DETERMINACIÓN DE AZUCARES REDUCTORES POR EL METODO DE

SOMOGYI- NELSON:

INTRODUCCION:

Teniendo en cuenta que los azúcares reductores (glucosa, maltosa, entre

otros) deben cuantificarse mediante técnicas objetivas, confiables y
reproducibles (Meneges et al., 1991), se han utilizado, a través del tiempo,
diferentes métodos: la cromatografía de papel (Maier, 1978), los
volumétricos de ferricianuro (NTC 926) o de Eynon - Lane (Bernal de
Ramírez, 1994), el gravimétrico de Allihn (Molinari, 1920), los
espectrofotométricos de Somogyi-Nelson (Ros et al., 1992), DNS y DNS -
fenol (Castellanos, 1995); así como los de cromatografía HPLC (Ros et al.,
1992).

Sin embargo, independientemente del procedimiento aplicado, es deber del

investigador simplificar y racionalizar el análisis con la sensibilidad,
versatilidad y especificidad del instrumental para repetir con exactitud los
experimentos, Por lo cual en la presente practica se describirá el método de
SOMOGYI-NELSON debido a que es, altamente reproducible, determina
azúcares reductores presentes en concentraciones muy bajas (20 - 180 µg/
ml). Ahora bien, emplear el procedimiento de SOMOGYI - NELSON implica
familiarizarse con su composición y el estudio de los principios químicos que
utiliza el método de SOMOGYI - NELSON para la determinación de
azúcares reductores, los cuales se desarrollara en la practica presente.

OBJETIVOS:

 Determinar el contenido de azucares totales en la muestra.

 Conocer la técnica y el principio del método de SOMOGYI-NELSON.
FUNDAMENTO:

El método de Nelson (1944)-Somogyi (1952) propone la formación de

un complejo entre el tartrato de sodio y potasio y el Cu2+ a ph menor
a 7,0, el cual es capaz de oxidar azúcares que contengan extremo
reductor. El método se basa en la reducción cuantitativa del Cu2+
para la generación de óxido cuproso Cu2O, el cual reacciona
cuantitativamente para la formación de un complejo.

Mecanismo de Reacción:
Aunque el mecanismo no se ha elucidado completamente, sí se conoce
que todos los aldehídos y cetonas α- hidroxiladas, como lo son las
aldosas y cetosas, pueden ser objeto de oxidación por el Cu2+ bajo las
condiciones de ph y calentamiento adecuadas. El precipitado de Cu2O
(amarillo-naranja) puede aparecer, dependiendo de la cantidad de
azúcar en la muestra, en ese caso es necesario centrifugar antes de
hacer la medida espectrofotométrica

Principios químicos del componente de Somogyi

El sulfato de sodio es un cuerpo sólido e incoloro, cuya máxima
solubilidad se presenta a los 33 ºC, y sus disoluciones saturadas en
caliente ofrecen en frío el fenó- meno de la sobresaturación: en este
estado, cuando por agitación u otra causa cristalizan, lo hacen con
siete moléculas de agua (Puig, 1934).

Principios químicos del reactivo de Nelson

El molibdato de amonio en presencia de ácido sulfúrico y de arsenato
de sodio da origen al ácido molibdoarsénico, complejo de color
amarillo.
EQUIPOS Y MATERIALES, REACTIVOS:
Material
 Tubos de ensayo
 Muestra de miel
 Pipetas

REACTIVO CUPRICO DE SOMOGYI (SN1)

 4.0G DE CuSO 4 ó 6.25g de SO4 .5H2O(Sulfato de cobre )
 24.0 g Na2CO3 (carbonato de sodio anhidro ) o 28.07g con una
molecula de agua
 16,0g de NaHCO3 (Bicarbonato de sodio )
 12.0g de tartrato deble de sodio y potasio
 18g de Na2 SO4 (Sulfato de sodio)

Disolver en un Bécquer de 100ml con 600 ml de agua destilada,

acrecentar los reactivos indicados en el orden indicado anteriormente
.Transferir para un balón volumétrico de 1000ml y completar a
volumen con agua destilada, dejar de un día para otro al abrigo de la
luz guardar en frascos ámbar

Reactivo de arsenomolibdico de Nelson (SN2 )

Solución A
 50.0 g de (NH4) 6Mo7O24 (Molibdato de amonio) o 53.093g de
molibdato de amonio 4H2O en 900ml de agua destilada
 Adicionar 42 ml de H2SO4 concentrado p.a

Solución B
 6.0 g de Na2AsO4 en 50 ml de agua destilada o 10.06 g de
Na2AsO4 .7H2O (Arsenito disodico
 Mezclar A y B y mantener a 37ºC en baño maría o estufa por
24 horas .volumen final a 1000 ml
PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL:
 1.0ml de solución problema más 2.0 ml de reactivo SN1
 10 minutos en baño de agua en ebullición
 Enfriar en baño de hielo
 Adicionar 2ml de reactivo SN2
 Esperar 5 minutos
 Completar a volumen para 25 ml de agua destilada
 Leer la absorbancia a 540 nm

Preparacion de la muestra

5.0 g de miel

Disolución

Enrasar a 100 ml

Filtración

Filtrado (liquido) Residuo descartar

50ml/100

1ml/100 ml

Tomar 1.0 ml
 RESULTADOS:

Elaboración de la curva patrón:

Nº tubos padrón H2O Reactivo Reactivo Concentración Absorbancia

glucosa (ml) (ml) SN1 ml SN2 ml mg 540 nm
1 0.1 0.9 2.0 2.0 0.03 0.1020
2 0.2 0.8 2.0 2.0 0.06 0.2100
3 0.3 0.7 2.0 2.0 0.09 0.2635
4 0.4 0.6 2.0 2.0 0.12 0.3252
5 0.5 0.5 2.0 2.0 0.15 0.3907
6 0.6 0.4 2.0 2.0 0.18 0.4301
7 0.7 0.3 2.0 2.0 0.21 0.5206
8 0.8 0.2 2.0 2.0 0.24 0.5902
9 0.9 0.1 2.0 2.0 0.27 0.6305
10 1,00 0 2.0 2.0 0.30 0.6901
blanco -- 1.0 2.0 2.0 --- 0
Muestra 1 1.00 0 2.0 2.0 X 0.3975

Regresión lineal:
Datos:
 A: 0.08197
 B: 2.04517
 r: 0.998
1. cálculos:

5.0628 g de miel /100 ml

50ml /100ml

25/100ml

1ml/100ml

4 ml

ABS= 0.3975
Ecuación de la recta:

𝑦 =𝑎+𝑏×

𝑦−𝑎
=𝑥
𝑏

0.3975 − 0.08197
=𝑥
2.04517

𝟎. 𝟏𝟓𝟒𝟐𝟖 = 𝒙

 0.15428 mg → 4 ml de muestra
x mg → 100ml de muestra

𝑋 = 3.857𝑚𝑔

 3.857 mg → 1ml
X → 100ml de muestra
X = 385.7 m g

 385.7mg → 25ml
X → 100ml de muestra
X = 1542.81 mg

 1542.81 mg → 50ml
X → 100ml de muestra

X = 3085.61 mg

Convertimos de mg a gr:
1𝑔𝑟
3085.61 𝑚𝑔 𝑥 = 3.08561 𝑔𝑟
1000 𝑚𝑔

 3.08561 g → 5.0628 g
X → 100g de muestra

𝐱 = 𝟔𝟎. 𝟗𝟓 𝐠 = 𝟔𝟏𝐠𝐫
 GRAFICA N°1: CONCENTRACION vs
ABSORBANCIA y = 2.0452x + 0.082
0.8
0.7
0.6
absorbancia

0.5
0.4
0.3
0.2
0.1
0
0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35
concentracion

DISCUCIONES.

El precipitado de cu2o (amarillo-naranja) puede aparecer,

dependiendo de la cantidad de azúcar en la muestra, en ese caso es
necesario centrifugar antes de hacer la medida espectrofotométrica.
Este proceso no se realizó debido a que se reemplazó por una proceso
de filtración de la muestra (frijol)

La glucosa u otro azúcar reductor reducen el reactivo cúprico

alcalino, dando el óxido cuproso. Este , en presencia del reactivo
arsenomolibdico de nelson, forma un complejo de óxido de molibdeno
de color azul estable cuya intensidad puede ser medida en el
fotocolorimetro , una vez que sigue las leyes de lambert y beer. Esto
explica la presencia del color azul en los tubos de la curva padrón.

CONCLUSIONES.
 Los espectrofotómetros deben permitir efectuar la comparación entre
la señal obtenida por una mezcla que no contiene el analito y otra que
si lo tiene para poder tener la señal de esa diferencia. Siendo esta el
 blanco y de tal manera poder asegurarnos que el equipo esta
debidamente calibrado y no habrá errores al momento de la lectura de
la absorbancia.
 Determinación de la concentración para la absorbancia obtenida
mediante la espectroscopia, la cual se desarrolla mediante la ecuación
obtenido en base a la curva padrón .En este procedimiento se espera
observar la dependencia lineal entre la concentración de la señal con
el incremento en la concentración.
 Determinación de azucares reductores por el método
espectrofotometrico de somogyi- nelson trata de usar dos reactivos
que al usar cualquier muestra que contenga glucosa u otro azúcar
reductor reduce el primero reactivo cuprico alcalino, dando el oxido
cuproso. en presencia de calor para luego ser enfriado en presencia
del reactivo arsenomolibdico de Nelson, forma un complejo de oxido
de molibdeno de color azul ,característico en este método , cuya
intensidad puede ser medida en el fotocolimetro.

BIBLIOGRAFÍA.

 La ciencia de los alimentos, Norman N. Potter 1º edición 1973.

Editorial Edux S.A. 1978 México D.F.

 Técnicas de laboratorio para el análisis de alimentos, D. Pearson

Editorial Acribia, S.A. Zaragoza, España.

 “Análisis de los alimentos”. R. Matissek, F.M. Schnepel y G. Steiner.

Ed. Acribia.

 Alternativas de modificación del método de Somogyi-Nelson para la

determinación de azúcares reductores a partir de sus posibilidades
químicas. G. González Blair y O. Castellanos Domínguez. Revista
Ingeniería e Investigación. 2003