Universidad de San Carlos De Guatemala

Facultad de Ingenieria

Escuela de Ingeniería Química

Laboratorio de Microbiología

Ing. Carlos Salvador Wong Davi

MEDIOS DE CULTIVO

Katherine Pamela Morales Ortiz

201213317

Guatemala, 02 de septiembre del año 2,018

 INDICE

Pág.

Resumen……………………………………………………………………. 3

Medios de Cultivo………………………………………………………….. 4

Necesidades Nutricionales……………………………………………… 4

Condiciones físicas necesarias para el desarrollo……………………. 5

Consistencia adecuada del medio…………………………………. 5

Temperatura………………………………………………………….. 5

Presencia de gases…………………………………………………. 5

pH adecuado……………………………………………………….... 6

Humedad…………………………………………………………….... 6

Esterilidad del medio……………………………………………….... 6

Agar Nutritivo…………………………………………………………………. 7

Caldo Lactosado……………………………………………………………....8

Verde Brillante……………………………………………………………...….8-9

EC…………………………………………………………………………….....10

Algoritmo de preparación I al IV…………………………………………...…11-14

Resultados…………………………………………………………………..…15-18

Bibliografía………………………………………………………………….…..19

2
 RESUMEN

En la práctica realizada se prepararon 4 medios de cultivo los cuales fueron, caldo

lactosado, verde brillante, agar nutritivo y E.C., la metodología de cada uno de
ellos se explica en los algoritmos I al IV, después de su preparación cada medio
de cultivo se distribuyó en tubos de ensayo con 10 ml cada uno.

El agar nutritivo fue el único medio de cultivo que se calentó y también el único
que no se le colocó tubo de Durham, al preparar este medio de cultivo se observó
un color beige o amarillo claro y un olor parecido al concentrado de pollo.

El cultivo verde brillante como su nombre lo indica al realizar la preparación en

agua destilada se tornó un color verde oscuro que lo distinguía fácilmente de las
otras preparaciones, no así el caldo lactosado que debido a su calor amarillo claro
muy parecido al de la preparación de E.C. (Escherichia Coli) se distribuyó en tubos
de ensayo más grandes cada uno con su correspondiente tubo de Durham.

3
 1. MEDIOS DE CULTIVO

Un medio de cultivo es la mezcla de distintos componentes que cumplen con los

requerimientos nutricionales y las condiciones físicas en las cuales los
microorganismos pueden desarrollarse para su estudio en laboratorio.

1.1 NECESIDADES NUTRICIONALES

“Desde los hombres hasta los microorganismos, todas las formas de vida, tienen
en común determinadas necesidades nutricionales en términos de necesidades
químicas para llevar a cabo su crecimiento y sus funciones normales.” ¹1

Todo organismo vivo necesita de una fuente de energía, carbono como dióxido de
carbono pero la mayoría necesita algún compuesto de carbono en forma orgánica
como azúcar u otros carbohidratos, nitrógeno, azufre, fósforo, metales como sodio,
potasio, calcio, magnesio, manganeso, hierro, zinc, cobre, fósforo y cobalto.

Todo organismo vivo necesita también vitaminas y compuestos vitaminados y

sobre todo agua.

Actualmente, la forma más extendida de aportar estas sustancias a los medios es

utilizar peptona que, además, representa una fuente fácilmente asequible de
nitrógeno y carbón ya que la mayoría de los microorganismos, que no suelen
utilizar directamente las proteínas naturales, tienen capacidad de atacar los
aminoácidos y otros compuestos más simples de nitrógeno presentes en la
peptona.

Ciertas bacterias tienen necesidades nutritivas específicas por lo que se añade a

muchos medios sustancias como suero, sangre, líquido ascítico, etc.

Muy a menudo se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar,
por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas
bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH
básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya
que impide el crecimiento de la mayoría de las bacterias Gram-positivas).

1
Michael J. Pelczar, Jr. Microbiología, cuarta edición 1,982.

4
El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios
de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se
solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre
el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él.

1.2 CONDICIONES FÍSICAS NECESARIAS PARA EL DESARROLLO

Además de conocer los requerimientos nutricionales apropiados es necesario

conocer las condiciones físicas del medio donde el microorganismo puede
desarrollarse mejor.

1.2.1 Consistencia adecuada del medio

Partiendo de un medio líquido podemos modificar su consistencia añadiendo

productos como albúmina, gelatina o agar, con lo que obtendríamos medios en
estado semisólido o sólido.

Los medios solidificados con gelatina tienen el gran inconveniente de que muchos
microorganismos no se desarrollan adecuadamente a temperaturas inferiores al
punto de fusión de este solidificante y de que otros tienen la capacidad de licuarla.

1.2.2 Temperatura

Ya que el proceso de desarrollo de las bacterias depende de reacciones químicas

y la velocidad con que se efectúan estas reacciones es influida por la temperatura.

1.2.3. Presencia de gases

Debido a que algunas bacterias se desarrollan en presencia de oxígeno

(aerobias), otras que solo se desarrollan en ausencia de oxígeno (anaerobias) y
otras que pueden desarrollar se tanto con presencia como ausencia de oxígeno.

5
1.2.4. pH adecuado

La concentración de iones hidrógeno es muy importante para el crecimiento de los

microorganismos. La mayoría de ellos se desarrollan mejor en medios con un pH
neutro, aunque los hay que requieren medios más o menos ácidos. No se debe
olvidar que la presencia de ácidos o bases en cantidades que no impiden el
crecimiento bacteriano pueden sin embargo inhibirlo o incluso alterar sus procesos
metabólicos normales.

1.2.5. Humedad

Un nivel mínimo de humedad, tanto en el medio como en la atmósfera, es

imprescindible para un buen desarrollo de las células vegetativas microbianas en
los cultivos. Hay que prever el mantenimiento de estas condiciones mínimas en las
estufas de cultivo a 35-37ºC proporcionando una fuente adecuada de agua que
mantenga la humedad necesaria para el crecimiento de los cultivos y evitar así
que se deseque el medio.

1.2.6. Esterilidad del medio

Todos los medios de cultivo han de estar perfectamente estériles para evitar la
aparición de formas de vida que puedan alterar, enmascarar o incluso impedir el
crecimiento microbiano normal del o de los especímenes inoculados en dichos
medios. El sistema clásico para esterilizar los medios de cultivo es el autoclave
(que utiliza vapor de agua a presión como agente esterilizante)

6
 2. AGAR NUTRITIVO

2.1 USO

Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el aislamiento y

recuento de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales.

Su uso está descrito en procedimientos para análisis de alimentos, aguas y otros

materiales de importancia sanitaria.

2.2 FUNDAMENTO

Medio de cultivo nutritivo no selectivo, en el cual la pluripetona y el extracto de

carne constituyen la fuente de carbono, nitrógeno y aportan nutrientes para el
desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio mantiene el balance
osmótico y el agar es el agente solidificante.

Puede ser suplementado con sangre ovina desfibrinada estéril para favorecer el
crecimiento de organismos exigentes en sus requerimientos nutricionales.

2.3 (g por litro)

Pluripeptona 5.0

Extracto de carne 3.0

Cloruro de sodio 8.0

Agar 15.0

7
 3. CALDO LACTOSADO
3.1 USO

Medio recomendado como prueba presuntiva de la presencia de bacterias del

grupo coliforme en aguas y alimentos. También está indicado para el pre
enriquecimiento no selectivo en los protocolos de investigación de Salmonella spp.
a partir de alimentos.

Es un medio rico en nutrientes y no contiene inhibidores del crecimiento

bacteriano. Permite recuperar células injuriadas, diluye sustancias tóxicas o
inhibitorias y favorece el crecimiento de Salmonella con respecto a otras
bacterias. El extracto de carne y la peptona son la fuente de carbona y nitrógeno
mientras que la lactosa es el hidrato de carbono fermentable. Por la fermentación
de la lactosa se produce ácido y gas. (El cual se evidencia al utilizar las campanas
de Durham)

3.2 FÓRMULA (g por litro)

Peptona 5.0

Extracto de carne 3.0

Lactosa 5.0

4. VERDE BRILLANTE

4.1 USO

Medio de enriquecimiento altamente selectivo para el aislamiento de Salmonella

spp, excepto Salmonella typhi y Salmonella paratyphi a partir de muestras clínicas,
alimentos y otros materiales de importancia sanitaria.

4.2 FUNDAMENTO

En el medio de cultivo, la pluripetona y el extracto de levadura, constituyen la

fuente de nitrógeno, vitaminas y minerales. La lactosa y la sacarosa son los

8
hidratos de carbono fermentables, el rojo fenol es el indicador de pH, que vira al
amarillo cuando hay producción de ácido a partir de fermentación de azúcares, el
cloruro de sodio mantiene el balance osmótico, y el verde brillante actúa como
agente selectivo que inhibe el desarrollo de flora Gram positiva y algunos
microorganismos Gram negativos, el agar es el agente solidificante.

Es muy funcional cuando se examinan muestras de heces y alimentos por su

capacidad de diferenciar colonias sospechosas.

4.3 FÓRMULA (g por litro)

Pluripeptona 10.0

Extracto de levadura 3.0

Cloruro de sodio 5.0

Lactosa 10.0

Sacarosa 10.0

Rojo fenol 0.08

Verde brillante 0.0125

Agar 20.0

9
 5. MEDIO EC
5.1 USO

Medio utilizado para el recuento de coliformes totales, coliformes fecales y

Escherichia Coli en agua, alimentos y otros materiales.

5.2 FUNDAMENTO

En el medio de cultivo la tripteína es la fuente de péptidos, aminoácidos y

nitrógeno. La lactosa es el hidrato de carbono fermentable y favorece el desarrollo
de las bacterias coliformes, las sales biliares inhiben la flora acompañante Gram
positiva, las sales fosfato constituyen un sistema buffer que impide que los
productos ácidos originados por la fermentación de lactosa afecten el crecimiento
microbiano y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico.

5.3 FÓRMULA (g por litro)

Tripteína 20.0

Lactosa 5.0

Sales biliares 1.9

Fosfato dipotásico 4.0

Fosfato monopotásico 1.5

Cloruro de sodio 5.0

10
 ALGORITMO DE PREPARACIÓN I.

AGAR NUTRITIVO

Se pesó 8 g de agar
nutritivo deshidratado y se
agregaron a 400 ml de agua
destilada en un beacker.

Se calentó y agitó
frecuentemente la mezcla
hasta que hirviera.

NO

¿Hirvió la
mezcla?

SI

Se vertió la solución en 40
tubos de ensayo con 10 ml
cada uno.

Se colocó tapones a cada

tubo de ensayo.

Se guardaron en la
refrigeradora.

11
FIN
 ALGORITMO DE PREPARACIÓN II.

CALDO LACTOSADO

Se pesó 26 g de caldo
lactosado deshidratado y se
agregaron a 400 ml de agua
destilada en un beacker.

Se agitó la mezcla.

NO

¿Se
homogenizo
la mezcla?

SI

Se vertió la solución en 40
tubos de ensayo con 10 ml
cada uno.

Se colocó tubos de Durham

a cada tubo de ensayo.

Se colocó tapones a cada

tubo de ensayo y se
guardaron en la
refrigeradora.

12
FIN
 ALGORITMO DE PREPARACIÓN III.

EC

Se pesó 14.8 g de E.C.

deshidratado y se agregaron a
400 ml de agua destilada en
un beacker.

Se agitó la mezcla.

NO

¿Se
homogenizo
la mezcla?

SI

Se vertió la solución en 40
tubos de ensayo con 10 ml
cada uno.

Se colocó tubos de Durham

a cada tubo de ensayo.

Se colocó tapones a cada

tubo de ensayo y se
guardaron en la
refrigeradora.

13
FIN
 ALGORITMO DE PREPARACIÓN IV.

VERDE BRILLANTE

Se pesó 16 g de verde
brillante deshidratado y se
agregaron a 400 ml de agua
destilada en un beacker.

Se agitó la mezcla.

NO

¿Se
homogenizo
la mezcla?

SI

Se vertió la solución en 40
tubos de ensayo con 10 ml
cada uno.

Se colocó tubos de Durham

a cada tubo de ensayo.

Se colocó tapones a cada

tubo de ensayo y se
guardaron en la
refrigeradora.

14
FIN
 6. RESULTADOS

6.1. AGAR NUTRITIVO

6.1.1 OBSERVACIONES
Para el agar fue necesario calentar la mezcla y agitar uniformemente, debido a
que uno sus componentes de forma deshidratada es peptona, extracto de carne,
cloruro de sodio y agar, siendo este último el que le da una propiedad solidificante
aumentando su viscosidad. El color de esta mezcla es amarillo claro de olor fuerte.

15
6.2. CALDO LACTOSADO

6.2.1. OBSERVACIONES
Esta preparación no necesito de un calentamiento previo, solo la mezcla del caldo
lactosado en polvo y el agua destilada, al mezclar uniformemente se observó un
color amarillo claro en la solución, es por esa razón que al verter en los tubos de
ensayo se utilizaron los grandes para diferenciarlos de los tubos con el medio de
cultivo para la Escherichia Coli ya que esta tiene un color muy similar.

Se agregaron tubos de Durham con la abertura hacia abajo, con el fin de

determinar la producción de gases de microorganismos.

16
6.3. VERDE BRILLANTE

6.3.1 OBSERVACIONES

Se observó que el medio de cultivo deshidratado tiene un color verde oscuro, así
también la mezcla con agua esterilizada, esto se debe a que entre sus
componentes se encuentra el colorante verde brillante.

17
6.4. EC

6.4.1 OBSERVACIONES

Esta preparación no necesito de calentamiento previo, observando

que al mezclar el agua destilada con el polvo E. C. hubo un cambio de
color a amarillo claro similar al del caldo lactosado.

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 BIBLIOGRAFÍA

1. Laboratorios Britania, S.A. (02 de agosto de 2018). Britania Lab. Obtenido de

Britania Lab:
http://www.britanialab.com/back/public/upload/productos/upl_5a28232ff1fd3.
pdf

2. Pelczar Jr, M. J. (1,982). Cultivo de las bacterias. En M. J. Pelczar Jr,

Microbiología (págs. 88-101). Mexico: McGraw-Hill.

3. Universidad de Buenos Aires Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. (02 de

agosto de 2018). Los medios de cultivo en microbiología. Obtenido de Los
medios de cultivo en microbiología:
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm

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