Aislamiento de bacteriófagos y observación de placas líticas

I. INTRODUCCIÓN

Los bacteriófagos son virus que fueron descubiertos de forma independiente por los

microbiólogos Frederick W. Twort (1) en 1915 y Félix d’Hérelle (2) en 1917. Siendo esta la

última clase principal de virus en ser descubierta; este tipo de virus constituye un sistema

simple y de gran abundancia en la naturaleza. En esencia, los bacteriófagos se encuentran de

manera ubicua en el ambiente y en el lugar en que se encuentre su célula huésped. (Brooks y

col; 2013).

Los bacteriófagos son virus que infectan y se multiplican en la bacteria, llevando a la

destrucción la célula hospedera con la liberación de bacteriófagos que re-infectan otras

bacterias. Los bacteriófagos fueron descubiertos en las primeras décadas del siglo XX, pero

su uso clínico no se extendió en países occidentales sino hasta la década del 80, debido a

diferentes razones. A pesar de que se realizaron múltiples esfuerzos para generalizar su uso

como agentes terapéuticos en las décadas de 1920 y 1930 fueron cayendo en el olvido por la

ciencia de la época debido al descubrimiento de los antibióticos. (Brooks y col; 2013).

Los bacteriófagos (fagos) son parásitos intracelulares obligados que se multiplican al interior

de las bacterias, haciendo uso de algunas o todas sus maquinarias biosintéticas (p. ej., los

virus que infectan bacterias). Existen muchas similaridades entre los bacteriófagos y los virus

de células animales. Así, los bacteriófagos pueden ser visualizados como sistemas modelo de

los virus de células animales. Además, es necesario el conocimiento previo del ciclo de vida
del bacteriófago para entender uno de los mecanismos por los cuales los genes bacterianos

pueden transferirse de una bacteria a otra. (Brooks y col; 2013).

El objetivo de la práctica es demostrar la acción de las bacteriófagos frente a las bacterias de

las aguas residuales

II. MATERIAL Y METODOS

2.1materiales

•caldo nutritivo doble concentrado(25ml)

• cultivo de Escherichia coli joven (5ml)

• asa bacteriológica, cloroformo y alcohol yodado

• solución tratada de agua residual(20ml)

• incubadora

• vaso Erlenmeyer

2.2 Procedimiento

• se utiliza agua residual para la obtención de bacteriófagos luego se lleva el litro de agua
residual a centrifugación durante 30 minutos. Concluido este tiempo, el sobrenadante se
transfirió a un frasco plástico. El precipitado se resuspendió en 1 mL de extracto de carne y 1
mL de cloroformo y se almacenó en tubos de vidrio de 10 mL. Esta solución se homogenizó
utilizando un vórtex. Una vez finalizado este ciclo, se colectó el sobrenadante, el cual se
depositó en el frasco de plástico de 1.5 L que contenía el sobrenadante de la primera
centrifugación. El precipitado restante se resuspendió en 1 mL de extracto de carne y se
sometió nuevamente a centrifugación bajo las mismas condiciones antes mencionadas.
Finalmente se tomó de esta etapa el sobrenadante y se almacenó en el frasco de plástico
mencionado al inicio de este protocolo.
•en la fase de enriquecimiento de la muestra se procede a colocar en le vaso de Erlenmeyer
20ml de solución tratada de agua residual y 5ml de E. coli. Después se lleva a incubar a 37ºC
para que acumulen los fagos y luego se siembra en superficie , enseguida se lleva a la estufa
para secar la placa por 10 minutos.

III. RESULTADOS

Figura 01. Accion del fago en cultivo de E. coli

Figura 02. Placas líticas por la acción de bacteriófagos en E. coli

IV. DISCUSION
El hecho de que se presente una mayor cantidad de unidades formadoras de placa (UFP) en
una dilución especifica permite inferir que los bacteriófagos que se titularon según su efecto
lítico en esta dilución presentaron una mayor tasa de infección a las células bacterianas que
crecieron en este experimento y, por ende, una mayor tasa de replicación de bacteriófagos. El
aumento de las unidades formadoras de placa (UFP) en esta dilución se da debido a múltiples
factores como son el número de bacterias que crecieron, el cual debe haber sido abundante
para que estas bacterias hayan sido infectadas y, por consiguiente, haberse observado una
mayor cantidad de unidades formadoras de placa UFP. Otro de los factores que están
relacionados con este resultado es la fase logarítmica en la que se deben haber encontrado las
bacterias para ser infectadas por los bacteriófagos, ya que, si las bacterias se encuentran en el
inicio de la fase de latencia o finalización de la fase logarítmica, el porcentaje de infección
disminuye y, por ende, disminuye la aparición de unidades formadoras de placa (UFP).
(Brock y col ; 2003)

V. CONCLUSION
• se pudo apreciar la acción de los bacteriófagos donde se pudo observar placas en el

cultivo.

•hubo una tasa alta de infección a la célula bacteriana que creció en este experimento y, por

ende, una mayor destrucción dando lugar placas en cultivos.

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

• Brooks, G. F., Karen C. Carroll, Janet S. Butel, Stephen A. Morse, & Timothy A. Mietzner.

(2013). Jawet, Melnick y Adelberg Microbiología médica.25 edición. México. McGraw Hill

Lange.

•Madigan, M. T., Martinko, J. M., y Parker, J. Brock. (2003). Biología de los

Microorganismos. 10ª edición. Madrid. Prentice-Hall