TOMA DE MUESTRA SANGUINEA

•Solicitar al paciente que cierre el puño

•Sleccionar la vena

•Limpiar la zona a puncionar con alcohol al 70%

•Aplicar torniquete y fijar vena

•Introducir aguja en angulo de 15° con bisel hacia arriba e introducir el tubo al vacio
•Retirar torniquete al fluir la sangre, retirar tubo al llenarse y deschar el material en su
contenedor correspondiente

Formula blanca

• Realizar frotis y tinción de Wright

• Observar en 100X

• Cuantificar 100 leucocitos consecutivos

• Anotar la cantidad de neutrofiloos, basofilos, linfocitos y monocitos

• Obtener valores porcentuales

• Anotar anormalidades

Recuento total de leucocitos

• Aspirar sangre con pipeta de Thoma hasta el 0.5 (Dil. 1/20)

• Aspirar diluyente hasta el 11

• Homogeneizar 3 minutos
• Descartar las primeras 3 a 4 gotas

• Llevar a camara de recuento

• Realizar conteo en 40X en 4 cuadriculas de los extremos
Formula roja y curva de calibración

• Aspirar sangre con pipeta de thoma hasta el 0.5

• Aspirar el diluyente hasta el 11

• Homogeneizar 3 a 4 minutos
• Desechar las primeras 3 a 4 gotas

• Colocar en camara de conteo

• Hacer conteo en 40X en el cuadrado grande central, solo centro y esquinas

Determinación de Hemoglobina

Blanco Patrón Muestra

Reactivo mL 5 5 5
Sangre uL 0.02
Patrón uL 0.02

Preparar los tubos con las especificaciones anteriores

Dejar reposar 3 a 5 minutos

Leer absorbancia de la muestra y calibrador a 540nm y ajustar a 0 con el blanco

Prueba de Tromboplastina Parcial (APTT)

• Agregar 100uL de CaCl2 0.025mol/L en tubo de ensaye

• Colocar 100uL de plasma rico en plaquetas "prp" en tubo de ensaye
• Incubar tubos en BM a 37°C
• Mezclar el CaCl2 con el plasma y dejar en BM
• Revisar tubo cada 2 segundos
• Registrar hasta formación del coagulo
Prueba de Protrombina (PT)

• Agregar 100uL de plasma en tubo de ensaye

• Agregar 200uL de Tromboplastina calcica en un tubo de ensaye
• Colocar ambos tubos en BM a 37°C 10 minutos
• Mezclar ambos volumenes
• Reportar tiempo hasta formación del coagulo
• Realizar prueba por duplicado

Prueba de Fibrinogeno capilar

• Marcar en 2 capilares con lapiz graso una distancia de 4cm

• Llenar capilares con plasma y colocarlos en tubo de ensaye

• Incubar 15 minutos en BM a 56°C

• Centrifugar capilares a 11,000rpm por 3 minutos

• Observar con lente de aumento fibrinogeno precipitado

• Medir altura del fibrinogeno y plasma en mm y calcular en mg/dL

Glucosa

•Centrifugar muestra de suero a 3000rpm por 5 minutos

•Tomar 10uL de muestra y pasarlo a tubo de ensaye, y agregar 1000uL de reactivo de glucosa

•Preparar 2 tubos más para Blanco y estandar agregando 1000uL de reactivo de glucosa
•Incubar a 37°C por 10 minutos

•Leer a 505nm
•Reportar en mg/dL
Fibrinogeno

• Obtener plasma de la muestra

• Realizar dilución con el plasma y 180uL de tampón de Imidazol

• Centrifugar a 2000rpm por 10 minutos

• Pasar 100uL de la dilución a 2 tubos de ensayo (100ul cada uno)

• Incubar a 37°C por 5 minutos y añadir 50uL de R1

• Leer en coagulometro

Determinación cuantitativa de Urea

Blanco Patrón Muestra

RT mL 1 1 1
Patrón uL 10
Muestra uL 10

Mezclar y leer absorbancias a los 30 segundos y a los 90 segundos

(Abs de muestra-Abs de Blanco/Abs de patrón-Abs de Blanco)X50= mg/dL

FC: mg/dL x 0.1665 =mmol/L

Determinación cuantitativa de Ácido Urico

Blanco Patrón Muestra

RT mL 1 1 1
Patrón uL 25
Muestra uL 25

Incubar 5 minutos a 37°C o 10 minutos a 15-25°C

Leer absorbancia

(Abs muestra-Abs de blanco/Abs Patrón – Abs de blanco) x 6 = mg/dL

FC: mg/dL x 59.5= umol/L

Determinación cuantitativa de creatinina

Blanco Patrón Muestra

RT mL 1 1 1
Patrón uL 100
Muestra uL 100

Leer a 492nm A1 a los 30 segundos y A2 a los 90 segundos

(A2-A1 de muestra/ A2-A1 de patrón)X 2 = mg/dL de Creatinina en muestra

Determinación cuantitativa de albumina

Blanco Patrón Muestra

Reactivo mL 1 1 1
Patrón uL 5
Muestra uL 5

Incubar a 5 minutos a 37°C o 10 minutos a 15 a 25°C

Leer en espectrofotómetro

(A muestra- A blanco/ A patrón- A blanco)x5= g/dL

Determinación cuantitativa de Proteínas totales

Blanco Patrón Muestra

Reactivo 1 1 1
Patrón 25
Muestra 25

Incubar 5 minutos a 37°C o 10 minutos temperatura ambiente

(A muestra- A blanco/ A patrón – A blanco) x 7= g/dL