Replicação do DNA

O DNA é uma molécula formada por duas cadeias polinucleotídicas. Um nucleótido é formado
por um grupo fosfato, um açúcar (que no caso do DNA se chama desoxyribose) e uma base
azotada. A desoxyribose é um açúcar que possui cinco carbonos, em que o seu carbono 5 se
encontra ligado ao grupo fosfato.

A DNA polimerase é a enzima responsável pela união dos nucleótidos. Para procedermos à
união destes nucleótidos esta enzima vai unir o carbono 3 linha com o grupo fosfato do
nucleótido seguinte. Estabelece-se desta forma uma ligação chamada de fosfodiéster.

A molécula de DNA é uma molécula cujas cadeias são antiparalelas. Ou seja, se a extremidade
de uma cadeia possuir o carbono 5 linha livre, a mesma extremidade da cadeia complementar
apresentará o carbono 3 linha livre.

A replicação do DNA é semiconservativa o que significa que cada cadeia da dupla hélice de
DNA atuam como molde para a formação de novas cadeias complementares. Este processo
leva ao aparecimento de duas moléculas filhas que contêm 50 por cento de cadeias ancestrais.

DNA polimerase

Uma das moléculas essências à replicação é a enzima DNA polimerase. A DNA polimerase é a
enzima responsável por sintetizar o DNA, adicionando nucleótidos um por um, promovendo
assim o crescimento da cadeia de DNA, incorporando apenas aqueles que são complementares
à cadeia original.

Existem certas particularidades da enzima DNA polimerase:

 Esta enzima necessita sempre de um molde original;

 Só consegue adicionar nucleótidos a partir de uma extremidade de DNA 3 linha (atua
no sentido 3 linha – 5 linha);
 Elas não conseguem iniciar a construção de novas cadeias de DNA do zero pelo que
necessitam de uma cadeia pré-existente ou de um curto segmento de nucleótidos
chamado de primer;
 Estas enzimas analisam e corrigem o seu trabalho removendo os nucleótidos que
foram erroneamente adicionados à cadeia.
A adição de nucleótidos requer energia. Esta energia provém dos próprios nucleótidos que
possuem três grupos fosfatos (de forma semelhante ao que acontece com a molécula de ATP).
Quando a ligação entre os fosfatos é quebrada, a energia libertada é usada para formar uma
ligação entre os nucleótidos e a nova cadeia.

Replicação do DNA

A replicação começa sempre num local específico do DNA, que é chamado de origem da
replicação e é reconhecido pela sua sequência.

Proteínas especializadas reconhecem a origem, ligam-se a este sítio e abrem o DNA. Ao abrir o
DNA dá origem a uma estrutura cujas extremidades ligadas entre si possuem uma forma de Y,
estruturas chamadas de forquilhas de replicação. A toda esta estrutura chama-se de bolha de
replicação. As forquilhas de replicação irão mover-se em direções opostas á medida que a
replicação prossegue.

Forquilha de
replicação

A helicase é a primeira enzima de replicação a ser utilizada na origem da replicação. A função

da helicase é mover as forquilhas de replicação em frente, desenrolando o DNA, ou seja,
rompendo as ligações por pontes de hidrogénio estabelecidas pelos pares de bases
nitrogenadas.

Proteínas chamadas de Single-Strand binding proteins revestem as cadeias de DNA separadas

perto das forquilhas de replicação, impedindo que estas voltem á configuração de dupla
hélice.
Primers e primase

DNA polimerase pode apenas adicionar nucleótidos no sentido 3 linha – 5 linha da cadeia de
DNA original. A DNA polimerase utiliza o grupo hidroxilo livre na extremidade 3 linha como
uma âncora, acrescentando um nucleótido a este grupo.

Sozinha, a DNA polimerase não consegue adicionar o primeiro nucleótido á nova cadeia. A
enzima primase faz um primer de RNA, uma sequência curta de ácido nucleico complementar
ao modelo que fornece uma extremidade 3 linha para a DNA polimerase trabalhar. Um primer
típico possui cerca de 5 a 10 nucleótidos. O primer inicia a síntese de DNA. Assim que o RNA
primer está posicionado, a DNA polimerase estende-o, adicionando nucleótidos para fazer
uma nova cadeia de DNA, complementar á original.

Cadeias leading e lagging

Na bactéria E. Coli, a DNA polimerase que trata da maior parte da síbtese de DNA é a DNA
polimerase III. Existem duas moléculas de DNA polimerase III ao nível da forquilha de
replicação, trabalhando cada uma delas arduamente para construir duas novas cadeias de
DNA.

DNA polimerase pode apenas fazer novo ADN na direção 5 linha – 3 linha (da nova cadeia), o
que corresponde a um problema na replicação. A dupla hélice de DNA é antiparalela; por
outras palavras, uma cadeia possui direção 5 linha – 3 linha, enquanto que a outra possui
direção 3 linha – 5 linha. Este aspeto torna necessário que as duas novas cadeias, que são por
sua vez antiparalelas aos seus moldes, sejam feitas de duas maneiras ligeiramente diferentes.

Uma das novas cadeias, a que corre na direção 5 linha – 3 linha em direção á forquilha de
replicação, é a cadeia cujo processo é mais facilitado. Esta cadeia é feita continuadamente,
uma vez que a DNA polimerase se move na mesma direção que a forquilha de replicação. Esta
cadeia sintetizada é chamada de leading.

A outra nova cadeia possui direção 3 linha- 5 linha, ou seja, afasta-se da forquilha de
replicação. Esta cadeia é feita de fragmentos porque, à medida que a forquilha se move em
frente, a DNA polimerase (que se move afastando-se da forquilha de replicação) necessita de
sair da zona da cadeia em que estava ligada e voltar a unir-se à nova cadeia de DNA recém
exposta. Esta nova cadeia que é feita de fragmentos é chamada de cadeia lagging.
Os pequenos fragmentos são chamados de fragmentos de okazaki. A cadeia leading pode ser
estendida a partir de um único primer, enquanto que a cadeia lagging precisa de um novo
primer para cada um dos curtos fragmentos de okasaki.

Manutenção e equipa de limpeza

Algumas proteínas e enzimas, em adição as já referidas, são necessários para que a replicação
do DNA corra sem problemas. Uma destas é uma proteína chamada de siding camp, que
segura a DNA polimerase III enquanto esta sintetiza ADN. A proteína sliding camp é uma
proteína em forma de anel que impede a DNA polimerase da cadeia lagging de se despegar
quando existe a iniciação de um novo fragmento de okazaki.

Topoisomerase também desempenha um papel importante de manutenção durante a

replicação do DNA. Esta enzima impede que a dupla hélice de DNA que se encontra em frente
da forquilha de replicação de ficar demasiado enrolado quando o DNA se abre. Esta proteína
atua fazendo cortes temporários na hélice para remover a tensão, selando posteriormente os
mesmo cortes evitando danos permanentes no DNA.

Finalmente, falta realizar algum trabalho se o DNA não contiver RNA ou gaps. Os RNA’s
primers são removidos e substituídos por DNA através da atividade da DNA polimerase I, a
outra polimerase envolvida na replicação. Os cortes que restam após os primers serem
substituídos são selados pela enzima DNA ligase.

Resumo da replicação de DNA em E. coli

1. A enzima helicase abre a dupla cadeia de DNA ao nível da forquilha de replicação;

2. As ssbp (single strand binding proteins) agarram o DNA em torno da forquilha de
replicação impedindo que o DNA feche e volta á sua forma original;
3. A topoisomerase trabalha na região á frente da forquilha de replicação impedindo o
enrolamento em demasia do DNA;
4. A primase sintetiza os primers de RNA complementares ás cadeias de DNA;
5. DNA polimerase III realiza a extensão dos primers, adicionando a partir da
extremidade 3 linha, de modo a fazer aumentar a nova cadeia de DNA;
6. Os RNA primers são removidos pala ribonuclease H e pela FEN e a DNA polimerase I
substitui estes segmentos por nucleótidos de DNA.
7. As pequenas lacunas existentes entre os fragmentos de DNA são selados pela ação da
DNA ligase;
Replicação do DNA nos eucariotas

O básico da replicação do DNA é semelhante entre bactérias e eucariotas, tais como humanos.
Contudo existem algumas diferenças:

 Os eucariotas normalmente possuem cromossomas lineares múltiplos, cada um com

múltiplas origens de replicação;
 A maioria das enzimas de E. coli possuem homólogos na replicação de DNA dos seres
eucariotas. Contudo, uma única enzima de E. coli pode ser representada por múltiplas
enzimas nos eucariotas.
 A maioria dos cromossomas dos eucariotas são lineares. Devido á maneira que a
cadeia lagging é feita, algum DNA é perdido ao nível das extremidades dos
cromossomas lineares (os telómeros) em cada fase da replicação.