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TP1: Diluciones
Objetivos
Familiarizarse con las unidades mas utilizadas en biología molecular y ser capaces
de intercambiar ágilmente las distintas unidades.
Familiarizarse con el material de uso corriente en el laboratorio, la preparación de
soluciones y el empleo de diluciones a partir de soluciones concentradas.
Introducción
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Introducción a la Biología Celular y Molecular
dice cuantas veces más pesada es una molécula de una sustancia respecto de la unidad
de masa atómica (u.m.a.), ó de 1 Dalton (Da), que corresponde al átomo hidrógeno.
Así, la Mr del agua es 18 u.m.a. o 18 Da, o bien, 18 veces más pesada que un
átomo de hidrógeno.
Unidades de concentración
% p/p: Porcentaje masa en masa, g de soluto por cada 100 g de solución (SN)
(soluto + solvente).
% p/v: Porcentaje masa en volumen, g de soluto por cada 100 cm3 o 100 ml de
SN.
% v/v: Porcentaje volumen en volumen, ml de soluto por cada 100 ml de SN.
M: Molaridad, Nº de moles de soluto por cada 1 litro o 1000 cm3 de SN.
m: Molalidad, Nº de moles de soluto por cada 1 Kg de solvente.
N: Normalidad, Nº de equivalentes de un ácido o de una base por cada 1 litro de
SN.
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Desarrollo
Dilución incógnita:
Cada grupo recibirá 1 ml de una solución de concentración desconocida. Deberá
averiguar la concentración de la misma, por extrapolación en la curva realizada con las
diluciones seriadas a partir de la solución stock (preparada en el punto anterior)
Para esto deberán colocar 100 µl de las diluciones de la curva y de la muestra
incógnita en cada pocillo de una placa de 96 wells y leer la absorbancia en un lector de
microplaca a 595 nm.
Ejemplo:
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Introducción a la Biología Celular y Molecular
concentración de la muestra
0,1 incógnita que es directamente
proporcional a su absorbancia.
0,05 El valor de R2 da una idea
de qué tan bien se ajusta la recta
0 de regresión a los puntos
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 graficados. Cuanto9 mayor sea
Concentración (mM) este valor (más cercano a 1)
más alineados están los puntos.
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Problemas de Diluciones
2) Exprese cada uno de los siguientes valores de concentración en µg/ml, ng/ml, ng/ul,
ug/ul:
a) 234,20 mg/ml
b) 48,56 mg/l
c) 6,243 x106 g/ml
d) 8,2 x10-8 pg/ml
4) ¿Qué volumen de HCl 6M debe usarse para preparar 500 ml de una solución de HCl
5 mM?
5) ¿Cuál sería la concentración final de una solución preparada al diluir 45,0 ml de KOH
4,2 M en un volumen final de 300 ml?
6) Si se cuenta con una solución 2,2 M de NaCl, ¿Cuántas diluciones seriadas 1/10
deben realizarse para llegar a una solución de concentración 22 µM? Indique que
volúmenes utilizaría si las diluciones se realizan en tubos eppendorfs con Vfinal=1,5ml.
8) Usted posee un tubo con 1 ml de una solución 4.3 x 104 células y debe producir una
solución que contenga aproximadamente 50 cel/ml. ¿Qué diluciones seriadas haría si
en los tubos sólo puede llegar a un Vfinal=1ml y tuviese que pasar de cada solución a
la siguiente no menos de 5 µl?
9) Usted posee una sustancia coloreada y desea realizar una curva de calibración con al
menos 4 puntos para el rango de concentraciones 0,1 mM a 0,2 M. Si ud. posee una
solución 2,5 M y sabe que la e490 = 50 M-1cm-1
a) Indique qué diluciones seriadas haría para obtener esos puntos.
b) ¿Cuál será la Absorbancia a 490nm de cada uno de los puntos que ud. eligió?
10) Las ß-lactamasas son una familia de proteínas generadas por algunos
microorganismos, que les confieren resistencia a los antibióticos ß-lactámicos. Una de
ellas en particular tiene un peso molecular (MW) de 29374 g/mol y e280=24750 M-
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Introducción a la Biología Celular y Molecular
11) Partiendo de una solución stock de PBS (buffer fosfato salino) 10X,
a) ¿Cómo prepararía 50 ml de una solución de buffer 5X?
b) ¿y 120 ml de buffer 2X?
12) Ud debe preparar 20 µl de una muestra de ADN que contiene : Sybr Green 1X, loading
buffer 1X, 1 µl de su muestra de ADN, y H2 O para completar el vo lumen.
a) ¿Cuántos µl de cada componente debe agregar si el Syber green se encuentra 10X
y el loading buffer se encuentra 5X?
b) Qué concentración final tiene la muestra de ADN que acaba de preparar, si el stock
inicial estaba 1 µg/µl
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