ESCUELA POLITÉCNICA NACIONAL

ESCUELA DE FORMACIÓN DE TECNÓLOGOS

TECNOLOGÍA EN AGUA Y SANEAMIENTO AMBIENTAL
QUÍMICA ANALÍTICA AMBIENTAL

PRÁCTICA DE LABORATORIO NO 2

Nombre: Sofía Baque Noboa

Fecha de realización de la práctica: Viernes, 30 de noviembre de 2018

Fecha de entrega de informe: Viernes, 14 de diciembre de 2018

 TEMA: Preparación de medios de cultivo: agares y caldos.

 RESUMEN:

El estudio de los microorganismos ha sido importante desde el inicio de los tiempos, ya que gracias

a este se ha podido avanzar en la ciencia y la tecnología; por tal motivo es esencial saber el origen

de estos seres y su fisiología. En la segunda práctica de laboratorio llevada el 30 de noviembre,

tuvo como principal objetivo diseñar medios de cultivo, lo cual engloba requerimientos

nutricionales y ambientales para obtener resultados favorables. La preparación de medios de

cultivo se ha podido establecer gracias a un sin número de experimentos remontados desde el siglo

pasado y han sido de gran utilidad para la determinación de bacterias y virus. Primero, se procedió

a pesar los 4 tipos de agares que había en el laboratorio y también el caldo nutritivo, cada estudiante

de cada grupo realizó un agar distinto con la finalidad de desarrollar variedad en la siembra de

cultivos. Cabe recalcar, que los agares y el caldo tienen diluciones diferentes, por ello es primordial

saber cuántos gramos de la solución se deben utilizar en un litro de agua. La siembra de cultivos

es una práctica muy utilizada a nivel mundial, tanto para conocer las unidades formadoras de

colonia, como para la experimentación. Luego de 2 días de haber realizado los cultivos, se procedió

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a la siembra, en este caso se colocó mucosa de la boca de varios compañeros con virus de gripe,

gracias a esto, se pudo identificar como las bacterias se fueron desarrollando en los agares

nutritivos en las condiciones ambientales óptimas. En conclusión, los resultados obtenidos fueron

satisfactorios, ya que se logró observar las bacterias y su crecimiento, además de esto, se aprendió

uno de los destacados principios de la microbiología básica, lo cual nos ayudará en futuras

prácticas laborales y académicas.

 INTRODUCCIÓN:

Los medios de cultivo es uno de los sistemas más importantes para la identificación de

microorganismos. Gracias a esta técnica, se ha desarrollado medicinas y productos industriales.

Pero, ¿Cuál es el fundamento de un medio de cultivo? Este, se basa en la siembra de bacterias

dentro de un medio nutritivo y ambientalmente optimo, para lograrlo, el ser humano a lo largo de

la historia ha desarrollado más de 10000 agares nutritivos con diferentes componentes y

concentraciones. Existen varios métodos de cultivo, desde los más simples que se basan en el

crecimiento bacteriano, hasta los más complejos que forman medios selectivos y diferenciales,

todos ellos son realizados en el laboratorio con el fin de identificar microbios y su respectivo

comportamiento.

Los agares y los caldos nutritivos, son los más comunes y fáciles de emplear. Estos componentes

deben tener una gran variedad de proteínas y compuestos que ayuden al desarrollo bacteriano.

Normalmente, son elaborados a base de digestiones de material animal o vegetal, y es por ello que

contienen gran cantidad de purinas, pirimidinas, monosacáridos, polisacáridos y lípidos.

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Colonias en los agares: La siguiente descripción estará centrada en el agar nutritivo Mac Conkey.

Este agar tiene una concentración de 50 g en 1 litro de agua. Al momento de su utilización, las

UFC (unidades formadoras de colonias), pueden arrojar las siguientes características: “Colonias

grandes planoconvexa, mucoides, brillantes, forma irregular, también se observan redondeadas,

bordes ondulados, lactosa en gran cantidad, ya que consume el carbohidrato lactosa lo cual

acidifica el medio.” (Gil, 2015)

 OBJETIVOS:

Objetivo General:

- Comprender el concepto detrás del diseño de medios de cultivo: requerimientos

nutricionales y ambientales.

Objetivos Específicos:

- Preparar medios de cultivo sólido y medios de cultivo líquido.

- Identificar los diferentes tipos de agares nutritivos y sus concentraciones.

- Sembrar bacterias de griposos en dos medios de cultivos con el fin de observar la

existencia de estafilococos.

 MATERIALES Y METODOS:

 Los materiales fueron:

 Botellas de vidrio autoclavables con tapa

 Tubos de ensayo con tapa

 Papel aluminio

 Plancha caliente

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 Cajas Preti estériles (vidrio o plástico)

 Balanza analítica

 Espátulas de metal

 Desinfectante, alcohol al 70%

 Agar nutritivo

 Medio EC

 Agua destilada o ultra pura

 Autoclave.

Para el agar nutritivo:

 Extracto de carne, 3g

 Peptona, 5g

 Agar, 15g

 Agua destilada, 1L.

Para el caldo nutritivo:

 Extracto de carne, 3g

 Peptona, 5g

 Agua destilada, 1 L.

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METODOLOGÍA:

Lo primero que se debe hacer es identificar los diferentes agares y caldos nutritivos. Dentro del

laboratorio, existían 5 de estos, los cuales son: NUTRIENT AGAR, con una concentración de 28g

en 1 L de agua. MAC CONKEY AGAR, con 50g en 1L. BRAID PARKER AGAR, con 60g en

1L. NUTRIENT BROTH con una concentración de 8g en 1L. Y finalmente el MULLER HINTON

AGAR, con 38g por 1L de agua. Cada uno de estos agares se utilizó para crear medios de cultivos,

siguiendo la metodología correspondiente.

Agar Mac Conkey: Para este medio de cultivo, se relacionó el volumen de agua destilada utilizada

con la concentración designada de este agar, obteniendo lo siguiente:

50𝑔 𝑥 100𝑚𝐿
= 𝟓𝒈
1000 𝑚𝐿

Esta cantidad de masa medida cuidadosamente en la balanza, fue colocada en un matraz

Erlenmeyer junto con 100 mL de agua destilada. Los sobrantes de agar nutritivo, fueron removidos

con agua destilada hasta que no haya residuos. Después, con una varilla de vidrio se mezclaba la

solución hasta que se haga homogénea. Finalmente, se tomó 2/3 de la solución y se los colocó en

una caja Petri esterilizada, se tapó y se dejó reposar sin que haya formación de burbujas para

posteriormente pasar al autoclave.

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Agar nutritivo: la proporción de masa medida en este medio de cultivo fue la siguiente:

28𝑔 𝑥 100𝑚𝐿
= 𝟐, 𝟖𝒈
1000 𝑚𝐿

La masa fue colocada en un matraz Erlenmeyer junto con 100 ml de agua destilada, el sobrante

en el envase fue removido con agua destilada hasta que toda la masa quede contenida en el

matraz. Luego, se mezcló la solución hasta que no haya grumos y quede una mezcla homogénea.

Como siguiente paso, se colocó 2/3 de la mezcla en una caja Petri, dejándola reposar hasta al

autoclave.

Braid Parker Agar (para estafilococos): en este medio de cultivo se utilizó la siguiente

proporción:

60𝑔 𝑥 100𝑚𝐿
= 𝟔𝒈
1000 𝑚𝐿

Como en los anteriores medios de cultivo, se colocó la masa en un matraz junto con 100 mL de

agua destilada. Con el uso de la varilla de vidrio, se mezcló hasta confirmar la inexistencia de

grumos. Finalmente, se colocó 2/3 de la solución en una caja Petri sin dejar burbujas en su interior,

ya que esto es primordial en el autoclave.

Muller Hinton Agar: Aquí, se procedió a utilizar la siguiente cantidad de masa:

38𝑔 𝑥 100𝑚𝐿
= 𝟑, 𝟖𝒈
1000 𝑚𝐿

Primero, se colocó a la masa en un matraz Erlenmeyer con 100 mL de agua destilada. Luego, se

procedió a mezclar la solución hasta homogeneizarla, para así evitar los grumos. Para finalizar,

se colocó aproximadamente 20 mL de la mezcla en una caja Petri con el fin de que se proceda a

un autoclave.

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Caldo nutritivo: Para la preparación de este medio de cultivo se utilizó la siguiente porción del

mismo:

8𝑔 𝑥 100𝑚𝐿
= 𝟎, 𝟖𝒈
1000 𝑚𝐿

El procedimiento fue similar a los agares nutritivos, la diferencia radica en que se colocó

aproximadamente 7 mL de la solución en 5 tubos de ensayo respectivamente. Estos tubos de

ensayo fueron cerrados con tapones y puestos en el autoclave junto con los demás agares nutritivos.

Para el autoclave:

Este aparato sirve para eliminar contaminantes en los medios de cultivo, y funciona de la siguiente

manera: Primero, se deben colocar los medios de cultivos cubiertos completamente con papel

aluminio. El autoclave consta de 2 mangueras, por una de ellas entra agua destilada y vapor. Estos

dos componentes son importantes para la generación de presión y para evitar la formación de

incrustaciones. Luego, se precalienta hasta obtener la temperatura requerida, una vez obtenida la

temperatura, se espera 15 min, posterior a este tiempo, por la 2da manguera ingresa agua potable

para enfriar los agares y así termina el proceso de autoclave.

Para la siembra de bacterias de griposos: Luego de 3 días de elaborar los medios de cultivo, se

volvió al laboratorio para la siembra de bacterias. En dos de los medios de cultivo, se procedió a

colocar las bacterias extraídas de mucosa de dos compañeros que tenían gripe. Se tomó las

muestras con un aza previamente esterilizada con fuego, luego de esto, se colocó en forma de

zigzag dentro de los medios de cultivo en el caso de los agares, y para los caldos nutritivos, se

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sumergió el aza en cada uno de ellos. De esta manera, se realizó la siembra para una posterior

verificación de la existencia bacteriana.

 RESULTADOS Y DISCUSIÓN:

En la elaboración de los medios de cultivo, se obtuvo lo siguiente:

La gelificación de los agares nutritivos se dio de manear oportuna. Luego de 2 días de la

elaboración de los medios de cultivos, los agares estaban listos para la siembra, esto se debió a la

temperatura en la que se encontraban y también a un correcto autocalve. Por otro lado, los caldos

nutritivos se encontraban en estado líquido, pero listos para cultivar bacterias. Los agares y el

caldo, poseían colores y texturas características, debido a los nutrientes que cada uno tiene, además

de ello, las formas variaban y también su solidificación, esto se debe a los diferentes agares

utilizados.

En la siembra de griposos:

Lo observado en la siembra es muy interesante, en la mayoría de medios de cultivo se observó la

formación de pequeños gránulos agrupados, a eso se lo conoce como UFC o unidades formadoras

de colonias. En los caldos nutritivos tienen otro aspecto, las bacterias crean un biofilm en la

superficie de la solución. Algunos agares tienen más UFC que otros, esto se puede deber a la

cantidad de nutrientes o a la temperatura.

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 CONCLUSIONES:

 La práctica de laboratorio cumplió con los objetivos propuestos. Ya que aprendimos la

importancia de los medios de cultivos en la industria de la ciencia y la medicina. Partiendo

del estudio de bacterias, se puede determinar microorganismos patógenos que afectan a los

demás seres vivos.

 La elaboración de los medios de cultivos no solo dependen del agar o del caldo nutritivo

utilizado, sino de un proceso meticuloso en donde influyen muchos factores, ya sean

ambientales, físicos o químicos. En conclusión, gracias al cuidado y al seguimiento de la

guía de laboratorio se pudo elaborar los medios de cultivos de la manera más satisfactoria.

 Concluimos que el déficit de crecimiento de UFC´s en ciertos medios de cultivos, pueden

referirse a ciertos inconvenientes como: la temperatura, el pH, la presencia o ausencia de

gases, la humedad, la luz ambienta y la contextura del agar.

 BIBLIOGRAFÍA:

Gil, M. (14 de Junio de 2015). Morfología colonial bacteriana en medios de cultivo. Obtenido de
Estudiando microorganismos.: http://microbitosblog.com/2010/06/14/morfologia-colonial-
bacteriana/

Vázquez, A. (16 de Diciembre de 2014). Medios de cultivo, siembra de bacterias. Obtenido de SCRIBD:
https://es.scribd.com/document/250243041/Medios-de-Cultivo-Siembra-de-Bacterias

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 ANEXOS:

Ilustración 1. Baque, S. (2018). Agar Mac

Conkey. Micrbiología.

Ilustración 2. Baque, S. (2018). Preparación de caldo

nutritivo. Microbiología.

Ilustración 3. Baque, S. (2018). Diferentes Agares nutritivos y

medios de cultivo. Microbiología.
Ilustración 4. Baque, S. (2018). Añadidura de la mezcla en la
caja petri (Agar Mac Conkey). Microbiología.

Ilustración 5. Baque, S. (2018). Agares nutritivos

antes del autoclave. Microbiología.

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Ilustración 6. Baque, S. (2018). UFC. Microbiología.

Ilustración 7. Baque, S. (2018). Bacterias en

caldo nutritivo. Microbiología.

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