DETECCIÓN Y LOCALIZACIÓN DE CÁNCER POR PRUEBAS DE

SANGRE
Gerardo Adrián González Orozco
Matricula:182437
Universidad Autónoma de Ciudad Juárez

RESUMEN
La detección temprana es clave para reducir las muertes por cáncer. A continuación,
describimos una prueba de sangre que puede detectar ocho tipos comunes de cáncer
mediante la evaluación de los niveles circulantes de las proteínas y las mutaciones en el ADN
libre de células. Se aplicó esta prueba, llamada Búsqueda de Cáncer, a pacientes con
cánceres metastásicos detectados clínicamente, de ovario, hígado, estómago, páncreas,
esófago, colorrectal, de pulmón o de mama. pruebas Búsqueda de Cáncer fueron positivos
en una mediana de 70% de los ocho tipos de cáncer. Las sensibilidades van de 69 a 98%
para la detección de cinco tipos de cáncer (ovario, hígado, estómago, páncreas y esófago)
para los que no existen pruebas de detección disponibles para individuos con riesgo
promedio.

ABSTRACT

Early detection is key to reducing cancer deaths. Next, we describe a blood test that can detect
eight common types of cancer by evaluating circulating levels of proteins and mutations in
DNA. free of cells. This test, called Cancer Screening, was applied to patients with clinically
detected ovarian, liver, stomach, pancreas, esophagus, colorectal, lung or breast metastatic
cancers. The cancer screenings were positive in a median of 70% of the eight cancers.
Sensitivities range from 69 to 98% for the detection of five types of cancer (ovarian, liver,
stomach, pancreas and esophagus) for which there is no screening available for people at
average risk.

Introducción citología cervical.

El análisis de sangre solamente
ampliamente utilizado para la detección del
cáncer anterior se basa en la medición de
antígeno prostático específico, y todavía se
debate el uso apropiado de esta prueba.
Las pruebas aprobadas para la detección
de cáncer no son a base de sangre e
incluyen colonoscopia, mamografía y
Nuevos análisis de sangre para el cáncer
deben tener una especificidad muy
elevada; de lo contrario, demasiados
individuos sanos recibirán los resultados
positivos de la prueba, lo que lleva a los
procedimientos de seguimiento
innecesarios y ansiedad.
Los análisis de sangre que detectan

1
mutaciones somáticas biopsias líquidas
ofrecen la promesa de exquisita
especificidad, ya que se basan en las
mutaciones del gen de controlador que se
espera que se encuentra sólo en las
proliferaciones anormales de clonales.
Hasta la fecha, la gran mayoría de los
pacientes de cáncer evaluados con
biopsias líquidos mutation based tiene
enfermedad en estadio avanzado.
Además, ningún estudio ha examinado un
gran número de individuos de control
sanos, que es esencial para la evaluación
de la especificidad de estas pruebas. La
sensibilidad diagnóstica es también un
problema para biopsias líquidos.
La evidencia disponible indica que los
pacientes con cáncer en estadio temprano
pueden albergar menos de una molécula
molde mutante por mililitro de plasma, que
es a menudo más allá del límite de
detección de las tecnologías previamente
reportados que evalúan múltiples
mutaciones al mismo tiempo. Sin embargo,
otro problema con las biopsias de líquidos
es la identificación del tejido subyacente de
origen.
Debido a que las mismas mutaciones de
genes en coche múltiples tipos de tumores,
las biopsias líquidas basados en el análisis
genómico-solos generalmente no pueden
identificar la localización anatómica del
tumor primario.
Se describe aquí un nuevo análisis de
sangre, llamado Búsqueda de Cáncer, que
se ocupa de los problemas descritos
anteriormente. La prueba utiliza ensayos
combinados para alteraciones genéticas y
biomarcadores de proteínas y tiene la
capacidad no sólo para identificar la
presencia de cánceres relativamente
temprano, pero también para localizar el
órgano de origen de estos cánceres. Los
estudios iniciales demostraron que la
máxima sensibilidad de las pruebas
basadas en el ADN de plasma – biopsias
2
líquidos - estaba limitada para cánceres
localizados.
Un estudio posterior sugirió que la
combinación de cuatro biomarcadores de
proteínas con un marcador genético (
KRAS) podría mejorar la sensibilidad para
la detección de los cánceres.
Objetivo
-Es la detección de cáncer antes de que
hacen metástasis a sitios distantes.
-Diagnosticar por medio de una prueba de
sangre cáncer en alguna parte del cuerpo.
Metodología
Hemos tratado de generalizar este enfoque
mediante la evaluación de un panel de
marcadores de proteínas y genes que
podrían ser utilizados para detectar
muchos tumores sólidos en una etapa
antes de la aparición de metástasis
distantes.
Comenzamos mediante el diseño de una
reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
ensayo basado que podría evaluar
simultáneamente múltiples regiones de
genes de controladores que son
comúnmente mutado en una variedad de
tipos de cáncer.
En el diseño de esta prueba, nos
enfrentamos a cuatro retos. En primer
lugar, la prueba debe consultar un número
suficiente de bases para permitir la
detección de un gran número de cánceres.
miles En segundo lugar, cada base
consultada en la prueba debe ser
secuenciado de veces para detectar
mutaciones de baja prevalencia.
En tercer lugar, debe haber un límite en el
número de bases consultadas en la prueba
debido a que las más bases consultadas,
es más probable que las mutaciones de
artefactos serían identificadas, lo que
reduce la relación señal-ruido.
Cuarto, para la aplicación en un entorno de
cribado, la prueba debe ser rentable y
susceptibles de alto rendimiento, los
factores que limitan la cantidad de
secuenciación que puede ser realizado.
Para superar estos desafíos, se realizaron
búsquedas para el número mínimo de
amplicones cortos que nos permitan
detectar al menos una mutación del gen
conductor en cada uno de los ocho tipos de
tumores evaluados.
Utilizando los datos de secuenciación a
disposición del público, se encontró que
había una relación de ley de potencia
fraccional entre el número de amplicones
requeridos y la sensibilidad de detección,
con una meseta a ~ 60 amplicones.
Utilización de amplicones con
prueba de PCR
Una vez se alcanzó esta meseta, elevando
el número de amplicones no detectaría
sustancialmente más cánceres, pero
aumentaría la probabilidad de resultados
falsos positivos. Esta utilidad marginal
decreciente define el número óptimo de
amplicones.
Sobre la base de estos datos, se diseñó un
panel de 61amplicon, con cada amplicón
consulta de un promedio de 33 pares de
bases (pb) dentro de uno de los 16 genes
este panel podría detectar teóricamente
41% (hígado) a 95% (páncreas) de los
cánceres en el Catálogo de mutaciones
somáticas en el cáncer de conjunto
(cósmica) de datos.
Hemos sido capaces de detectar una
fracción más grande de los tumores de lo
previsto por el conjunto de datos COSMIC
porque el ensayo de secuenciación basada
en la PCR que utilizamos fue más sensible
para la detección de mutaciones que la
secuenciación convencional de todo el
genoma.
3
Sobre la base de este análisis del ADN de
tumores primarios, la predicha capacidad
de detección máxima de ADN circulante
tumor (ctDNA) en nuestro estudio varió
según el tipo de tumor, que van desde 60%
para los cánceres de hígado a 100% de los
cánceres de ovario.
Detección de mutación
Ya estructurado todo con este pequeño
pero robusto panel de los amplicones,
hemos desarrollado dos enfoques que
permitieron la detección de las mutaciones
raras espera que estén presentes en el
plasma ctDNA. En primer lugar, se utilizó
multiplex-PCR para etiquetar directamente
y de forma única cada molécula de plantilla
original con un código de barras de ADN.
Este diseño minimiza los errores
inherentes a la secuenciación masiva en
paralelo y hace un uso eficiente de la
pequeña cantidad de ADN libre de células
presente en el plasma. Además, hemos
dividido la cantidad total de ADN
recuperado a partir de plasma en múltiples
alícuotas y se lleva a cabo ensayos
independientes en cada réplica.
En efecto, esto disminuye el número de
moléculas de ADN por pocillo; sin
embargo, aumenta la fracción de cada
molécula mutante por pocillo, por lo que los
mutantes más fácil de detectar.
Debido a la sensibilidad de detección es a
menudo limitada por la fracción de alelos
mutantes en cada réplica, esta estrategia
de partición nos permitió aumentar la
relación señal a ruido e identificar las
mutaciones presentes en la prevalencia
más bajo que sea posible si todo el ADN de
plasma se evaluó a una vez.
El segundo componente de Búsqueda de
Cáncer se basa en biomarcadores de
proteínas. Estudios previos han
demostrado que una fracción importante de
una etapa temprana de tumores en estadio
no liberan cantidades detectables de
ctDNA, incluso cuando se utilizan técnicas
extremadamente sensibles para
identificarlos. Muchas proteínas
potencialmente útiles para la detección y el
diagnóstico de cáncer temprano se han
descrito en la literatura.
Búsqueda documentada
Se hicieron búsquedas en esta literatura
para encontrar proteínas que
anteriormente se había demostrado para
detectar al menos uno de los ocho tipos de
cáncer descritos anteriormente con
sensibilidad> 10% y especificidades> 99%.
Se identificaron 41 biomarcadores de
proteínas potenciales y les evaluó en
estudios preliminares en muestras de
plasma de individuos normales, así como
de pacientes con cáncer.
Pronostico
Se encontró que 39 de estas proteínas
podrían ser evaluados de manera
reproducible a través de una única
plataforma de inmunoensayo, y que luego
se usa esta plataforma para someter a
ensayo todas las muestras de plasma.
Ocho de las 39 proteínas demostrado ser
particularmente útil para discriminar
pacientes con cáncer de controles sanos.
Pruebas con pacientes
A continuación, utiliza Búsqueda de Cáncer
para estudiar pacientes que habían sido
diagnosticados con la etapa I a III cánceres
de ovario, hígado, estómago, páncreas,
esófago, colorrectal, de pulmón o de
mama. Ningún paciente recibió
quimioterapia neoadyuvante antes de la
recogida de muestras de sangre, y ninguno
tenía metástasis a distancia evidente en el
4
momento del ingreso al estudio. La edad
media al diagnóstico fue de 64 (22 Intervalo
de a 93). Los ocho tipos de cáncer fueron
elegidas porque son comunes en las
poblaciones y porque no hay pruebas de
sangre para su detección temprana son de
uso clínico habitual.
El escenario más común de presentación
fue de Comisión Conjunto sobre el Cáncer
(AJCC) en estadio II, que representa el
49% de los pacientes, con el resto de las
pacientes que alberga el estadio I (20%) o
(31%) enfermedad en estadio III. El número
de muestras por fase para cada uno de los
ocho tipos de tumores. La cohorte de
control sano consistió en individuos de
mediana edad 55 (rango 17 a 88) sin
antecedentes conocidos de cáncer,
displasia de alto grado, enfermedad
autoinmune, o la enfermedad renal crónica.
Búsqueda de Cáncer evalúa niveles de ocho
proteínas y la presencia de mutaciones en
1.933 distinta genómicas posiciones; cada
posición genómica podría ser mutado de
varias maneras (sustituciones de una sola
base, inserciones o deleciones).
La presencia de una mutación en un gen
ensayado o una elevación en el nivel de
cualquiera de estas proteínas podrían
clasificar a un paciente como positivo. Por
consiguiente, era imperativo el uso de
métodos estadísticos rigurosos para
asegurar la exactitud de la prueba.
Utilizamos tasas de registro para evaluar
las mutaciones y los incorporó en un
algoritmo de regresión logística que tuvo en
cuenta tanto los datos de mutación y los
niveles de biomarcadores de proteínas
para anotar los resultados de las pruebas
(material complementario). Las
sensibilidades y especificidades de medias
se determinaron por 10 interacciones de
crossvalidations de 10 veces.
El receptor curvas características de
funcionamiento (ROC) para toda la cohorte
de pacientes con cáncer y controles en una
interacción representativo.
La sensibilidad mediana de Búsqueda de
cáncer entre los ocho tipos de cáncer
evaluados fue 70% ( P < 10 - 96 unilateral
prueba binomial) y osciló entre 98% en
cánceres de ovario a 33% en cánceres de
mama. En esta sensibilidad, la
especificidad 99%; sólo 7 de los 812
individuos sin cáncer conocidos calificó
como positivo.
No podemos estar seguros de que los
pocos falsos positivos - pruebas a
individuos identificados en la cohorte
saludable en realidad no tienen un cáncer,
que aún sin ser detectado, pero ellos
clasificar como falsos positivos proporciona
el enfoque más conservador a la
clasificación e interpretación de los
datos. Las características de la prueba que
eran más importantes para el algoritmo
fueron la presencia de una mutación ctDNA
seguido de elevaciones de antígeno de
cáncer 125 (CA-125), antígeno
carcinoembrionario (CEA), antígeno de
cáncer 19-9 (CA19-9), prolactina (PRL),
factor de crecimiento de hepatocitos
(HGF), osteopontina (OPN),
mieloperoxidasa (MPO), y el inhibidor
tisular de las metaloproteinasas de 1
(TIMP-1) los niveles de proteína.
por cada una de las características ctDNA
y de proteínas utilizadas en Búsqueda de
cáncer ilustran su distribución entre
individuos con y sin cáncer.
Manejo de la prueba Búsqueda de
cáncer
Una de las limitaciones de las biopsias de
líquidos es su incapacidad para determinar
el tipo de cáncer en los pacientes que dan
positivo, lo que plantea desafíos para el
seguimiento clínico.
Para examinar si la prueba Búsqueda de
5
cáncer puede ayudar a identificar un
cáncer de tejido de origen, se utilizó la
máquina de aprendizaje supervisado para
predecir el tipo de cáncer subyacente en
pacientes con pruebas positivas Búsqueda
de cáncer. El algoritmo de entrada tuvo en
cuenta los niveles ctDNA y biomarcadores
proteína, así como el género de los
pacientes (materiales suplementarios).
Uno de los propósitos principales de este
tipo de predicciones es determinar la
prueba de seguimiento más adecuado para
el diagnóstico o la monitorización del
cáncer después de una prueba Búsqueda
de cáncer positivo. Por lo tanto, agrupamos
los pacientes con cánceres esofágicos y
gástricos debido a la endoscopia sería el
óptimo seguimiento en ambos casos.
Técnica utilizada
En esta investigación se utilizó la técnica
PCR-múltiplex con amplicones
• En una sola reacción de PCR se
amplifican al mismo tiempo 2 o más genes
• Condiciones similares de PCR para los
genes amplificar:
-Desnaturalización
-Alineamiento
-Extensión
• Se emplean más de 1 par de primers (fw
y rv; 1 par por cada gen)
Primers para PCR múltiplex
(características)
• Específicos para cada gen
• No hibridar en zonas donde no se
requiere sobre todo en zonas del otro gen
a amplificar
• No hibridar entre ellos
Sea diseñado un análisis de sangre de
múltiples análisis que puede detectar la
presencia de ocho tipos de tumores sólidos
comunes.
La ventaja de combinar completamente
diferentes agentes, con distintos
mecanismos de acción, se reconoce
ampliamente en terapéutica, pero no se ha
aplicado de forma rutinaria para el
diagnóstico.
Se combinaron los biomarcadores de
proteínas con biomarcadores genéticos
para aumentar la sensibilidad sin disminuir
sustancialmente la especificidad. Otros
biomarcadores de cáncer – tales como
metabolitos, transcritos de ARNm,
miRNAs, o secuencias de ADN metilado -
se podría combinar de forma similar para
aumentar la sensibilidad y la localización
del sitio del cáncer.

Tales pruebas de múltiples analitos no

están destinadas a sustituir a otras pruebas
de detección no basados en la sangre,
tales como los de mama o cáncer
colorrectal, pero para proporcionar
información adicional que podría ayudar a
identificar a los pacientes con más
probabilidades de albergar un tumor
maligno.
A continuación, se presentan pruebas que
realizaron algunos científicos para poder
determinar el tipo de cáncer que se
presenta en cada paciente
Fig. 1. Desarrollo de un ensayo basado en
PCR para identificar mutaciones
específicas del tumor en muestras de
plasma. curvas de color indican la
proporción de cánceres de los ocho tipos
evaluados en este estudio que se pueden
detectar con un creciente número de
amplicones (40 pb <) cortos. La
sensibilidad de la detección aumenta con el
número de amplicones, pero mesetas en ~
60 amplicones. Los puntos de colores
indican la fracción de los cánceres
detectados mediante el panel de 61-
amplicón usado en 805 cánceres
evaluados en nuestro estudio, que
promedió 82%. Públicamente datos de
secuenciación disponibles se obtuvieron
del repositorio cósmico. (et B. V., 2013)

6
 Conclusión
Puedo decir que algunos científicos
realizaron algunas pruebas con pacientes
y ellos miraron Varias limitaciones del
estudio. En primer lugar, los pacientes en
nuestro estudio estaban compuesto por
individuos con cánceres conocidos, la
mayoría diagnosticados sobre la base de
los síntomas de la enfermedad.

Aunque ninguno de nuestros pacientes

tenía enfermedad metastásica
clínicamente evidente en el momento de
ingresar al estudio, la mayoría de los
individuos en un verdadero contexto de
cribado tendría una enfermedad menos
avanzada, y la sensibilidad de detección
es probable que sea menor que informó
Fig. 2. Rendimiento de Búsqueda de
aquí.
cáncer. El punto rojo en la curva indica la
prueba rendimiento medio (62%) a> 99%
En segundo lugar, nuestros controles se
de especificidad. Las barras de error
limitan a individuos sanos, mientras que en
representan intervalos de confianza del
un cierto contexto de cribado del cáncer,
95% de sensibilidad y especificidad en este
algunos individuos pueden tener
punto particular. El rendimiento mediano
enfermedades inflamatorias o de otro tipo,
entre los ocho tipos de cáncer evaluados
lo que podría resultar en una mayor
fue de 70%. (SEGUNDO) La sensibilidad
proporción de resultados falsos positivos
de Cancer por etapa. Las barras
que las observadas en nuestro estudio. En
representan la sensibilidad media de los
tercer lugar, aunque con múltiples veces la
ocho tipos de cáncer, y las barras de error
validación cruzada es una técnica
representan los errores estándar de la
poderosa y ampliamente utilizado para la
media. ( DO) Sensibilidad de Búsqueda de
demostración de la sensibilidad y
cáncer por tipo de tumor. Las barras de
especificidad robusta en una cohorte de
error representan intervalos de confianza
este estudio escala, que no fueron capaces
del 95%.
de utilizar un conjunto completamente
independiente de los casos de prueba, lo
que habría sido óptima.

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