TINCION DE GRAM

La tinción de gram es una técnica lo que permite identificar distintos tipos de bacterias, según
se coloree su superficie una vez tomado para su estudio.

LIMITACIONES DE LA TINCIÓN DE GRAM

Existen bacterias que dan respuestas a la tinción de Gram

que no se corresponde con la estructura real de su pared
celular. Por ejemplo, existen bacterias con una estructura de
pared celular Gram positiva pero con una capa delgada de
peptidoglicano que dan negativo en la tinción de Gram.
Incluso hay bacterias con una sola membrana y sin
peptidoglicano (mycoplasmas) que también dan negativo en
la tinción de Gram aunque están estructuralmente más
relacionadas con las bacterias Gram positivas.

PROCEDIMIENTO

1. Recoger muestras para ubicarlas en el microscopio.

2. Hacer el extendido con un palillo de madera.
3. Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.
4. Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces
aproximadamente).
5. Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un minuto.
6. Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra
7. Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
8. Agregar alcohol acetona y esperar entre 5 y 30 segundos según la concentración del reactivo
(parte crítica de la coloración). (las gram negativas se decoloran, las gram positivas no)
9. Enjuagar con agua.
10. Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar un minuto. Este tinte
dejará de color rosado-rojizo las bacterias Gram negativas.
11. Lavar levemente con agua.

Las bacterias pueden dividirse en dos grupos:

- Gram positivas

Se conoce como bacterias Gram Positivas al grupo de bacterias que no posee una
membrana externa capaz de proteger el citoplasma bacteriano, que tienen una gruesa capa
de peptidoglicano y que presentan ácidos teicoicos en su superficie. Entre otras cosas, se
distinguen especialmente por teñirse de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram
aplicada en bacteriología para analizar muestras de laboratorio y es justamente esto último
lo que explica su nombre de “Gram positivas”, aunque cabe mencionar que la
acepción grampositivas también es correcta.

Las bacterias Gram positivas conforman uno de los principales grupos de bacterias y,
cuando se consideran como taxón, también se emplea el nombre de Posibacteria, todas las
bacterias restantes son consideradas como Gram negativas, las cuales además presentan
una mayor resistencia a los antisépticos. Una bacteria Gram positiva posee una pared
 celular gruesa, formada principalmente por peptidoglicano que rodea la membrana
citoplásmica y que consta de varias capas.

- Gram negativas
Conjunto de bacterias que al ser teñidas por la técnica de tinción de Gram, desarrollada
por Hans Christian Gram en 1884, adquieren una coloración rosada que las diferencia
de las gram-positivas, que se colorean, por la misma técnica, en morado. La tinción de
Gram es uno de los procedimientos de tinción más útiles, porque divide las bacterias en
dos grandes grupos: gram-positivas y gram-negativas.

En la pared celular de ambos grupos existen claras diferencias estructurales que

sustentan esta clasificación. La pared celular de las gram-negativas es más compleja,
está formada por varias capas, de peptidoglicano y la membrana externa.

La pared de las gram-positivas está formada, fundamentalmente, por peptidoglicano y

es más ancha. La estructura y composición de la pared proporciona características
específicas como resistencia física, sensibilidad a antibióticos, a enzimas y a detergentes,
que son diferentes en ambos grupos de bacterias.
A continuación se presenta algunos ejemplos de bacterias.
1. Neisseria meningitidis.
2. Neisseria gonorrhoeae.
3. Escherichia Coli.
4. Salmonella tipi
5. Salmonella enteritidis.

DISCUSION DE RESULTADOS

En el presente laboratorio se extrae una muestra de saliva, en donde se realiza el

procedimiento y se encontró Streptococcus mutans y Lactobacillus acidophilus.
Donde la coloracion es azul se debe que la tincion positiva