Biotecnología Microbiana Ambiental

ECOLOGÍA MICROBIANA
Riqueza: nro de especies
Equitatividad: que tan bien repartidos están los distintos individuos

Hay distintos índices para medir diversidad. Ej. Coeficiente de Gini: mide equidad.
Importancia de la equidad: La menor desigualdad dentro de la comunidad está asociada a la
actividad metanogénica.

Afinidad por sustrato y velocidad de reacción

K = cte de crecimiento
Estrategas R: cuando hay alta concentración de sustrato pueden consumirlo eficientemente
Alta Km= baja afinidad

Sólidos suspendidos disueltos

Peso seco

Enriquecimiento selectivo como mecanismo de adaptación en biotecnología ambiental

- Carga constante, baja concentración: alta afinidad por sustrato limitante
- Pulso, alta concentración: alta tasa de crecimiento

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Modelo de equilibrio de biogeografía de islas

Tasa de inmigración: número de especies colonizando la isla por unidad de tiempo.
Tasa de extinción: número de especies que se extinguen por unidad de tiempo

Medidas de diversidad
- Diversidad alfa: diversidad dentro de una comunidad local (qué microbiota tiene mayor
número de filotipos)
- Diversidad beta: diferencias entre comunidades locales (qué factores ambientales
correlacionan con las diferencias en la composición de filotipos)
- Diversidad gama: pool de especies “regionales”, i.e. la diversidad total de las comunidades
locales conectadas vía dispersión.

Relaciones de riqueza de especies (SRR)

- Relación especie área: áreas más grandes pueden albergar más especies.
- Relación especie tiempo: en tiempos más largos van apareciendo nuevas especies.

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Quiero saber que bacteria degrada un compuesto por ejemplo. Si tengo ADN marcado con C13 lo
puedo separar del marcado con C12. C13 es un isotopo estable (no decae). Puede sintetizarse un
compuesto enriquecido en este. La idea es que si incubo una comunidad microbiana con un
compuesto q contiene un isotopo estable, la celula q lo consumio lo va a incorporar y puedo separar
extrayendo el ADN y ultracentrifugando, bandas de C13 y bandas de C12. Lo que viene en la fraccion
pesada incorporo el isotopo estable.

RNA Stable Isotope Probing (SIP)

A las 48 hs aparecen las dos en fracción pesada como crecimiento secundario (la primera consume el
fenol y secreta otros compuestos que le sirven a la segunda).
Ventaja: la técnica puede hacerse sobre RNA que es más rápido porque no necesita replicarse,
mayor sensibilidad.

Limitaciones de SIP
- Necesita altas concentraciones de sustrato (bias de cultivo)
- Largos tiempos de incubación
- Enriquecimiento de poblaciones minoritarias
- Condiciones ex-situ no refleja necesariamente los ambientes in situ

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TRATAMIENTO DE EFLUENTES
Qué es lo que hay que eliminar de los efluentes?
- Tóxicos de origen industrial
- Patógenos de origen intestinal
- Materia orgánica
- Nutrientes

Por qué la materia orgánica es contaminante?

La forma más común de respiración es por catabolismo oxidativo de materia orgánica.
Si tengo un compuesto orgánico y tengo un mo. que es capaz de utilizarlo como fuente de carbono,
va a respirar el oxígeno del ambiente consumiendolo como aceptor de electrones.

Los cuerpos de agua superficiales poseen la capacidad de autodepuración. El fondo corresponde a

zona de aguas limpias, luego hacia arriba zona de recuperación y zona de descomposición activa, por
último zona de degradación en la superficie. ​De fondo a superficie aumenta la demanda de oxígeno.
En la zona en la que tengo más descarga de efluentes voy a tener más materia orgánica y más
demanda de oxígeno, el consumo genera un gradiente de oxígeno. La cantidad de O2 que provee la
atmosfera no alcanza en ese lugar para proveer lo suficiente, hacia el fondo tendré más O2 disuelto
porque hay menos materia orgánica. Si la fábrica cierra el equilibrio se recupera sólo lentamente por
este gradiente. (Capacidad de autodepuración del agua).
Cuanto más alta la materia orgánica más alta la demanda de O2.

Demanda Bioquímica de Oxígeno (DBO)

Cantidad de oxígeno requerida para estabilizar la materia oxidable en un ensayo estandarizado de
degradación catalizada por microorganismos. Mido el grado de contaminación. Debe reducirse la
demanda del O2.
Cómo se cuantifica?

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Se mide el oxígeno consumido durante la degradación en un periodo de 5 días a 20 C, en oscuridad

(DBO5).
Dependiendo de cuál sea el contaminante quizás deba agregarse algún nutriente para estimular la
degradación.

Demanda química de oxígeno (DQO)

Cantidad de oxígeno requerida para estabilizar la materia oxidable en un ensayo estandarizado de
degradación química.
Cuantificación: La materia orgánica se oxida químicamente usando dicromato en solución ácida a
150 C durante 2hs A CROMO +3.

Por que DQO siempre es mayor que DBO?

- Muchos compuestos orgánicos que son difíciles de oxidar biológicamente pueden ser
oxidados químicamente.
- Algunas sustancias inorgánicas son oxidadas durante el ensayo de DQO.
- Ciertos compuestos pueden ser tóxicos para los microorganismos en el ensayo de DBO.
Dan una idea de la biodegradabilidad, cuanto más cercanos son los valores es más biodegradable,
pero nunca están muy cercanos.
El tratamiento de efluentes debe reducir la demanda de oxígeno. ​Compuestos orgánicos que
consumen oxígeno degradan el cuerpo receptor e interfieren con el balance de la vida acuática.

Como se reduce la demanda de oxígeno con biotecnología?

Procesos mediados por microorganismos (catálisis bioquímica)

1ER MÉTODO DE TRATAMIENTO: LAGUNAS FACULTATIVAS

Dentro de la laguna sedimentan todos los sólidos que puedan sedimentar. La fracción aeróbica de la
laguna se da cerca de la superficie. ​La principal fuente de oxígeno viene de las algas​. La laguna
facultativa funciona si y sólo si hay algas fotosintetizando. Como producto de la actividad de las
bacterias hay reducción de la DBO y liberación de nutrientes y otros componentes que son sustratos
de otros mos. Se forman agregados de bacterias o algas que también sedimentan. En el fondo se
producen procesos anaeróbicos con liberación de nutrientes.

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Diseño de lagunas facultativas

El valor de carga son los kilos de DBO que puedo tener por área. ​Importa el área por su importancia
en la fotosintesis más que por la capacidad de intercambio. Es un sistema donde, si bien hay
procesos anaeróbicos, ​la degradación en principalmente aeróbica. Tiene dependencia con la
temperatura porque la actividad de las bacterias depende de la temperatura (a distintas
temperaturas admite distinta carga orgánica, a menor temperatura necesito más hectáreas porque
se banca menos kilos de DBO por area.)​. Los kilos de DBO se mide en ppm o miligramos por litro.
Profundidad: 1-2m (típicamente 1.5m)

Clasificacion de solidos segun el tamaño

- Disuelto: hasta 1nm. Pasan a través de un papel de filtro. Son considerados parte de la fase
líquida.
- Coloidal: hasta 100 nm. Dispersado uniformemente en solución, pero en fase sólida.
Cargados (polares y no polares).
- Suspendido​: Hasta 1000 nm. Forma una fase sólida. ​Incluye sólidos sedimentables. En
efluentes cloacales son más del 50%, por eso las plantas de tratamiento incluyen un
sedimentador primario.
Si saco a un efluente gran parte de la DBO por sedimentación, la ventaja es que puedo diseñar una
laguna más chica.

Relación largo-ancho de lagunas facultativas

- Relación 2-3 si recibe efluente crudo. Esto es para que no se acumulen sólidos a la entrada
de la laguna (evtl. bloquean el ingreso).
- Puede ser >3 si proviene de una laguna anaeróbica (porque en esta ya se produjo la
sedimentación)
Conviene que sea más larga que ancha pero no demasiado larga. No conviene que las lagunas sean
cuadradas.
Hay mayor concentración de oxígeno disuelto en las horas del dia en que hay fotosintesis. También
hay relación con el pH.

Hay más diversidad en lagunas de maduración porque son más limpias. Una laguna bien oxigenada
tiene mayor concentración de clorofila. Es un indicador de cómo afecta la cantidad de carga en la
laguna. Las algas son importantes para el funcionamiento de una laguna facultativa porque proveen
el oxigeno a través de la fotosintesis.
Existen algas que usan sustrato orgánico pasando a un metabolismo heterotrófico.

Tiempo de retención hidráulico

t = V/Q

Tiempo promedio que el agua pasa en el sistema, relación entre volumen de la laguna y caudal.
Las lagunas no operan nunca a su t teórico, el caudal no es constante y el barro acumulado
disminuye el volumen de tratamiento.

La eficiencia de las lagunas no es óptima, hay zonas muertas y corto circuitos. Los corto circuitos
disminuyen la eficiencia del tratamiento.

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Efecto del viento (no es tan importante)

Puede crear patrones de flujo favorables a la producción de corto circuitos. La entrada debe
orientarse en forma perpendicular a los vientos predominantes.

Estudios con Trazadores (Perfil de la descarga)

Trazador: sustancia con colorante agregada a la entrada para seguir el movimiento del flujo a lo largo
de la laguna (ej rodamina WT). También se puede usar en combinación con la cinetica de
degradacion para el cálculo de eficiencia. Recolectar hasta recuperar todo el trazador (o sea que el
área bajo la curva=1, puede llevar hasta 5 HRT).

La concentración de sulfuro sube con la materia orgánica, se produce más metabolismo anaeróbico.
El sulfuro suele estar en el fondo de la laguna y al subir inhibe la actividad de las algas (color rosado
en algunas lagunas).

Eliminación de Patógenos de los Efluentes

En tratamiento de efluentes municipales, las lagunas de estabilización (facultativas) tienen a
continuación otra laguna que se encarga de eliminación de patógenos. En las de estabilización bajan
pero no lo suficiente, se usan lagunas de maduración en serie. La laguna anaeróbica es profunda, la
facultativa menos y las de maduración las menos profundas.

La profundidad es <1m y el tiempo de retención 5-20 días.

- Alta penetración de la radiación solar (UV)
- Alto pH (actividad fotosintética)
- Alta concentración de oxígeno disuelto: favorece comunidades aeróbicas, más eficientes en
la eliminación de coliformes. Aumenta la remoción por mecanismos de foto oxidación.

Lagunas de Estabilización (WSP)

Anaeróbica (sedimentación) => Facultativa (degradación de materia orgánica) => Maduración
(elimina patógenos)

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Ventajas:
- Puede ser construida con materiales disponibles localmente
- No requiere energía externa
- Bajo costo operativo
- Alta reduccion de patogenos
Desventajas:
- Requiere grandes superficies alejadas de áreas residenciales
- Puede promover cría de insectos
- Debe garantizarse el dragado y disposición de barro (cada 1-2 años)
- Baja remoción de nutrientes
- Lagunas anaeróbicas pueden producir olor si están mal diseñadas
- Algas en el efluente tratado

Humedales artificiales​: el de flujo superficial es el más parecido al natural. En sub superficiales el

efluente es subsuperficial, hay de flujo horizontal y de flujo vertical (el agua cae y se recoge abajo). El
sistema de lemna es superficial porque el tratamiento se da en las raíces de la planta flotante.

Es atractivo estéticamente como tratamiento pero menos eficiente que lagunas.

Lagunas aeróbicas
Que pasa si no me alcanza el área que tengo en un sistema de lagunas?
Puedo agregar aireadores en lagunas más profundas.
=> Mantienen alta concentración de oxígeno disuelto en toda la columna de agua.
El oxígeno en lagunas aeróbicas se introduce con aireación mecánica. El sólido depositado resta
volumen a la laguna.
Ya no dependo de las algas porque tengo aireadores. Dependiendo la potencia del equipo mezclo
gases y materiales solubles sino también material particulado (mayor potencia para esto).
Es importante que la materia orgánica se oxide y no fermente para disminuir la DBO. Puedo estimar
cuánto oxígeno tengo que agregar en función de la DBO.

LAGUNAS ANAERÓBICAS
Si las lagunas son grandes o tienen cargas muy altas deberían empezar con lagunas anaeróbicas que
bajen el contenido de sólidos suspendidos. Al producirse biogás se mezcla y se produce más
reacción.
La oxidación de acético por ejemplo libera 207 calorías. Requiere una cantidad de oxígeno
importante, produce una cantidad de barro y libera energía. Es una redox donde el aceptor final es el

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oxígeno. Si no tengo O2 ni otro aceptor de electrones, puede darse una reacción donde se produce
biogás, y se liberan sólo 16 calorías por mol. Si pongo las dos reacciones juntas puedo calcular la
energía de fermentación, que da menos calorías, entonces, a dónde se fue el resto de la energía? A
la oxidación del metano.

Lagunas Anaeróbicas
Son mucho más profundas y es conveniente que tengan menos superficie para que no entre O2 y no
salga metano.
Hasta el 30% de la DBO que ingresa puede liberarse como biogás (CH4, CO2)
Si la carga es muy alta da olores porque predominan bacterias reductoras de sulfatos, la acidificación
inhibe la producción de metano. Si la carga es muy baja hay riesgo de pérdida de anaerobiosis.
- La eficiencia debería mejorar con la temperatura
- Se usa la temperatura ambiente del mes más frío como temperatura de diseño (la
temperatura del agua es 2-3C mayor)
- Mínimo tiempo de retención: 1 día.

En presencia de otros grupos de aceptores de electrones habrá presencia de otros grupos

bacterianos.
- Reducción de sulfato. Bacterias reductoras de sulfato (SRB): bacterias que en condiciones
anaeróbicas utilizan el sulfato como aceptor de electrones. Ej. desulfovibrio. H2S es más
soluble que el metano (menor reducción de DQO), es tóxico para los microorganismos
metanogénicos (MM) y para las bacterias acetogénicas. H2S tiene mal olor (olores en
lagunas anaeróbicas), la proporción de H2S depende del pH.

Resumen de lagunas anaeróbicas:

- Alta carga orgánica => sin oxigeno disuelto
- Profundidad: 1-5 m, depende del suelo (generalmente 2-4 m)
- Sin algas (o muy pocas) => el área superficial no es importante

Deberían incorporarse mezclas a las lagunas para mejorar el proceso, por ejemplo usando la misma
turbulencia que da el agregado de efluente a la laguna. Debe mezclarse para optimizar las
reacciones.
Acumulacion de lodos

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Las lagunas anaeróbicas deben ser dragadas cuando tienen ⅓ de volumen ocupado por lodos. Estos
lodos corresponden a la porción no biodegradable de sólidos sedimentados que entran al sistema o
son producidos por actividad biológica.

BARROS ACTIVADOS
Análisis de una laguna aireada
Con una concentración de O2 suficiente va a haber bacterias oxidando compuestos orgánicos.
En muchos casos este sistema no es práctico porque se necesitan espacios muy grandes, los tiempos
de crecimientos de las bacterias suelen ser muy largos.
Diversidad de microorganismos => Tiempo de retención
Cantidad de microorganismos => F/M
- Tiempo de retención celular (Θ) = Tiempo de retención hidráulico (t)

SBR= Sequencing batch reactor

Proceso continuo con retención de biomasa

El proceso de barros activados es el sistema más utilizado para el tratamiento de efluentes cloacales
e industriales. Puede ser discontinuo o continuo. Se separan los sólidos de líquidos que pasan más
tiempo en el sistema. Los líquidos arriba quedan transparentes con materia orgánica oxidada, abajo
queda el barro con materia orgánica.
La materia orgánica es oxidada incluyendo la nitrogenada en mucho menos tiempo que en lagunas
aireadas. Se recircula varias veces aireando el efluente y luego se sedimenta.
En un sistema continua se agrega un segundo tanque donde la biomasa crece como agregado.

Tiempo de retención hidráulico = Volumen de tanque/Caudal de ingreso de efluente

Tiempo de retención de sólidos o tiempo medio de retención celular o edad de barros (SRT): es el
tiempo promedio que el barro pasa en el tratamiento.

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La biomasa forma flocs biológicos. Durante el proceso la biomasa que crece pero que no flocula se
bombea hacia afuera. Si el barro no flocula el proceso colapsa.
- Composición del floc: Fibras orgánicas, partículas inorgánicas, sustancias poliméricas
extracelulares, microcolonias, crecimiento epifítico, bacterias filamentosas, rotíferos,
vorticella, euplotes.

Sustancias poliméricas extracelulares (EPS): forman los agregados de bacterias, secretados por estas
Las comunidades microbianas en barros activados se encuentran asociadas en estructuras
floculentas, que permiten su separación y retención.

Algunas perturbaciones físicas y químicas pueden inducir desfloculacion

Falta de Agregación por exceso de bacterias filamentosas

Teorías para explicar el exceso de crecimiento de bacterias filamentosas

1. Selección por difusión
2. Teoría de selección cinética (filamentosas estrategas K menor tasa de crecimiento)
3. Teoría de selección metabólica

Bulking viscoso (no filamentoso) => Crecimiento desbalanceado (deficiencia de nutrientes)

F/M = Food/Microorg. = Kg DBO/Sólidos suspendidos volátiles

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TRATAMIENTO DE EFLUENTES
Eliminacion de Nitrogeno y fosforo de los efluentes
Por que es necesario eliminar el nitrógeno?
- Eutrofización
- Reducción de oxígeno
- Toxicidad
- Contaminacion de acuiferos
- Interferencia en la desinfección (reacciona con el cloro dando cloramina)
- Colonización y corrosión

Perdida de nitrógeno en lagunas

- La volatilización de amonio a alto pH es uno de los principales mecanismos
- Parte del nitrógeno es asimilado por la biomasa
- Los procesos de nitrificación-desnitrificación, también pueden ser importantes, dependen de
T, pH, OD
Los métodos biológicos se basan en el ciclo microbiano del nitrógeno:

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La remoción de N de efluentes combina nitrificación aeróbica y desnitrificación anóxica

Clasificación filogenética de bacterias nitrificantes (autótrofas, usan CO2 como fuente de C)

Bacterias oxidantes de amonio (AOB)
- Nitrosomas el genero más importante de AOB. Crecimiento lento.
- PTEs difieren sustancialmente en riqueza de especies. Factores que afectan la riqueza aún no
se comprenden bien.

Bacterias oxidantes de nitrito (NOB)

Nitrobacter el genero más importante de NOB
Nitrospira son los NOB más importantes en WWTPs, pueden utilizar piruvato.
- Nitrospira son estrategas K es oxidante de nitrito.
- Nitrobacter estrategas R. Cadena respiratoria mucho más corta. Crecen muy lento.

Factores que afectan la nitrificación:

- Oxígeno disuelto (2mg/L)
- Tiempo de retención celular
- Temperatura (cuanto más alta menos tiempo de retención, necesita menos días)
- pH (7.0-8.5). El proceso de nitrificación genera protones.
Si tengo un reactor donde agrego sólo N amoniacal (orgánico) y nada de C, el crecimiento se produce
porque cada grupo de bacterias producen sustrato para otras.
Cómo se logra la nitrificación? Fuente nitrogenada y oxígeno en principio.

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Las nitrificantes son de crecimiento lento. Aumenta la tasa de crecimiento con la concentración de
amonio porque es su fuente de energía

Desnitrificacion
El ciclo se cierra con desnitrificación. La mayoría de las bacterias desnitrificantes son proteobacterias
facultativas, capaces de reducir aceptores de electrones alternativos al oxígeno. ​El nitrato llega a N2
gaseoso que se pierde como un gas por bacterias desnitrificantes autotrofas. Estas en ausencia de
O2 pueden usar el nitrato como aceptor de electrones.

Eliminación de N vía nitrificación-desnitrificación

Los gases generados levantarian el barro complicando su eliminación. Debe incorporarse un tanque
anóxico al proceso con recirculación interna. En el efluente crudo llega amonio al primer tanque
anóxico que tiene amonio, al siguiente aeróbico pasa nitrato. Debo agregar fuente de C en el
siguiente tanque (metanol) para que termine la reacción.

A más de 25C la tasa de crecimiento específico de AOB es mayor que la de NOB

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SHARON (Single reactor for High Ammonia Removal Over Nitrite)

- Nitrificación aeróbica
- Desnitrificación heterotrófica anóxica

ANAMMOX (Oxidación anaerobia de amonio)

Generan un atajo en el ciclo del nitrógeno. Genera la posibilidad de desnitrificar sin oxígeno. Sharon
pasa amonio a nitrito, si los combino hago el ciclo completo. ​Se usa para casos de muy alta
concentracion de nitrogeno, no otros casos. Cuando se trata de efluentes cargados, si se tiene una
corriente muy concentrada es conveniente tratarla por separado y no incorporarla a lo que ya fue
tratado.

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CANON (Completely Autotrophic Nitrogen removal Over Nitrite)

Hay un sólo reactor que hace todo en una sola etapa en granulos incluyendo annamox. Se necesitan
altos tiempos de retención porque annamox son de crecimiento muy lento.

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Remoción de fósforo en lagunas

- P particulado, P orgánico soluble, P inorgánico (ortofosfato)
- Sedimentación como P orgánico con la biomasa (especialmente por las algas, que incorporan
grandes cantidades de ortofosfato)
- La cantidad depende de la especie y las condiciones de crecimiento
- A alto pH>8.5 y condiciones aeróbicas precipita como hidroxiapatita (depende del tipo y
concentración de cationes)
- Puede haber solubilización de fósforo de los sedimentos anaeróbicos (problema para
industrias)

Eliminación biológica de fósforo

Si se alternan ciclos anaerobicos y aerobicos, se vio que hay bacterias que pueden acumular el
fósforo como gránulos de polifosfatos y polímeros de reserva como PHB/PHA. Depende de enzimas
poliP kinasa que es capaz de producir los gránulos de poliP en condiciones de rica energía, y luego
en condiciones pobres en energía ese poliP puede ser usado largando P al ambiente. Entonces se
alternan ciclos de alimentación y hambreado.

Eliminación del fósforo: EBPR (Enhances Biological Phosphorus Removal)

Entra acetato porque el verdadero sustrato de estas bacterias son los ácidos grasos volátiles VFA que
se forman por fermentación del efluente en condiciones anaeróbicas. Con el acetato generan
polímeros de reserva, la energía la sacan de la hidrólisis de los gránulos de polifosfato. En la etapa
anaeróbica hay consumo de VFA, producción de PHA a expensas de poliP. Cuando termina la etapa

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anaeróbica hay más P que inicialmente. En la etapa aeróbica usan los polímeros de reserva como
fuente de energía, formando gránulos de poliP.
EBPR se trata de incluir un reactor anaeróbico antes del aerobico. La relación entre DQO y P debe ser
40:1.

Si hay N en el medio me va a formar nitrato y no va a funcionar como anaeróbico, va a ser parte

anóxico. El N se elimina por desnitrificación.

Organismos que acumulan polifosfato (PAO)

- Rhodocyclus
- Actinobacteria: consumen ácido oleico anaeróbicamente
- Tetrasphaera: consumen glucosa anaeróbicamente.

Pathway de glucógeno (GAO)

Propionato (VFA) es consumido anaeróbicamente y convertido en propionil-CoA, usando la hidrólisis
de glucógeno como única fuente de energía.
Glucolisis (de glucógeno a piruvato) genera energía en forma de ATP (EM)

GAO predomina sobre PAO cuando…

1. La temperatura es elevada
2. El pH es bajo
3. El SRT es muy largo
4. Ácido acético sólo es alimentado a la planta ?
5. Glucosa es alimentada a la planta
6. La zona de retención de zonas no aireadas es muy larga

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TRATAMIENTO DE EFLUENTES - PROCESOS ANAERÓBICOS

Redox donde el aceptor final de electrones es el oxígeno. Consume menos energía y produce menos
barro, pero el tratamiento no es tan eficiente.

Digestión Anaerobia
hidrólisis-acidogénesis/fermentación-acetogénesis-metanogénesis
Vía unidireccional (aunque algunas reacciones son reversibles). En principio la DQO se convierte,
pero no se elimina. Pero como el CH4 es un gas insoluble en agua hay reducción de DQO.
1. Hidrólisis: hidrólisis de sustratos poliméricos, sucede en superficie. Cuando hay muchos
sólidos suspendidos están menos disponibles. ​Muy sensible a la temperatura. En barros, es
el paso limitante por falta de accesibilidad al sustrato.
2. Acidogénesis: Los productos de la hidrólisis ingresan a las células donde son fermentados en
acidogenesis. Variedad de productos: VFA, etanol, NH3, etc. Cuando se acumula H en el
reactor se forman productos más reducidos (propionato y butirato, lactato y alcoholes).
3. Acetogénesis. Asociación sintrófica: fermentación secundaria de la acidogénesis entre dos
microorganismos. A partir de productos como VFA da acetato por beta oxidación.
Acetogénesis: reducción de CO2 a acetato.
4. Metanogénesis: l​os productos finales de la asociación sintrófica son CO2 y CH4. Funciona
dentro de ciertas concentraciones de hidrógeno. Grupo de ARQUEAS (géneros
Methanosaeta y Methanosarcina) anaerobias estrictas que reducen CO2 usando H2 como
aceptor de electrones (Metanogénesis hidrogenotrófica) o descarboxilan acetato
(Metanogénesis acetilclástica, la mayoría del metano viene de esta vía).

Metanosarcina (consume varios sustratos): mayor velocidad de crecimiento, baja afinidad por
sustrato.
Metanosaeta (consume acetato): menor velocidad y muy alta afinidad. A baja concentración de
sustrato le gana en velocidad de crecimiento a Metanosarcina.

Reactores anaerobicos
Digestión de barro: ​Alto HRT (<10d) = SRT
No trata efluentes, trata el barro. No se retiene la biomasa a diferencia de barros activados. Hay un
poco de mezcla por la producción de biogás, tiene alto tiempo de retención igual al tiempo de
retención de sólidos. Poca capacidad.

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Sistemas convencionales
- Sin mecanismo de retencion de solidos
- Largos tiempos de retención
- Baja carga volumétrica (kg DQO/m3 reactor)

Tratamiento de efluentes industriales

- Muy diferente del barro excedente de plantas de barros activados, estiércol, RSU, etc.
- Usualmente producido en grandes volúmenes, bajo contenido de sólidos suspendidos,
DBO/DQO principalmente debida a compuestos orgánicos solubles, composición química
variada, etc.
- En general fácilmente biodegradable (con excepción de algunos efluentes
farmaceuticos/quimicos)

Reactores anaeróbicos con retención de biomasa para tratamiento de efluentes

- Retención de biomasa activa: determina la capacidad del sistema (cultivar biomasa que
sedimenta bien o inmovilizada)
- Contacto entre la biomasa y el efluente: sólo es activa la biomasa que esta en contacto con
el sustrato
- Ausencia de limitaciones de transporte:​ la cinetica de degradacion es de gran importancia,
escape de productos, tamaño del biofilm
- Aclimatación​ de la biomasa: adaptadas a las características específicas del efluente
- Condiciones ambientales favorables: especialmente ajustadas a los pasos limitantes. No
significa homogéneas (micronichos). Baja concentración de sustratos y metabolitos al
interior del gránulo.

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Mezcla muy turbulenta: mala separación sólido-líquido, operación frágil. Debe haber mezcla porque
no hay aireación. No es muy buen reactor. Sirve para líquidos con muchos sólidos suspendidos y una
carga no demasiado alta, no se usa mucho.

Filtro anaeróbico (AF), ej Upflow Fixed-Film: Mos. adheridos en biofilms a lechos fijos.
- Adhesión a material fijo en el reactor (grava, sintético, etc)
- Sedimentacion de particulas de barro en los intersticios del relleno
- Facilidad para start-up
- Taponamiento
- Inestabilidad del material

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El efluente entra desde abajo a través de una cama de barro, la mezcla se da por el ingreso de
efluente, y por las burbujas generadas. Hay un separador de tres fases en la superficie, funciona
como un sedimentador.
La velocidad de ascenso en UASB (m/h) es 0.5-0.7 en promedio, si fuera muy alta la velocidad
levanto el barro.

Lecho Fluidizado (FB)

Reactores anaeróbicos: Expanded Granular Sludge Bed (EGSB)

Es como dos UASB encimados.
Velocidad de ascenso en reactores anaeróbicos
La formación de gránulos depende siempre de la combinación de un compartimento de
sedimentación adecuado, con un régimen hidráulico que imponga una presión de selección (alta
velocidad de ascensión y bajo tiempo de retención hidráulico)
- UASB: 0.5-1.0 m/h
- EGSB: 6-10 m/h

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Requiere barro granular de otra planta para arrancar porque la velocidad de entrada del efluente es
muy alta. Tiempos de retención muy bajos. Mejor que UASB, mayor capacidad relativa.

Características del barro granular

- Agregados de células microbianas que forman una unidad metanogénica completa
- Contienen todos los grupos tróficos necesarios para el proceso completo desde la hidrólisis
de los polímeros hasta la formación de CH4
- Densos, sedimentan muy rápidamente

Estructura de los gránulos: Microscopía electrónica de barrido

- Gránulo de zona predominantemente metanogénica: estructura densa con superficie suave
y regular.
- Gránulo de zona predominantemente acidogenica: contiene fisuras con morfología
superficial irregular causada por actividades acidogenicas

Características físicas
- Biofilms densos y compactos
- Sedimentan muy rápidamente
- Mecánicamente fuertes

Características microbiológicas
- Comunidad microbiana balanceada
- Proximidad entre organismos sintropicos
- Alta actividad metanogénica
- Protección frente a toxicidad

Las gránulos son ecosistemas balanceados, controlados cineticamente

- Las bacterias fermentativas o acidogénicas están localizadas en el borde exterior del gránulo
mientras que los sintropicos y metanogénicos están en el centro
- Los acetogénicos sintropicos deben estar localizados a 1-2 um de los metanogénicos para
facilitar la transferencia de hidrógeno interespecie.

Microbiología de la granulación
- Methanosarcina crece sobre acetato 3-6 veces más rápido que Methanosaeta, pero esta es
el metanógeno dominante en barro granular (hasta 90% de las células metanogénicas)
- Methanosaeta concilli y M. Soehgennii son organismos en forma de bacilos que tienden a
crecer como filamentos
- La presencia de filamentos de Methanosaeta proveen un núcleo para la iniciación de los
gránulos
- Methanosarcina tienen inferiores propiedades de adherencia
Probablemente el determinante genético más importante en la formación del gránulo es el resultado
de la competencia por acetato entre methanosaeta y methanosarcina.
=> Metanosaeta se ve en sistemas estables

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Metanógenos acetilclasticos
Methanosaeta es el metanógeno dominante en barro granular porque hay baja concentración de
sustrato. Para arrancar un sistema debo partir de baja concentración de sustrato.
Cuando la concentración de sustrato en la masa líquida es baja, en el interior del gránulo es
prácticamente cero.

Mecanismo de granulación
1. Presencia de partículas de nucleación (organicas, inorganicas, agregados microbianos)
2. Fuerzas atractivas (físicas, químicas y biológicas) que mantienen estables los contactos
multicelulares.
3. Maduración de los agregados por las siguientes fuerzas:
- Producción de polímeros extracelulares (EPS): son producidos por bacterias acidogenicas en
las capas exteriores son vitales para la formación del gránulo ya que proveen al mismo de
una capa externa hidrofílica alrededor de una capa interna hidrofóbica de bacterias
sintróficas y metanógenos. Esta capa hidrofílica ayuda a cementar el gránulo y prevenir la
adhesión de gas (que lo haría flotar). ​Se ha reportado una correlación entre la presencia de
carbohidratos en el efluente y el mantenimiento de un barro granular estable. Estos
sustratos de alta energía estimulan la formación de EPS. Participan como agentes
protectores contra tóxicos que puedan estar presentes en efluentes industriales. También
actúan como almacenamiento de material para tiempos de hambreado.
- Cambios metabólicos y competencia genérica inducidas por el ambiente, que facilita la
interacción célula-célula, y resulta en una estructura microbiana altamente organizada
4. Estructura tridimensional queda determinada por las fuerzas de corte (shear forces). La
forma y tamaño de los gránulos depende de fuerzas intrínsecas (atracción entre
microorganismos) y extrínsecas (tensión de corte). La materia dispersa (incl. bacterias)
aumenta su retención cuando las velocidades superficiales de líquido y gas aumentan,
aplicando velocidades de dilución mayores que la velocidad de crecimiento.

La granulación es un proceso natural

- Sustrato soluble
- Reactores operando con flujo ascendente
- Tiempo de retención hidráulico < tiempo de duplicación microbiano

Ventajas del tratamiento anaeróbico

- Menor producción de barro excedente
- Menor requerimiento de espacio (lechos expandidos)
- Alta tasa de carga, reactores más chicos
- Menor consumo de energía
- Producción de 13.5 MJ CH4/kg DQO, dando 1.5kWh de electricidad
- Rápida puesta en marcha (usando barro granular como inóculo)
- Puede permanecer sin alimentación por largos periodos
- El barro excedente tiene valor comercial
Limitaciones
- A pesar de convertir la mayor parte de la DQO a CH4, el tratamiento es parcial, por lo cual
requiere un post-tratamiento
- El CH4 producido se disuelve parcialmente en el efluente y escapa a la atmósfera

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- El CH4 a menudo no es utilizado para generar energía

- Muy poca experiencia en procesos a baja temperatura
- Gases reducidos, como H2S pueden causar malos olores
- Concentraciones altas de SO4 pueden limitar la aplicabilidad del tratamiento anaeróbico

Reducción de sulfato - Bacterias reductoras de sulfato (SRB), compiten con las metanogénicas
- H2S es más soluble que el metano (menor reducción de DQO). Tiene mal olor y es corrosivo.
Parte del sulfuro pasa al efluente tratado.
- H2S es tóxico para los microorganismos metanogénicos (MM), las bacterias acetogénicas y
las propias SRB
- SRB compiten por la materia orgánica con MM (menor producción de metano y menor
calidad del biogás)
En presencia de otros aceptores de electrones, habrá actividad de otros grupos bacterianos
Importancia de la dinámica y la redundancia en la comunidad:
- La menor desigualdad dentro de la comunidad esta asociada a la estabilidad funcional
- La dinámica de la comunidad ayuda a mantener un rendimiento eficiente

Tratamiento anaeróbico de efluentes municipales

El reactor UASB condensa cuatro unidades funcionales:
- Retencion de solidos suspendidos (no biodegradables)
- Clarificación del efluente tratado
- Remoción de compuestos orgánicos biodegradables
- Estabilización (digestión) del barro
SRT debe ser 3 veces el tiempo de duplicacion del mo. que crece más lento. Depende de la T.

MEMBRANAS - BIOFILMS
Reactor biológico con membranas MBR
El reactor biológico y la filtración por membrana constituyen un sistema unificado para el
tratamiento secundario de efluentes. Separo el líquido tratado del barro por ultrafiltración.

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La acumulacion de material en la superficie de la membrana lleva a la reducción del flujo de agua a

través de la membrana a una dada presión transmembrana (TMP), reduciendo la permeabilidad
(flujo/TMP). Ese fenómeno es denominado ​fouling.

Ventajas de MBR
- Efluente de muy alta calidad: la membrana retiene la materia particulada. El efluente tiene
un muy bajo contenido de sólidos suspendidos (<1 mg/L), turbidez (<0.5 NTU), BOD y la
mayoria de patogenos (5-6 log bacteria, 2-3 log viruses; Cryptosporidium y Giardia.
- Alta capacidad de retención de biomasa: se retienen microorganismos de crecimiento lento
- La separación de la biomasa es independiente de la sedimentación: es posible operar con
muy alta concentración de sólidos (10-15 g/L, cf. 3 g/L es típico de barros activados).
Independiente de bulking.
- Reactores más pequeños: alto MLSS permite operar con alto SRT en menor volumen de
reactor.

Microbiología de MBR
- En MBR los sólidos crecen como agregados como en otras variantes de barros activados. La
estequiometría y la cinética del proceso convencional y MBR son similares.
- La tasa de crecimiento de microorganismos en MBRs esta en el mismo rango que en el
proceso convencional. Por ejemplo, se requiere el mismo SRT para lograr nitrificación.
- Se utiliza el mismo tipo de equipamiento para transferencia de oxígeno, mezcla, bombeo,
etc.

Características de la biomasa
- Presencia de flocs pequeños y células individuales
- El tamaño del floc depende del SRT y la configuración del MBR
- Bacterias filamentosas favorecidas por bajo F/M
- Producción de menos barro que en procesos convencionales por operar a muy alto SRT

Tratamientos en biofilm
1. La retención de los mos. se basa en la adhesión a la superficie del soporte
2. El efluente conteniendo los contaminantes entra en contacto con el biofilm. Las condiciones
locales de mezcla y la turbulencia van a determinar el transporte de masa efectivo desde la
masa de agua al biofilm.
3. El biofilm activo debe contener suficiente biomasa activa, producto del balance entre
crecimiento y desprendimiento de sólidos.
4. Si fuera necesario se puede adicionar externamente dadores de electrones, aceptores de
electrones, nutrientes, alcalinidad (ej aireación para sistemas aeróbicos)

La biomasa presente debe ser adecuada para eliminar el DBO en el corto tiempo de contacto.
Requiere de eficiente flujo y contacto para óptima performance. Limitada por fenómenos de
transporte.

Lecho percolador: la biomasa esta adherida a un soporte. El efluente se agrega desde arriba hacia un
lecho percolador. La oxigenación se da por diferencias de temperatura entre el agua y el aire. El
material de relleno puede variar y permite la adhesión de los microorganismos.

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El lecho fijo no se usa mucho.

Factores que afectan el tratamiento

1. Composición y tratabilidad del efluente (floculación, adsorción, además de oxidación y
sintesis) (roughing filters)
2. Altura: granito 2-2.5m; sintetico 5-8m
3. Hidráulica: recirculación
4. Ventilación: proceso aeróbico

Limitado por el transporte de masa: la competencia microbiana no depende sólo de la disponibilidad

de sustratos en la fase líquida, sino de la localización de los distintos grupos de bacterias en el
biofilm.

Cuál es el tiempo de retención celular? Sólo se puede estimar

RBC = rotating biological contactor

Tengo un alto SRT

Sistemas híbridos: MBBR (Moving Bed Biofilm Reactor)

Soportes en biofilm suspendidos
1. Alta actividad biológica gracias al control del espesor del biofilm (shear forces)
2. Capacidad de retener biomasa independientemente del SRT
3. Difusión aceptable por las condiciones turbulentas del reactor
Me permite tener un reactor más chico con el mismo SRT.
Dónde haya un sistema con microorganismos de crecimiento lento esto resulta útil. Ej.: sistemas
ANNAMOX que toma casi un año arrancar porque tiene barro granular. Se puede comprar el relleno
preinoculado y acelerar el proceso.

Si los problemas de crecimiento aparecen cuando hay problemas de difusión al centro del floc, la
tasa de consumo de sustrato baja, uno puede inducir un sistema donde el floc sea muy denso
=> Barro granular

FAGOS
Papel en el funcionamiento de los ecosistemas:
- Redes tróficas
- Ciclos biogeoquimicos
- Biodiversidad y evolución (mecanismos de transferencia de genes)

- Pueden infectar y matar a los microorganismos (ciclos líticos)

- Modificar su expresión génica
- Transferencia de genes (ciclos lisogénicos)
El impacto de los fagos sobre las poblaciones microbianas
- Abundancia, diversidad y ubicuidad: los fagos son muy abundantes y diversos.

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- Estilo de vida: efectos desfavorables si actúan como parásitos o matando bacterias.

Interacción favorable o desfavorable al regular la expresión génica.
- Evolución. Innovación genética. Fagos traficantes de genes.

Técnicas de análisis
- EFM: Epifluorescence microscopy. Tinción de DNA con SYBR green. Recuento.
- TEM: microscopía electrónica de transmisión
- FCM: citometría de flujo. Marco poblaciones.
En aguas superficiales hay más virus que bacterias. En oceanos tambien. En biomasa siempre
superan los procariotas. En número superan los fagos. Más abundantes en las costas por
disponibilidad de nutrientes y luz (zona fótica). La abundancia disminuye con la profundidad y
aumenta en el sedimento superficial. Mayor en agua dulce que en ríos.
Abundantes en zonas subsuperficiales del sedimento marino. Superan al número de bacterias. En
sedimentos antiguos podrían representar una notable cantidad de C orgánico enterrado. Las
comunidades virales activas tendrian impacto en el C biodisponible en profundidades. Los ciclos
líticos aumentan el C disuelto. La abundancia de fagos no es indicativa de su infectividad. Tienen alta
densidad en regiones subtropicales y tropicales.
No hay un marcador universal para estudiarlos => Metagenómica (secuenciación completa de un
ambiente). Se pueden estudiar por fingerprint pero el resultado sólo servira para los que son DNAdc.

Fagos​: ss o dsDNA o RNA. Rodeados por envoltura proteica o lipídica. Con o sin cola.
Capside < 250nm. Caudovirales más abundantes.
- Ciclo lítico: estrategas R, amplia variedad de hospedadores. Basan su supervivencia en la
reproducción. La lisis es afectada por radiación solar, anoxia y temperatura.
- Ciclo lisogénico: estrategas K. Largo periodo de generación y baja tasa reproductiva.

=> Microbial loop: fracción importante de la MO (materia orgánica disuelta) ingresa al sistema a
través del consumo por bacterias que son predadas por flagelados y ciliados.
Microbial loop describe las redes tróficas microbianas. Los fagos en el bucle viral disminuyen la
eficiencia de transferencia de C a niveles troficos superiores. Aumentan la materia orgánica disuelta
y particulada a través de la lisis y afectan el ciclo global del C y nutrientes.
Hay un incremento de microorganismos heterotrofos y liberacion de CO2 (se pierde C del medio). Se
incrementan los procesos metabolicos en ecosistemas de agua dulce y ambientes marinos.

Hipotesis Kill the Winner: ​relación predador presa entre fago y hospedador, el incremento del
hospedador incrementa el número de fagos.
Hay poblaciones bacterianas sometidas a predacion, los predadores consumen un determinado
rango de tamaño de hospedador y la poblacion se enriquece en determinado tamaño de bacterias.
(Presión de predación ejercida por protistas)
Cuando un ciliado consume bacterias, sólo consume las de determinado tamaño, mientras que los
fagos tienen cada uno un rango. Los fagos son selectivos y consumen determinados grupos de
bacterias haciendo que cambie la diversidad. En el caso de protistas sólo hay cambio de tamaño de
las poblaciones.
Efecto de los fagos sobre los ciclos biogeoquímicos
Matan bacterias-arqueas-cianobacterias-protistas-hongos
Efecto directo e indirecto sobre C, N, P, etc. sobre los cuales se basa la dinámica de las redes tróficas.

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Características de la lisogenia
- > cuando menor es la abundancia de hospedadores y productividad en el ambiente
- Inversamente proporcional a T
- Permite ocultarse durante períodos desfavorables
- Protege de radiación UV y proteolisis
Ventajas para el hospedador
- Autoinmunidad contra fagos relacionados
- Supresión de actividades metabólicas innecesarias (profagos llevan reguladores
transcripcionales y proteínas represoras)
- Adquisición de genes

Relevancia de distintos mecanismos de resistencia en relación a la densidad y diversidad en el

ambiente
Hipótesis de la reina roja: a medida que los fagos desarrollan estrategias más eficientes para atacar,
los hospedadores desarrollan estrategias más eficientes para defenderse.
En ambientes de baja densidad y alta diversidad aumenta la importancia de resistencia externa
(ejemplo océanos) a nivel de cápside, etc. En baja diversidad y alta densidad de bacterias (ejemplo
biorreactores) aumenta la importancia de resistencia interna (CRISPR, equivalente a un sistema de
memoria de infecciones pasadas).
- Prevención de la adsorción
- Destrucción del material genético del fago
- Clustered regularly interspaced short palindromic repeats (CRISPRs)/Cas
- Bloqueo de infección del fago
- Pérdida de fago y hospedador por infección abortiva

RNAi en procariotas: CRISPR sistema memoria genética de infecciones pasadas

1. Entrada e integración de ácido nucleico foraneo
2. Procesamiento y formación de crRNA
3. Formación del complejo e interferencia

Conclusiones ECOLOGÍA VIRAL

- Son las entidades biológicas más abundantes en los océanos
- Controlan abundancia bacteriana e influencian los ciclos biogeoquímicos globales a través de
la liberación de materia orgánica disuelta y nutrientes
- Afectan la transferencia de DNA, manipulan la expresión génica y el metabolismo,
introducción de nuevo material genético, y la selección de resistencias
- Virus marinos son muy diversos y pueden llevar genes metabólicos auxiliares que codifican
funciones ecológicas esenciales. Parecen compartir un pool génico común, y las condiciones
locales y la composición de hospedadores seleccionan los virus dominantes.

FAGOS EN TRATAMIENTO DE EFLUENTES

- Participación de fagos en el control de la abundancia, actividad y composición de bacterias
en ecosistemas microbianos que prestan servicios ambientales.
- Uso de fagos líticos en biocontrol.

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Se sabe que en sistemas de lodos activados son muy abundantes pero no se sabe bien su función.

Correlación aparente entre picos de concentración de fagos en el reactor y el pico de la abundancia

relativa de la OTU.
Cambios en microdiversidad dentro de la población microbiana.

Biocontrol: Eliminación de bacterias filamentosas.

Interesa usar un fago lítico, estable, que sea específico, y pueda usarlo en una relación relativamente
baja. Pueden mejorar la sedimentación.

Capturar la energía química contenida en los efluentes

Con los tratamientos convencionales (aeróbico + digestión anaeróbico del barro) sólo se captura una
porción de la energía potencial incluida en el efluente
La fracción orgánica disuelta se convierte en el proceso aeróbico consumiendo energía.
Como resultado se consume más energía en el tratamiento que lo que se gana en la digestión

BIOSENSORES
Instrumentos analíticos que transforman procesos biológicos en señales eléctricas u ópticas y
permiten su cuantificación.
- Utilizan la especificidad de los procesos biológicos
- Ventajas: reutilización, menor manipulación de la muestra, menor tiempo de ensayo,
repetitividad, reproducibilidad

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