Estudiantes: Laboratorio: Absorción de luz 1

- Briceño Bricett Materia: Fisica 1

- Cantero Angie Prof: Luciano Nota:
Vargas
- Lameda Andreina

Mediante espectrofotometría se pueden estudiar sustancias coloreadas, que absorben

longitudes de onda del espectro visible.

Cuando se pretende determinar espectrofotométricamente la concentración de una

sustancia problema en un medio líquido, es imprescindible conocer las longitudes de onda a
las que esta sustancia es capaz de absorber energía de una forma considerable.

Esto se debe a que si se hace incidir, sobre la solución de la sustancia problema, un haz
luminoso de una longitud de onda a la que esta sustancia casi no absorbe energía, los
resultados de absorbancia medidos por el espectrofotómetro serán siempre muy bajos. Por
tanto serán inútiles para el cálculo de la concentración de la sustancia.

Para descubrir la capacidad de absorción de energía de una sustancia a distintas

longitudes de onda es preciso hacer un barrido de longitudes de onda. Esto consiste en elegir
una única solución de la sustancia problema a una determinada concentración. Después se
mide su absorbancia en el espectrofotómetro a distintas longitudes de onda.

Cada sustancia tiene una capacidad diferente de absorción de energía a las distintas
longitudes de onda que constituyen el espectro lumínico.

Por lo tanto, si se hace una representación gráfica de los resultados obtenidos en el barrido
de longitudes de onda, se obtiene una imagen característica que hará posible distinguir la
adecuada longitud de onda para cada sustancia estudiada. Ya que cada sustancia es
selectiva.

Durante esta práctica se procedió a realizar la selección de las longitudes de onda

adecuada de dos sustancias: el bicromato de potasio (K₂CrO₇) y la hemoglobina. Reflejando
los resultados en dos tablas y procediendo a realizar sus curvas de absorción.
 Tabla 1 Tabla 2

Λ (nm) Absorbancia Λ (nm) Absorbancia Λ (nm) Absorbancia

K₂Cr₂O₇ K₂Cr₂O₇ Hemoglobina
340 0,5 570 0 400 2
345 0,5 580 0
410 2
350 0,499 590 0
355 0,498 600 0 420 1.3
360 0,498 610 0 430 0.69
365 0,480 620 0 440 0.45
370 0,470 625 0
450 0.35
375 0,460 630 0
380 0,460 640 0 460 0.30
385 0,455 650 0 470 0.28
390 0,455 655 0 480 0.26
395 0,450 660 0
400 0,450 665 0 490 0.28
405 0,440 670 0 500 0.25
410 0,435 675 0 510 0.20
415 0,420 680 0
520 0.32
420 0,420 685 0
425 0,410 690 0 530 0.34
430 0,410 695 0,070 540 0.32
435 0,405 700 0,100 550 0.28
440 0,400 705 0,170
560 0.25
445 0,400 710 0,200
450 0,400 715 0,210 570 0.23
455 0,400 720 0,290 580 0.19
460 0,390 725 0,300
590 0.15
465 0,350 730 0,310
470 0,320 735 0,350 600 0.14
475 0,300 740 0,370 610 0.13
480 0,280 745 0,390 620 0.12
485 0,250 750 0,400
630 0.11
490 0,200 755 0,400
495 0,150 760 0,410 640 0.09
500 0 765 0,415 650 0.08
505 0 770 0,420 660 0.07
510 0 775 0,425
520 0 780 0,425 670 0.09
530 0 785 0,450 680 0.13
540 0 790 0,460 690 0.18
550 0 795 0,460
700 0.25
560 0 800 0,480

Grafica 1
 K₂Cr₂O₇
0.6

0.5

0.4
Absorbancia

0.3

0.2

0.1

0
300 400 500 600 700 800 900
Longitud de onda (nm)

Grafica 2

Hemoglobina
2.5

1.5
Absorbancia

0.5

0
350 400 450 500 550 600 650 700 750
longitud de onda (nm)

En esta práctica se selecciono una longitud de onda apropiada para la hemoglobina y el

K₂CrO₇ en un Spectronic 20.

Se colocó una cubeta con el disolvente puro (agua destilada) y se ajusto la tramitancia a
100%. Es necesario ajustarlo cada vez que se varíe la longitud de onda, ya que tanto la
sensibilidad del detector como la energía luminosa proporcionada por el foco, varía con la
longitud de onda.
 Se realizo una curva de absorción para cada una de las soluciones (absorción en función
de la longitud de onda) y para el K₂Cr₂O₇ la longitud de onda adecuada fue 450 nm, para la
hemoglobina 440nm . Se seleccionaron las longitudes de onda correspondientes a máximos o
mínimos o el promedio de las longitudes de onda correspondiete a los tramos constantes,
donde la absorbancia estuvo entre 0,2 y 0,8. Se elige este rango, ya que a bajos y altos
valores de absorbancia el grado de incertidumbre es grande considerando que a bajas
absorbancias la intensidad del haz incidente y transmitido es prácticamente igual y el detector
incurre en un error grande al percibir la intensidad de los haces muy semejantes, a altos
valores de absorbancia la energía transmitida es tan pequeña que no es posible medirla con
precisión. Es decir, el error aumenta a medida que las lecturas se acercan a los extremos.

La importancia de la correcta elección de la longitud de onda, radica en que para que se

cumpla la ley de Lambert- Beer, que establece una relación lineal entre la absorbancia y la
concentración A=a.b.C donde a (absortividad) y b (ancho de la celda) deben ser constantes.

Se garantiza “b” constante utilizando siempre la misma celda o cubeta y “a” que depende
de la longitud de onda, una constante, y debe ser la longitud de onda donde la sustancia
absorbe radiación.