60E − 43
Enfermedad coronaria 3.9 35 1.40E − 11 8.40E − 16
Enfermedad de Alzheimer 3.3 89 6.10E − 12 3.30E − 15
Infarto de miocardio 3 62 5.30E − 15 5.70E − 19
 Hipertensión 2.6 79 5.40E − 15 7.80E − 19
Diabetes tipo 2 2.1 104 2.00E − 13 3.00E − 17

Se enumeran los diez principales términos de DAVID asociados con 827 genes de aterosclerosis de
ratones derivados de la literatura. El "cambio en el pliegue" es el grado de enriquecimiento de los
genes de aterosclerosis de ratón dentro de cada categoría de genes, y "genes de ratón" es el
número de dichos genes. FDR, tasa de descubrimiento falso.
a Un ajustado por comparación múltiple.
b Calculado utilizando la prueba exacta de Fisher.
Revisamos exhaustivamente más de 9,000 publicaciones de PubMed que examinaron genes que
contribuyen a la aterosclerosis en ratones. Estos incluyeron un total de 827 genes de aterosclerosis
de ratón, según lo definido por un efecto significativo en el tamaño o la composición de la lesión
aterosclerótica cuando se perturba en un modelo de ratón. A nuestro entender, esto representa la
colección más completa de genes de ratón que tienen efectos significativos en la aterosclerosis en
modelos de ratón. Las citas para todos los genes incluidos se proporcionan en la Tabla S1 ,
disponible en línea. Los genes de ratón se clasificaron en tres grupos:

(1) Modelos diseñados de expresión génica reducida (knockdown o knockout)

(2) Modelos diseñados de sobreexpresión de genes (principalmente ratones transgénicos)
(3) Modelos de tratamiento farmacológico.

Las comparaciones de datos de ratón y humanos a nivel genético deben considerar las diferencias
genéticas. Para evaluar la superposición de genes entre las especies, se consideraron los homólogos
más recientes de ENSEMBL (Kersey et al., 2016). Después de los ajustes específicos de la especie,
19,583 genes humanos codificantes de proteínas podrían combinarse con 20,738 genes de ratón. Por
lo tanto, aproximadamente el 98,8% (19,583 de 19,815) de los genes humanos están representados
en el genoma del ratón y el 94,5% (20,738 de 21,936) de los genes del ratón están representados en
el genoma humano (Harrow et al., 2012, Mudge y Harrow, 2015).

Siguiendo la clasificación de los modelos de ratón, nuestra investigación reveló un total de 827
genes de ratón, de los cuales 535 (64.5%) fueron modelos de expresión génica reducida, 48 (5.8%)
fueron modelos de genes sobreexpresados y 244 (29.5%) fueron modelos de tratamiento
farmacológico. Se consideró que los genes que mostraron alteraciones significativas en el tamaño
de la lesión (808 genes) o la estabilidad de la placa (19) tienen un efecto sobre la aterosclerosis. En
total, 805 de nuestros 827 genes de ratones derivados de la literatura tienen un ortólogo humano
(97.3%). Estos 805 genes de ratón se combinaron con 797 genes únicos en humanos. Diez genes de
ratón ( Ang , Ang2 , Ang4 , Ang5 , Ang6 , Bglap , Bglap2 , Bglap3 ,Ces3a y Ces3b ) estaban
representados por tres genes humanos (ANG, BGLAP y CES). Los ratones con eliminación
de Apoe (68.6% de los estudios) o Ldlr (27.2%) sirvieron con mayor frecuencia como modelos para
los estudios de aterosclerosis. Por lo tanto, la gran mayoría de todos los modelos genéticos de
ratones se exploraron en el contexto de hipercolesterolemia excesiva, una condición que es similar a
la hipercolesterolemia familiar en el hombre. De los 827 genes, el 58.6% (485) de los genes se
describió para mediar los efectos pro-aterogénicos y el 41.2% (341) de los efectos anti-
aterogénicos; Pecam1 es un gen que afecta a la aterosclerosis de una manera específica del sitio, ya
sea positiva o negativamente (Goel et al., 2008).
Usando la herramienta de enriquecimiento de genes DAVID, observamos que las categorías
principales de enfermedades correspondientes a los 827 genes de ratones estaban fuertemente
asociadas con la aterosclerosis. Entre las diez principales enfermedades asociadas con los humanos,
seis están relacionadas directamente con CAD o aterosclerosis en humanos y dos representan
factores de riesgo conocidos de CAD. Las dos condiciones restantes son la enfermedad de
Alzheimer y la longevidad ( Tabla 1 ).

Factores de riesgo: concordancia de ratón y estudios humanos

Los estudios epidemiológicos de poblaciones humanas han identificado varios factores de "riesgo"
genéticos o ambientales que se asocian significativamente con la prevalencia de EAC ( Tabla
2 ). Aquí hemos evaluado exhaustivamente la consistencia de los hallazgos en ratones y humanos en
términos de los efectos de estos factores de riesgo en la aterosclerosis.
Dislipidemia
Los niveles altos de colesterol de lipoproteínas de baja densidad (LDL-C), VLDL-C y triglicéridos
y los niveles bajos de colesterol de lipoproteínas de alta densidad (HDL-C) están fuertemente
relacionados con el CAD humano (Panel de expertos sobre detección, evaluación y tratamiento del
colesterol alto en la sangre en adultos, 2001, Grundy et al., 2004). Para imitar la hipercolesterolemia
humana en modelos de ratón, se necesitaron adaptaciones genéticas y dietéticas, ya que el colesterol
circulante se basa predominantemente en HDL en ratones y LDL en humanos. Además, la proteína
de transferencia de éster de colesterilo (CETP), que transfiere los ésteres de colesterol y los
triglicéridos entre las lipoproteínas, no está presente en los ratones. Por otra parte, la absorción de
colesterol en la dieta es baja en ratones. Al resumir los resultados de varios modelos de ratones
modificados genéticamente que abordan el metabolismo de los lípidos y las lipoproteínas, los datos
son más consistentes con un aumento de la aterosclerosis en ratones con hipercolesterolemia,
hipertrigliceridemia y elevaciones singulares de los niveles plasmáticos de LDL o VLDL (Huszar et
al., 2000, Knouff et al., 2004, Plump et al., 1992, Powell-Braxton y otros, 1998, van Ree et al.,
1994, VanderLaan et al.,2009, Voyiaziakis et al., 1998). Los niveles elevados de HDL, por otro
lado, redujeron la progresión de la aterosclerosis (Bérard et al., 1997), y en las lesiones
ateroscleróticas sin calcificación, los niveles elevados de HDL incluso llevaron a una regresión
parcial del tamaño de la lesión (Feig et al., 2014).
Alta presion sanguinea
La presión arterial alta es un factor de riesgo bien conocido de CAD humana (Stamler y
otros, 1993). La inducción de la presión arterial alta en modelos de ratón se inició por una ingesta
excesiva de sal, la regulación positiva del sistema renina-angiotensina-aldosterona, perturbaciones
genéticas o constricción mecanicista de las arterias renales. Aunque las causas de la hipertensión en
esos modelos son diferentes, la aceleración de la aterosclerosis fue un hallazgo consistente (Leong
et al., 2015, Weiss et al., 2001, Wiesel et al., 1997).

Tabla 2: consistencia de los factores de riesgo CAD humanos en modelos de ratones con
aterosclerosis
 Factores de riesgo
concordantes
Hipercolesterolemia
Niveles Elevados De
Lipoproteínas: LDL
Niveles Elevados De
Lipoproteínas: VLDL
Niveles Elevados De
Lipoproteínas: HDL
Niveles Elevados De
Lipoproteínas: LPA
Hipertrigliceridemia
Hipertensión
Enfermedades Inflamatorias:
Artritis.
Enfermedades Inflamatorias:
Lupus.
Enfermedades Inflamatorias:
Psoriasis.
Smoking
Contaminación Del Aire
Dt1
Dt2
Envejecimiento
Angustia
OTMA
Trombosis
Falta De Actividad Fisica
Presencia Bacteriana
Insuficiencia Renal
Sindrome Metabolico
Factores De Riesgo
Discordantes
Obesidad
Género
↑ indica que el factor está asociado positivamente con la aterosclerosis, ↓ indica una asociación
negativa, y - indica que no hay asociación con la aterosclerosis.
Efecto sobre la Referencia
aterosclerosis
↑ Plump et al., 1992; van Ree et al., 1994
↑ Huszar et al., 2000; Powell-Braxton y otros, 1998
↑ Knouff et al., 2004; VanderLaan et al., 2009
↓ Bérard et al., 1997; Feig et al., 2014;
↑ Callow y otros, 1995; Schneider et al., 2005; Pedersen et al.,
2010
↑ Voyiaziakis et al., 1998
↑ Leong et al., 2015; Weiss et al., 2001; Wiesel et al., 1997
↑ Rose et al., 2013
↑ Ma et al., 2008
↑ Karbach et al., 2014
↑ Boué et al., 2012; Gairola et al., 2001; Lietz et al., 2013
↑ Araujo, 2010; Soares et al., 2009; Sun et al., 2005
↑ In't Veld, 2014; Kunjathoor et al., 1996; Shen y Bornfeldt, 2007
↑ Jun et al., 2011; Rey, 2012; Renard et al., 2004; Schreyer et al.,
1998
↑ Merat et al., 2000; Rosenfeld et al., 2000
↑ Kumari et al., 2003; Najafi et al., 2013; Roth et al., 2015
↑ Gregory et al., 2015; Hartiala et al., 2014; Wang et al., 2011
↑ Schafer et al., 2003
↑ Meissner et al., 2011; Pellegrin et al., 2009
↑ Gibson et al., 2004; Lalla et al., 2003
↑ Bro et al., 2003; Hewitson et al., 2015; Neven y
D'Haese, 2011
↑ Kennedy et al., 2010
Efecto sobre Athero -
en humanos /
ratones
↑ / - (Lep ob / ob Chiba et al., 2008; Nishina et al., 1994; Plummer y
ratones) Hasty, 2008
masculino ↑ / Venegas-Pino et al., 2016
femenino ↑
Trastornos inflamatorios sistémicos
Los trastornos inflamatorios sistémicos humanos, como la artritis reumatoide, el lupus y la
psoriasis, están fuertemente asociados con la CAD humana, aunque los fundamentos genéticos de
los dos trastornos pueden ser diferentes (del Rincón et al., 2001, Jansen et al.,2015, Wang et al.,
2012, Westerweel et al., 2007). De acuerdo, los modelos de ratón de la artritis reumatoide humana,
el lupus y la psoriasis también mostraron un aumento de las lesiones ateroscleróticas en los modelos
de ratón (Cao et al., 2013, Karbach et al., 2014, Ma et al., 2008, Rose et al., 2013).
De fumar
Fumar acelera el desarrollo de CAD en humanos (Kannel et al., 1968). En los modelos de ratón, la
exposición al humo del cigarrillo convencional provocó perturbaciones del metabolismo de los
lípidos, la función de las células endoteliales arteriales y el desarrollo de lesiones ateroescleróticas
(Boué et al., 2012). El cese de la exposición al humo condujo a una desaceleración de la progresión
de la placa y disminuyó la acumulación de lípidos pro-aterogénicos (Lietz et al., 2013).
La contaminación del aire
La contaminación del aire es un factor de riesgo para la aterosclerosis humana acelerada (Araujo,
2010). Los modelos de ratones expuestos a partículas ambientales concentradas a largo plazo
menores de 2,5 μm (que simulan el aire contaminado) mostraron una aceleración de la
aterosclerosis y la inflamación vascular (Sun et al., 2005).
Diabetes tipo 1
La diabetes tipo 1 (T1D) promueve la progresión de la CAD humana (Schnell et al., 2013). La T1D
en modelos de ratón fue inducida por estreptozotocina o por infección viral. Ambos métodos
resultaron en la formación acelerada de la lesión (Shen y Bornfeldt, 2007).
Diabetes tipo 2
La diabetes tipo 2 (T2D) es un factor de riesgo de la CAD humana (Reaven, 2003). La mayoría de
los modelos T2D de ratón se basan en un modelo deficiente en leptina, alimentación con grasa o
carbohidratos o disfunción de las células beta inducida genéticamente, y la mayoría mostró que la
T2D acelera la aterosclerosis (Jun et al., 2011
, Rey, 2012, Renard et al., 2004, Schreyer et al., 1998). Hubo algunos resultados contradictorios,
posiblemente debido a la participación del sistema inmunológico (Taleb et al., 2007) o efectos
ateroprotectores de la deficiencia de leptina en sí ( Lep ob / ob ) (Chiba et al., 2008).
Angustia
La angustia, aguda y crónica, es un factor de riesgo para el desarrollo y la progresión de la CAD
humana (Holmes et al., 2006). En un modelo de estrés crónico en ratones, los ratones fueron
expuestos repetidamente a agua helada. Los animales desarrollaron lesiones ateroscleróticas más
avanzadas y complejas (Heidt et al., 2014, Najafi et al., 2013).
Trimetilamina-N-óxido
El TMAO, derivado de la colina o la carnitina en la dieta a través de la acción de la microbiota
intestinal, ha demostrado recientemente ser un factor de riesgo para la EAC y la insuficiencia
cardíaca (Koeth et al., 2013). Las cepas puras de ratones exhiben variaciones en los niveles de
TMAO cuando se mantienen en una dieta occidental, y estas se asocian significativamente con la
aterosclerosis (Bennett et al., 2015). Los modelos de ratones experimentales revelaron que la
suplementación dietética con colina (que puede procesarse a TMAO) o TMAO en sí promovió la
aterosclerosis (Wang et al., 2011).
Trombosis
La trombosis está significativamente relacionada con la CAD humana (Davies, 1996). Una
investigación del inhibidor de la activación del plasminógeno 1 ( Pai1 ) en un modelo de ratón
mostró un fenotipo protrombótico con formación acelerada de lesiones (Schafer et al., 2003).
Falta de actividad física
La falta de actividad física es un factor de riesgo bien conocido de la CAD humana (Warburton et
al., 2006). Los estudios en modelos de ratones revelaron un desarrollo desacelerado de la
aterosclerosis en ratones sometidos a ejercicio (Meissner et al., 2011).

Bacteriemia indebida
La bacteriemia indebida se asocia con la EAC. La enfermedad periodontal proporciona la entrada
más común para tales patógenos (Beck et al., 1996). Los modelos de infección oral con patógenos
periodontales mostraron aterosclerosis acelerada en ratones (Lalla et al., 2003).
Insuficiencia renal
La insuficiencia renal acelera la progresión de la CAD humana, especialmente cuando la carga de
calcificación es alta (Yerkey et al., 2004). Los modelos genéticamente modificados de ratón de
insuficiencia renal ( Fgf23 - / - o Klotho - / - ) o ratones en los que se inició la inducción con toxinas
urémicas, como el indoxil sulfato, mostraron aterosclerosis acelerada y lesiones altamente
calcificadas (Neven y D'Haese, 2011).
Síndrome metabólico
El síndrome metabólico, caracterizado por resistencia a la insulina, obesidad, presión arterial
elevada y dislipidemia, es un factor de riesgo para el desarrollo de la CAD humana (Isomaa et al.,
2001.). Varios modelos de ratones con síndrome metabólico muestran una formación acelerada de
lesiones (Kennedy et al., 2010).
Obesidad
La obesidad es un factor de riesgo establecido para la EAC en humanos. La obesidad también se
asocia positivamente con la aterosclerosis en ratones con dietas altas en grasa y colesterol (Kennedy
et al., 2010). Los ratones con deficiencia de leptina ( Lep ob / ob ) tienen un fenotipo obeso distinto,
pero están protegidos contra la aterosclerosis (Chiba et al., 2008, Nishina et al., 1994, Plummer y
Hasty, 2008). Este efecto puede estar relacionado con el aumento de tamaño de las lipoproteínas
en ratones obesos Lep ob / ob , lo que lleva a una menor penetración de las paredes arteriales (Nishina
et al., 1994) y la regulación de la presión arterial (Huby et al., 2016). La deficiencia del receptor de
leptina ( Lep db / db ), en contraste con la deficiencia de leptina, condujo a un aumento de los niveles
plasmáticos de leptina y aterosclerosis pronunciada, lo que sugiere que la leptina en sí promueve la
aterosclerosis (Wu et al., 2005).
Diferencias de sexo
En los seres humanos, los hombres muestran un inicio más temprano de CAD en comparación con
las mujeres. En los ratones, por otro lado, la aterosclerosis es generalmente más prominente en las
hembras, aunque esto depende del modelo de ratón y la dieta utilizada. La mayor susceptibilidad a
la aterosclerosis en ratones hembras se ha atribuido en parte a los genes codificados por los
cromosomas sexuales (Arnold et al., 2016, Link et al., 2015) y también a las diferencias en el
metabolismo de TMAO, un factor de riesgo potente para la aterosclerosis (Bennett et al., 2013). El
TMAO se produce por oxidación de la trimetilamina circulante, catalizada por la enzima flavina
monooxigenasa 3 (FMO3). En ratones, la expresión de FMO se suprime dramáticamente por la
testosterona y, por lo tanto, los niveles de TMAO son mucho más bajos en los machos en
comparación con las hembras (Bennett et al., 2013, Kloss et al., 1982). En contraste, los niveles de
expresión de FMO3 hepáticos son similares o solo ligeramente más bajos en hombres que en
mujeres, y los niveles de TMAO en circulación son similares en hombres y mujeres (Tang et al.,
2013).

Resultados de la Asociación del Genoma Humano: Superposición con estudios en

ratones
Durante la última década, los GWAS han mapeado de manera robusta miles de loci para varias
enfermedades comunes. En general, los loci identificados exhiben individualmente un tamaño de
efecto muy modesto, y juntos explican una pequeña fracción del componente genético
(heredabilidad) de la enfermedad, aunque algunos loci muestran series alélicas que van desde alelos
comunes, genómicamente significativos asociados a mutaciones raras. elevarse a rasgos
mendelianos, por ejemplo, deficiencia de LDLR o GUCY1A3 (Erdmann et al., 2013, Goldstein y
Brown, 2015). En el caso de la aterosclerosis, los grandes metanálisis han identificado un total de
57 loci que cumplen con un nivel de umbral ajustado de Bonferroni, y aproximadamente 100 loci
adicionales muestran una asociación sugestiva (Deloukas et al., 2013, Consorcio Genético de
Enfermedades de las Arterias Coronarias (C4D), 2011, McPherson y Tybjaerg-Hansen,
2016, Nikpay et al., 2015, Schunkert et al., 2011). En contraste con los rasgos mendelianos (en los
que aproximadamente el 85% de las variantes causales afectan a las secuencias de codificación), los
rasgos de enfermedades complejas comunes parecen deberse principalmente a variaciones en las
regiones no codificantes que afectan la expresión génica(Nikpay et al., 2015, Seifert et al.,
2016). En general, dentro de la región de desequilibrio de ligamiento (LD), los loci contienen
múltiples genes. El gen causal puede incluso estar fuera de la región de LD si está regulado por un
potenciador dentro de la región asociada con la enfermedad. Por lo tanto, un desafío en la actualidad
es identificar las variantes genéticas causales y los genes causales en cada locus. Para nuestra
comparación con los ratones, hemos utilizado dos conjuntos de genes GWAS humanos diferentes,
que se describen a continuación ( Tabla S2).
El primer conjunto de genes (244 genes GWAS) se basa en anotaciones de 169 loci GWAS
significativos y sugerentes conocidos, que incorporan conocimiento y enfoques basados en datos
(Brænne et al., 2015, Deloukas et al., 2013, Nikpay et al., 2015, Schunkert et al., 2011). Esta lista de
genes es un conjunto de genes curados de forma conservadora que probablemente proporcione los
genes CAD humanos más confiables basados en el enfoque GWAS.El segundo conjunto de genes
(880 genes GWAS extendidos) también se basa en los loci GWAS (Deloukas et al., 2013, Nikpay et
al., 2015) pero además incorpora aspectos funcionales que utilizan loci de rasgos cuantitativos de
expresión (eQTLs) y anotaciones ENCODE, de manera que se incorporan genes adicionales que no
cumplen con un nivel de significación de todo el genoma (p <5E − 8). La extensión de los genes
aumenta la probabilidad de incluir genes falsos positivos, pero ofrece una mejor oportunidad para
inferir mecanismos biológicos y vías que contribuyen a la CAD (Zhao et al., 2016).

Figura 1 Genes candidatos de CAD GWAS humanos: enfoque en genes y validados en ratones
El gráfico circular (izquierda) muestra genes candidatos humanos GWAS de CAD agrupados en
aquellos que aún no se han estudiado en ratones (azul), aquellos estudiados en modelos
experimentales con efectos consistentes (verde) o efectos inconsistentes (rojo), y aquellos sin
homólogo humano (blanco). ). El segundo gráfico circular muestra el porcentaje de genes que
contribuyen a los rasgos o funciones asociados con CAD (derecha). Los genes con efectos
pleiotrópicos se ordenan de acuerdo con su contribución más dominante.

Perturbación experimental en ratones

Los 797 ortólogos humanos ( Tabla S2 ) de los genes de ratón identificados en modelos de ratón
diseñados se superponen significativamente con los conjuntos de genes CAD humanos descritos
anteriormente. Por lo tanto, 45 (18.4%) de los genes GWAS de CAD (p = 1.13E-17) y 72 (8.2%) de
los genes GWAS extendidos (p = 1.27E-8) se superponen con la lista de 797 ortólogos de ratón. La
cantidad de genes que se superponen es necesariamente pequeña porque solo se ha identificado una
pequeña fracción de los genes humanos (como se juzga a la fracción de heredabilidad) y algunos de
ellos probablemente sean falsos positivos.
Quizás un análisis más significativo es preguntar qué fracción de los genes GWAS humanos que se
han estudiado en modelos de ratón producen un resultado consistente. Dado que los resultados del
GWAS humano se publicaron muy recientemente, solo una fracción de los candidatos humanos se
ha estudiado en ratones. Además, debemos tener en cuenta que un resultado negativo en el mouse
puede no ser publicado. Sin embargo, encontramos que de los 244 genes GWAS humanos
significativamente o sugestivos, 46 ya se han estudiado por su efecto sobre el tamaño de la lesión en
ratones y 45 de estos afectaron significativamente la aterosclerosis en modelos de ratones ( Figuras
1 y 2 ), dejando alrededor de 190 candidatos humanos. Genes que aún no han sido estudiados
( Figura S1 ). La información detallada se proporciona en la Tabla S2.. Dado que es poco probable
que muchos de los genes GWAS humanos en nuestra lista sean causales, tal grado de superposición
parece sorprendente. Sin embargo, la mayoría de los genes superpuestos se consideraron
previamente (antes de GWAS) como fuertes candidatos en función de sus funciones en el
metabolismo de los lípidos, la presión arterial o la inflamación y, por lo tanto, se estudiaron en
ratones ( Figura 1 ).
Variación natural a través de cepas de ratones consanguíneos
Hay algunos problemas potenciales con el uso de genes knockouts en ratones para modelar la
aterosclerosis humana. Es importante destacar que estos estudios están sesgados por la elección del
gen. Además, el efecto puede depender de los antecedentes genéticos, y la mayoría de los nocauts
estudiados hasta la fecha pueden verse comprometidos por un efecto del "gen pasajero" (ver más
abajo) (Lusis et al., 2007). Finalmente, los knockouts tienen un tamaño de efecto mucho mayor que
las sutiles variaciones genéticas cuantitativas o estructurales de la mayoría de los genes
GWAS. Estos problemas con los knockouts se pueden evitar comparando los resultados de GWAS
humanos con los resultados de estudios de variaciones naturales en ratones. El estudio más
completo de aterosclerosis entre cepas de ratones consanguíneos se realizó en un conjunto de
aproximadamente 100 cepas consanguíneas de ratones altamente diversas, disponibles
comercialmente, conocido como el Panel de Diversidad de Ratones Híbridos (HMDP) (Bennett et
al., 2015). En total, se estudiaron unos 1.000 ratones en el fondo de los transgenes combinados de
ApoE-Leiden y CETP humanos. La susceptibilidad a la aterosclerosis varió varias veces en 100
veces entre las cepas (Bennett et al., 2015).
Primero preguntamos si los ortólogos de ratón de los genes GWAS humanos exhibían una
correlación significativa (p <0,05) con aterosclerosis en todo el HMDP. De los 244 genes GWAS,
66 (27,0%) mostraron una correlación significativa (en forma de expresión) con el tamaño de la
lesión en la aorta. Además, los niveles de expresión de 27 (11,1%) genes en el hígado se
correlacionaron significativamente con el aumento del tamaño de la lesión en la aorta de ratón
( Tabla 3 ). Además de los GWAS CAD, ha habido grandes GWAS de lípidos en la sangre, con un
total de 274 genes candidatos identificados (
Goodarzi, 2016, Welter et al., 2014). Se probó si los ortólogos de ratones de estos genes mostraron
una correlación significativa (p <0,05) en la expresión en hígados o tejido adiposo con lípidos
plasmáticos en ratones. En general, el 55,1% (151 de 274) de estos genes mostró una correlación
significativa con los lípidos plasmáticos en el HMDP ( Tabla 3 ). Los resultados de ambas
comparaciones se presentan en la Tabla S3 . Llegamos a la conclusión de que los genes GWAS para
la aterosclerosis y los lípidos plasmáticos muestran variaciones muy consistentes cuando se estudian
a través de diferentes cepas de ratones consanguíneos.
Modelado de la ruta: concordancia de los estudios en humanos y ratones
Tres estudios independientes han modelado rutas de CAD basadas en datos del Consorcio de
replicación y metanálisis del genoma de la enfermedad coronaria (CARDIoGRAM) (Ghosh et al.,
2015, Mäkinen et al., 2014, Zhao et al., 2016). Mäkinen et al. utilizó un análisis de enriquecimiento
de conjuntos de SNP (SSEA) que primero cartografió los GWAS de CARDIoGRAM con los genes
basados en eQTL, y luego evaluó el enriquecimiento de las señales CAD en redes de coexpresión
específicas de tejido y vías canónicas de las bases de datos Biocarta, KEGG y Reactome. El estudio
reveló 79 vías significativas para la CAD humana (Mäkinen et al., 2014). Gosh et al. usó una
estrategia alternativa de mapeo de genes que se basaba en la distancia cromosómica entre los SNP y
los genes y un análisis alternativo de enriquecimiento de conjuntos de genes para identificar 32 vías
CAD significativas derivadas de la base de datos Reactome (Ghosh et al., 2015). Zhao et al. curaron
diferentes listas de genes candidatos basadas en SNP pico de GWAS e implementaron redes
reguladoras de genes y patrones de expresión para identificar 93 vías relevantes de CAD basadas en
rutas canónicas de Biocarta, KEGG y Reactome (Zhao et al.,2016). Cuando se combinaron, estos
tres estudios identificaron un total de 178 vías únicas asociadas con CAD GWAS humanas ( Tabla
S4 ).
Para examinar la concordancia de las vías humanas y de ratón ( Figura 3 ), modelamos las vías de
aterosclerosis en ratones utilizando métodos similares basados en el conjunto de 827 genes que se
ha demostrado que contribuyen a la aterosclerosis utilizando perturbación experimental (ver
arriba). Aplicamos vías canónicas basadas en el conocimiento de las bases de datos KEGG,
Reactome y Biocarta para definir conjuntos de genes representados en exceso. Utilizamos la prueba
exacta de Fisher y definimos el significado de la representación excesiva como p <0.01 después de
la corrección de Bonferroni. Nos centramos en 263 vías que muestran una representación excesiva
significativa de genes de ratones ateroscleróticos. Las vías para el metabolismo de los lípidos, el
sistema inmunológico, la cascada de receptores tipo peaje, la adhesión focal, la hemostasia, la
señalización de activación de las plaquetas y la agregación fueron altamente sobre representadas.
De las 178 vías CAD humanas, 72 (40.2%) vías fueron idénticas a nuestras vías de ratón. Un factor
limitante es la diferente nomenclatura de Biocarta, KEGG y Reactome, que hace imposible una
comparación directa. Para abordar esta limitación, analizamos la superposición de genes incluidos
en estas vías y consideramos aquellas vías altamente significativas que compartían mutuamente más
del 50% de sus genes o que incluían al menos el 90% de sus genes en una ruta de las otras
especies. Al utilizar estos criterios, observamos que el 55,1% (98 vías únicas) de las vías asociadas
con la CAD humana se superponen con las vías de aterosclerosis del ratón y el 53,2% (140) de las
vías del ratón se superponen con las vías asociadas con el GWAS humano de la CAD.
Para las rutas basadas en datos del mouse, solo cinco se superponen menos del 30% con las rutas
humanas. Estas vías específicas para ratones incluían diabetes, biología del desarrollo y regulación
de la expresión génica en células beta. La última ruta, por ejemplo, consta de 20 genes y
comparte Akt1 , Akt2 , Akt3 , Foxo1 , Hnf4a , Hnf4g e insulina con rutas asociadas con CAD
humanas conocidas, mientras que los genes Foxa2 , Foxa3 , Gck , Iapp , Mafa , Neurod1 , Nkx2-
2 , Nkx6-1 , Pax6 ,Pdx1 , Pklr , y Slc2a2No estaban presentes en las vías humanas. En total, 37 vías
humanas mostraron una superposición de menos del 30%. Estos incluyeron el metabolismo de las
poliaminas, el transporte de zwitterión de anión de catión orgánico, la biosíntesis de pantotenato y
CoA, el metabolismo de fenilalanina, el metabolismo de aminoácidos de azufre y la aminoacilación
de ARNt. Dos vías inesperadas, la vía de interacción del receptor de ligando neuroactivo y la vía de
señalización de la neurotrofina, mostraron una superposición de alrededor del 50% entre ratones y
humanos. Dado que la mayoría de los modelos de ratón no desarrollan infartos de miocardio, fue
interesante examinar si las especies diferían en vías relevantes como la coagulación o la
degradación del colágeno. Sin embargo, no se observaron tales diferencias significativas. En
general, estos hallazgos destacan una alta consistencia biológica entre las especies, por solo 42 (11.

Figura 2 Genes candidatos a CAD GWAS humanos que han sido probados en modelos
animales de ratón
Esta gráfica circular muestra una fracción de 244 genes candidatos humanos GWAS de CAD que
se han probado en modelos animales. Los números dentro del círculo representan los 22 pares
autosomas humanos. Los genes candidatos se ordenan de acuerdo con el SNP pico de GWAS. Los
genes marcados de verde ya se han estudiado en modelos de ratones y muestran efectos
significativos en la aterosclerosis. Se estudió la lipoproteína (a) (LPA), que no tiene ortólogo en
ratones, en un modelo de ratón transgénico. El rojo indica que la perturbación experimental del
gen en ratones no mostró un efecto significativo sobre la aterosclerosis. Los genes marcados con
azul son el tema de la investigación en curso en modelos de ratón.
 Una forma de visualizar la concordancia de las vías asociadas a la aterosclerosis entre el humano y
el ratón es resumirlas en grupos. Utilizamos un análisis de componentes principales para reducir la
alta dimensionalidad de los datos para agrupar las vías según la superposición de sus genes
constituyentes ( Figura S2 ). En esta representación, cuanto más cerca estén las vías, mayor será el
porcentaje de genes compartidos. Dividimos los grupos de acuerdo con las funciones de sus genes,
con las siguientes categorías: antígeno, apoptosis, cáncer, ciclo celular, adhesión focal, sistema
inmunológico, inflamación, metabolismo de lípidos y lipoproteínas, función y proliferación de las
plaquetas y transcripción.
Problemas de confusión
Al evaluar la relevancia de los estudios en ratones para la CAD humana, hay una serie de posibles
factores de confusión que deben considerarse. A continuación, discutimos brevemente los más
significativos.

Tabla 3 Correlación de conjuntos de genes con el tamaño de la lesión y los lípidos en la sangre
en ratones HMDP
Aorta p valorar a Hígado p valorar a
Genes de aterosclerosis de ratón (827) 202 (24.4%) 2.08E − 109 156 (18.9%) 3.67E − 66
Genes CAD GWAS (244) 66 (27.0%) 5.38E − 36 27 (11,1%) 2.54E − 6
Genes CAD extendidos GWAS (880) 152 (17.3%) 6.17E − 65 98 (11.1%) 1.75E − 25
Adiposo p valorar a Hígado p valorar a
Genes LIPID GWAS (274) 116 (42,3%) 6.21E − 97 126 (46.0%) 3.77E − 111

El nombre y el tamaño de cada conjunto de genes, el tejido en el que se midió la expresión génica y
el número de genes correlacionados significativamente con el tamaño de la lesión en la aorta y el
hígado y con los lípidos en el tejido adiposo y el hígado. Los cálculos se basaron en los niveles de
expresión de genes de ratón.
a Calculado utilizando la prueba exacta de Fisher.

Perturbaciones genéticas de tamaño grande contra efecto pequeño

Mientras que las formas comunes de EAC resultan de interacciones de muchos factores genéticos y
ambientales diferentes, la mayoría de los estudios con ratones se llevan a cabo utilizando grandes
perturbaciones genéticas o ambientales, como ratones knockout o dietas extremadamente ricas en
colesterol. Dichas perturbaciones extremas pueden afectar muchas vías y cientos o miles de genes,
posiblemente influyendo en la aterosclerosis de una manera pasajera y no directamente. Los genes
identificados en los GWAS, por otro lado, generalmente exhiben una variación funcional muy
modesta.
El problema de los genes del pasajero
Hasta hace varios años, la mayoría de los ratones dirigidos por genes se generaban en un fondo
genético de la cepa 129 / J y luego se transferían a la cepa C57BL / 6J mediante una serie de
retrocruzamientos. Mientras que de cinco a diez generaciones de retrocruzamiento eliminarán con
éxito la mayoría de la contribución genética 129 / J, las regiones que flanquean inmediatamente el
gen objetivo permanecerán, ya que se requerirán eventos de recombinación poco frecuentes para
sustituir los alelos C57BL / 6J. Por lo tanto, cientos de genes 129 / J, incluyendo muchos con
diferencias funcionales, contaminarán típicamente tales estudios. Dado que muchas vías biológicas
diferentes convergen en la aterosclerosis, la posibilidad de un efecto del gen pasajero es
significativa. De manera similar, los ratones transgénicos a menudo se generan en fondos distintos
de C57BL / 6J (Lusis et al., 2007). Estudios recientes han examinado la cuestión del gen pasajero en
estudios de funciones inmunes y metabolismo óseo (Ackert-Bicknell y Rosen, 2016, Vanden
Berghe et al., 2015).
El enfoque del gen candidato es intrínsecamente parcial
Los genes candidatos generalmente se seleccionan para un estudio en base a lo que se conoce de
estudios en humanos sobre aterosclerosis o de otros datos biológicos. Por ejemplo, algunos estudios
están dirigidos a investigar mecanismos que contribuyan a factores de riesgo como la hipertensión
arterial o hipercolesterolemia. Claramente, esto podría resultar en una superposición artificial de los
resultados en las comparaciones entre humanos y ratones. Los estudios de variaciones naturales en
ratones, por otro lado, no sufren este sesgo y es más probable que reflejen una superposición
significativa.
Consideraciones estadísticas
Fenómenos como "maldición del ganador", el concepto de que el primer informe probablemente
tendrá un tamaño de efecto mayor que los estudios posteriores, y el "sesgo de publicación", el
concepto de que la literatura estará sesgada porque es más probable que se publiquen resultados
positivos resultados negativos, indudablemente han sesgado los resultados de los estudios de genes
candidatos. Por ejemplo, a partir de la década de 1980 con el desarrollo de métodos para examinar
la variación genética a nivel de ADN, muchos estudios de un número relativamente pequeño de
pacientes y controles (típicamente cientos) informaron asociaciones "significativas" de variantes de
ADN con enfermedades comunes. Pocos de los muchos cientos de hallazgos reportados podrían
replicarse en los GWAS más grandes e imparciales (Altshuler et al., 2008). Una situación similar
puede aplicarse a las investigaciones de genes candidatos en ratones que utilizan tecnologías
knockout o transgénicas, particularmente dada la gran variación no genética de los ensayos de
lesiones de aterosclerosis en ratones (Daugherty y Rateri, 2012). De hecho, hay numerosos
ejemplos de la falla en replicar los hallazgos de dichos estudios, como los que involucran Abcg1,
SRA y CD36 (Moore et al., 2005, Witztum, 2005).
Análisis de lesiones en ratones y humanos
Las comparaciones de diferentes estudios en ratones son difíciles debido a la falta de un protocolo
estandarizado. Las variables entre los estudios incluyen el modelo, el método (en la cara, las
secciones congeladas y el contenido de colesterol), el procedimiento de tinción (lípidos e
inmunitarios), la dieta, la duración del estudio, la edad de los ratones, las condiciones del vivario y
la cantidad de ratones estudiados. Debido al pequeño tamaño de las lesiones del ratón, los análisis
cuantitativos de la composición celular y la expresión génica son difíciles (Erbilgin et al.,
2013, Zhao et al., 2007). Por otro lado, la mayoría de los estudios en humanos utilizaron
definiciones clínicas para la aterosclerosis.
Discusión
La mayor parte de nuestra comprensión actual de los mecanismos subyacentes a la aterosclerosis se
deriva de estudios con modelos de ratón. Un tema importante se relaciona con la relevancia de los
modelos de ratón para la patobiología humana, particularmente porque los datos de ratón se están
utilizando para desarrollar objetivos farmacológicos, y los modelos de ratón también se usan para
probar compuestos terapéuticos en estudios preclínicos. La reciente identificación de loci humanos
asociados con CAD o lípidos plasmáticos en GWAS grandes (Consorcio Genético de Enfermedades
de las Arterias Coronarias (C4D), 2011, Deloukas et al., 2013, Goodarzi, 2016, Nikpay et al.,
2015, Samani et al., 2007, Schunkert et al., 2011, Welter et al., 2014) brindó la oportunidad de
realizar comparaciones genéticas sistemáticas entre las dos especies. Primero realizamos un estudio
exhaustivo de los genes que se han asociado significativamente con la aterosclerosis en ratones
mediante perturbación experimental, identificando un total de 827 genes que se ha informado que
influyen en el desarrollo de la lesión. También examinamos los resultados de estudios de variación
genética natural que afectan a la aterosclerosis en ratones. Luego realizamos tres análisis
comparativos diferentes. El primero abordó la consistencia de los factores de riesgo de
aterosclerosis entre las especies. El segundo abordó la superposición de los genes GWAS CAD
humanos con los resultados de estudios con ratones. El tercero examinó la superposición de 178
vías CAD humanas y 263 vías de aterosclerosis de ratón. Observamos una fuerte superposición en
los tres análisis. En particular, casi todos los genes GWAS humanos que se han estudiado en ratones
(45 de 46) muestran efectos consistentes en la aterosclerosis. Esto incluye la lipoproteína (a), que se
estudió como un transgénico pero no tiene un homólogo en el ratón.
Nuestras conclusiones difieren de un estudio reciente realizado por Pasterkamp y colegas en el que
los investigadores concluyeron que, con la excepción del metabolismo de las lipoproteínas, es
probable que los estudios con ratones tengan un valor muy limitado para comprender la enfermedad
humana (Pasterkamp et al., 2016). Estos investigadores realizaron una encuesta exhaustiva de
estudios en ratones de genes candidatos (en total 659) y se centraron en la superposición con genes
GWAS humanos. Confirmamos aproximadamente el 75% de sus genes candidatos de ratón en
nuestra búsqueda bibliográfica, pero no encontramos pruebas claras del 25% restante en la
literatura. Esto puede haber sido causado por la selección de los nombres de los ortólogos humanos,
los diferentes criterios de búsqueda y la inclusión más estricta de genes en nuestro estudio (por
ejemplo, varios de sus genes mostraron solo un efecto sugestivo sobre la aterosclerosis en
ratones). Sin embargo, además del número y la interpretación de los genes de ratón identificados en
la literatura, hubo diferencias significativas adicionales entre los estudios. Primero, nuestro análisis
incluyó factores de riesgo de aterosclerosis adicionales, mientras que los suyos se enfocaron solo en
los lípidos. Segundo, utilizamos un conjunto más refinado de genes humanos basados no solo en la
distancia al pico de SNP, sino también en información funcional, particularmente datos de
eQTL. Usando datos de GWAS, realizamos comparaciones adicionales, como el examen de los
genes GWAS que se han probado en modelos de ratón para determinar su consistencia. En tercer
lugar, no restringimos nuestra comparación con los genes de modelos de ratones diseñados, pero
incluimos datos de estudios de variaciones que ocurren naturalmente en ratones. Esta es quizás la
línea de evidencia más sólida que respalda la relevancia de los modelos de mouse porque evita
algunos de los sesgos inherentes en las otras comparaciones. Finalmente, las bases de datos de las
vías utilizadas en los dos estudios son diferentes: el estudio anterior usó Ingenuity, una compilación
de datos de literatura amplia de múltiples especies y tejidos, mientras que usamos las bases de datos
Biocarta, KEGG y Reactome.
En contraste con el informe anterior, concluimos que los genes y las vías descubiertas en los
estudios de aterosclerosis en ratones reflejan una biología altamente
superpuesta con la revelada por los GWAS humanos de CAD. Esto no significa que no haya
diferencias significativas. Por ejemplo, el locus GWAS humano más impactante, en el cromosoma
9p21, probablemente esté mediado por cambios en la expresión de un ARN largo no codificante,
ANRIL, que no se conserva en el ratón (Holdt et al., 2013). Además, si bien la conservación de las
vías de la enfermedad entre ratones y humanos es altamente significativa, está lejos de ser completa.
La relevancia de los modelos animales para los trastornos humanos comunes ha sido cuestionada,
en gran medida por el hecho de que las dianas farmacológicas desarrolladas en modelos animales
no muestren eficacia en los ensayos en humanos (Griego y Hansen, 2013, Mak et al., 2014, Perrin,
2014, Richmond y Su, 2008). Una explicación, por supuesto, es que hay diferencias significativas
entre las especies. Otra explicación plausible es que hay falsos positivos en los datos del mouse,
como se explicó anteriormente. Un tercero se refiere al diseño experimental. En particular, no está
claro que los ratones knockout sean apropiados para modelar las variaciones genéticas sutiles que
subyacen a las formas comunes de aterosclerosis. Finalmente, la mayoría de los estudios con
ratones se realizaron en un solo fondo genético (generalmente, la cepa C57BL / 6J), lo que puede
limitar gravemente la amplitud de las conclusiones que se pueden extraer (Gasch et al.,2016). A
pesar de estas limitaciones en los estudios con ratones, nuestra comparación entre especies reveló
muchas vías convergentes y apoya el valor de los modelos de ratones en la revelación de procesos
mecanicistas críticos de la aterogénesis.

Es probable que centrarse en las rutas patógenas en lugar de los genes individuales sea una forma
más productiva de traducir la información de modelos animales a estudios humanos. De interés
inmediato es determinar con más detalle los factores que regulan estas vías e identificar los tejidos
en los que contribuyen a la aterosclerosis. Además, las rutas convergentes y divergentes entre las
especies reveladas en nuestra revisión comparativa pueden ayudar a guiar la selección de los
modelos apropiados en futuros estudios preclínicos. Además de la progresión de la lesión, algunos
estudios han sugerido una superposición de genes que controlan la regresión de la lesión en ratones
y humanos, lo que sugiere una posible vía para la investigación terapéutica (Ramsey et al.,
2014). Dadas las muchas ventajas de los ratones para estudiar la aterosclerosis, incluido el acceso a
los tejidos y la capacidad de controlar el medio ambiente, los estudios en ratones probablemente
continuarán abriendo el camino hacia la comprensión mecanicista.

Contribuciones de autor
MVS realizó la búsqueda bibliográfica de genes de ratón. Todos los autores participaron en los
análisis de los datos y revisaron críticamente el manuscrito, que fue escrito por MVS, HS y AJL.

Expresiones de gratitud
Este trabajo fue apoyado por subvenciones de la Fondation Leducq ( CADgenomics : Understanding
CAD Genes, 12CVD02), el Ministerio Federal Alemán de Educación e Investigación (BMBF) en el
marco o el concepto de investigación y financiamiento e: Med ( e: AtheroSysMed , subvención
01ZX1313A -2014), el Séptimo Programa Marco de la Unión Europea FP7 / 2007-2013 en virtud
del acuerdo de subvención n. HEALTH-F2-2013-601456 ( CVgenes -at-target), la DFG como parte
de Sonderforschungsbereich CRC 1123 (B2), y NIH otorga HL28481 y HL30568.