Informe 08 Extraccion de ADN Del Tomate

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
FACULTAD DE INGENIERÍA EN INDUSTRIAS ALIMENTARIAS
DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIA, TECNOLOGÍA E INGENIERÍA
DE ALIMENTOS
INFORME °N 06
EXTRACCIÓN DE ADN DEL TOMATE
ALUMNO : MIRANDA VARGAS, Karla A.
PROFESOR : Dr. Pedro PELAEZ SANCHEZ
Tingo Maria – Perú
2018
I. INTRODUCCIÓN
Muchos estudios de Biología Molecular comienzan con la extracción
de ácidos nucleicos. La lisis celular libera las moléculas en una fase acuosa que
es separada de los restos celulares por centrifugación. Las proteínas son
removidas de la fase acuosa con solventes orgánicos (fenol, cloroformo). El
ADN, que permanece en la fase acuosa, precipita junto al etanol y
posteriormente es purificado y resuspendido en un buffer adecuado.
OBJETIVOS
- Aprender el método para la extracción de ADN
- Extraer ADN de una muestra de tomate.

II. MARCO TEÓRICO
2.1. ADN
El ADN (ácido desoxirribonucleico) es el lugar donde reside la
información genética de un ser vivo, su estructura es una cadena larga de piezas
planas que se proyectan hacia afuera, denominadas bases. Esta escalera en
espiral tiene la capacidad de enrollarse y desenrollarse para que la cadena de
ácido nucleico pueda duplicarse. Ese proceso de duplicación, llamado
replicación, sucede cada vez que una célula se divide (CORFIELD et al., 1992).
2.2. Extracción de ADN
La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En
primer lugar, tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática
para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación, debe romperse
también la membrana nuclear para dejar libre el ADN. Por último, hay que
proteger el ADN de enzimas que puedan degradarlo y para aislarlo hay que hacer
que precipite en alcohol (HAGELBERG et al., 1989).
2.2.1. Extracción del ADN en las plantas
El ADN genómico de las plantas es más difícil de extraer a causa de
la pared celular de la planta, que se elimina por homogeneización o mediante la
adición de celulosa para degradar la celulosa que forma la pared celular
(ZAVALA 2005).
2.2.2. Extracción de ADN animal
Los leucocitos de sangre periféricos son una fuente principal de ADN
genómico en animales, pero la recogida de muestras es difícil ya que la sangre

debe ser retirada del animal. La sangre contiene una serie de compuestos como
proteínas, lípidos, glóbulos blancos, glóbulos rojos, plaquetas y plasma, que
pueden contaminar la muestra de ADN (ZAVALA 2005).
2.2.3. Diferencias
Las diferencias entre el ADN de las plantas y los animales se
encuentran en la secuencia de bases en la hélice. Los compuestos que se
encuentran en las células vegetales están ausentes en las células animales y las
secuencias de bases de ADN reflejan esto, puesto que el ADN genómico de la
planta es a menudo mayor que el ADN de los animales. Estas diferencias afectan
los métodos de extracción, ya que impacta en el rendimiento y la pureza del ADN.
2.3. Métodos de extracción
2.3.1. Método CTAB
Bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) de extracción es un método
de extracción de ADN de plantas que elimina los polifenoles de las paredes
celulares de las plantas. Los polifenoles son compuestos con cadenas largas de
ADN que se asemejan y se precipitan de manera similar.
2.3.2. Método de acetato de potasio SDS
El método de acetato de potasio de dodecilsulfato de sodio (SDS) de
la extracción de ADN es otra forma común para extraer material genético de la
planta. Este método utiliza el alcohol para romper las paredes celulares.
III. MATERIALES Y MÉTODOS
3.1. Materiales y Reactivos
- Tomate maduro
- Cuchillo y Tabla para picar
- Vaso de precipitados
- Tela
- Detergente (Champú)
- Varilla
- Probeta
- Pipeta
- Etanol al 95% frío
- Cloruro de sodio 2M
3.2. Metodología
- El etanol debe ser colocado en el congelador al menos un día
antes de la realización de la práctica. También se debe enfriar en cloruro de
sodio.
- Cortar el tomate en trozos pequeños
- Licuar el tomate en trozos, filtrar en un vaso, sobre una tela para
separar el resto de tejido que haya quedado por romper.
- Medir el volumen del filtrado en una probeta, luego depositar en un
vaso.
- Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M frio.

- A continuación, se añade 2 mL de detergente (Champú). Mezclar
bien. Y colocar la mezcla en una probeta.
- Por las paredes de la probeta agregar muy despacio 50 mL de
etanol 96% frio, de manera que se formen dos capas.
- Esperar 10 minutos sin mezclar las capas y observar el ADN que
precipita en la interfase de las dos capas y llega hasta la superficie.
- Introducir una varilla de vidrio y remover lentamente en una misma
dirección, se observará que sobre la varilla queda adherido el ADN, con aspecto
de pequeñitos copos de algodón mojado.

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES
- Se pudo observar que se formó en tres fases, en la fase 1 se
observó el agua y en la fase 2 partículas y en la 3 las proteínas de ADN
suspendidas en otros compuestos.
- Según MALAJOVICH (2012), esta separación de fase se debe a
la diferencia de densidades, el resultado obtenido de la extracción no es ADN
puro ya que, entremezclado con él, hay fragmentos de ARN.
Una vez que estas membranas se han roto, el ADN es liberado de
la célula. El alcohol además de permitirnos ver el ADN, este separa
el ADN de otros componentes celulares, los cuales son dejados en
la solución acuosa y así el ADN se precipita en el alcohol fuera de
la solución, donde puede ser visto.

V. CONCLUSIONES
- Se aprendió el método de acetato de potasio de dodecilsulfato de
sodio (SDS), para la extracción de ADN.
- Se pudo extraer el ADN del tomate, la cual se le observo. se trata
de una actividad cuyo único requisito es colocar etanol en el congelador, en un
frasco cerrado, al menos un día antes de la realización de la práctica. El tomate
puede ser reemplazado por frutillas, un poliploide con alto contenido de ADN.
VI. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA
CORFIELD V, Y VANDENPLAS E. (1992). Ancient DNA genotyping: HLA and
CA repeats by PCR. Ancient DNA Newsletter 1: 31-34
DITTRICH-SCHRÖDER G., WINGFIELD M.J., KEEIN H.Y SLIPPERS B. 2012.
DNA extraction techniques for DNA barcoding of minute gall-
inhabiting wasps. Molecular Ecology Resources, 12: 109-115.
JACOB F. 1987. The Statue Within. Tomado de “La unidad de la vida”. Op. cit.
pp 68.
HAGELBERG E. Y SYKES B. (1989). Ancient bone DNA amplified. Nature 342:
485.
MALAJOVICH (2012). Biotecnología. Guías de actividades: enseñanza y
divulgación. 2a ed. Bernal – Universidad Nacional de Quilmes.
http://www.bteduc.bio.br.
ZAVALA J. 2005. Manual de técnicas básicas de biología celular. 1ra ed. UADY.
México: 19,27-28,43-49

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EXTRACCIÓN DE ADN DEL TOMATE

ALUMNO : MIRANDA VARGAS, Karla A.

PROFESOR : Dr. Pedro PELAEZ SANCHEZ

Tingo Maria – Perú

Muchos estudios de Biología Molecular comienzan con la extracción

es separada de los restos celulares por centrifugación. Las proteínas son

removidas de la fase acuosa con solventes orgánicos (fenol, cloroformo). El

ADN, que permanece en la fase acuosa, precipita junto al etanol y

posteriormente es purificado y resuspendido en un buffer adecuado.

- Aprender el método para la extracción de ADN

- Extraer ADN de una muestra de tomate.

El ADN (ácido desoxirribonucleico) es el lugar donde reside la

información genética de un ser vivo, su estructura es una cadena larga de piezas

planas que se proyectan hacia afuera, denominadas bases. Esta escalera en

espiral tiene la capacidad de enrollarse y desenrollarse para que la cadena de

ácido nucleico pueda duplicarse. Ese proceso de duplicación, llamado

2.2. Extracción de ADN

La extracción de ADN requiere una serie de etapas básicas. En

primer lugar, tienen que romperse la pared celular y la membrana plasmática

para poder acceder al núcleo de la célula. A continuación, debe romperse

que precipite en alcohol (HAGELBERG et al., 1989).

2.2.1. Extracción del ADN en las plantas

El ADN genómico de las plantas es más difícil de extraer a causa de

la pared celular de la planta, que se elimina por homogeneización o mediante la

adición de celulosa para degradar la celulosa que forma la pared celular

2.2.2. Extracción de ADN animal

Los leucocitos de sangre periféricos son una fuente principal de ADN

genómico en animales, pero la recogida de muestras es difícil ya que la sangre

proteínas, lípidos, glóbulos blancos, glóbulos rojos, plaquetas y plasma, que

pueden contaminar la muestra de ADN (ZAVALA 2005).

Las diferencias entre el ADN de las plantas y los animales se

encuentran en la secuencia de bases en la hélice. Los compuestos que se

secuencias de bases de ADN reflejan esto, puesto que el ADN genómico de la

los métodos de extracción, ya que impacta en el rendimiento y la pureza del ADN.

2.3. Métodos de extracción

2.3.1. Método CTAB

Bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB) de extracción es un método

de extracción de ADN de plantas que elimina los polifenoles de las paredes

ADN que se asemejan y se precipitan de manera similar.

2.3.2. Método de acetato de potasio SDS

El método de acetato de potasio de dodecilsulfato de sodio (SDS) de

la extracción de ADN es otra forma común para extraer material genético de la

3.1. Materiales y Reactivos

- Cuchillo y Tabla para picar

- Etanol al 95% frío

- El etanol debe ser colocado en el congelador al menos un día

antes de la realización de la práctica. También se debe enfriar en cloruro de

- Cortar el tomate en trozos pequeños

- Licuar el tomate en trozos, filtrar en un vaso, sobre una tela para

separar el resto de tejido que haya quedado por romper.

- Medir el volumen del filtrado en una probeta, luego depositar en un

- Añadir al filtrado un volumen igual de cloruro sódico 2M frio.

bien. Y colocar la mezcla en una probeta.

- Por las paredes de la probeta agregar muy despacio 50 mL de

etanol 96% frio, de manera que se formen dos capas.

- Esperar 10 minutos sin mezclar las capas y observar el ADN que

precipita en la interfase de las dos capas y llega hasta la superficie.

- Introducir una varilla de vidrio y remover lentamente en una misma

de pequeñitos copos de algodón mojado.

- Se pudo observar que se formó en tres fases, en la fase 1 se