INFORME DE PRÁCTICA DE CAMPO Y/O VINCULACIÓN EMPRESARIAL

1. GENERALIDADES DE LA PRACTICA
1.1. INFORMACIÓN GENERAL
DOCENTE RESPONSABLE : DRA. GLORIA FABIOLA MIELES SORIANO, MSc.
CARRERA (S): MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA
ASIGNATURA (S): LABORATORIO CLÍNICO I
FECHA: 24 DE SEPTIEMBRE DEL 2018
HORA DE INICIO: GRUPO 1: 12:30 a 13:30
SEMESTRE (S): DÉCIMO
PARALELO (S): B
1.2 INFORMACIÓN DE LA PRÁCTICA
 INTRODUCCIÓN.
TEMA 2.- DETERMINACIÓN DE LA ENZIMA ALT
 OBJETIVO GENERAL DE LA PRÁCTICA.
Adquirir destrezas y habilidades en la técnica de determinación de la enzima ALT
 OBJETIVOS ESPECIFICOS DE LA PRÁCTICA.
Conocimiento de la técnica para determinar la enzima ALT
 METODOLOGÍA

La enzima se encuentra en el hialoplasma de todas las células y existe una relación lineal entre la GPT
hepática y el peso del animal. La determinación de GPT es casi específica del hígado del perro y el gato,
mientras que es de escaso o de ningún valor en las enfermedades de bovinos y equinos. Se ha encontrado
muy elevada en la necrosis hepática.
Es una enzima muy estable, y en estado de congelación se conserva largo tiempo. La ictericia no estorba
la determinación de la enzima, pero debe evitarse la hemólisis.
Las enfermedades hepáticas que producen niveles elevados de GPT comprenden neoplasias malignas,
cirrosis y hepatitis, incluyendo la que se produce en el perro por el virus de la hepatitis canina infecciosa
(HCI)
MUESTRA.
Suero, plasma con EDTA.
CONDICIONES.
El animal debe tener un "ayuno" de 8 horas como mínimo.
EXPRESIÓN DE RESULTADOS se expresan en U/L.
FUNDAMENTO
La alanina aminotransferasa (ALT/GPT) cataliza la transferencia del grupo amino de la alanina al
cetoglutarato con la formación de glutamato y piruvato. Este último es reducido a piruvato por la lactato
deshidrogenasa (LDH) en presencia de nicotinamido adenin dinucleótido reducido (NADH).
La reacción se controla cinéticamente a 340 nm a través de la disminución de la absorbancia resultante
de la oxidación del NADH a NAD+, proporcional a la actividad ALT en la muestra.
L-Alanina + 2-Cetoglutarato ALT/GPT L-Glutamato + Piruvato
Piruvato + NADH + H+ LDH Lactato + NAD+
COMPOSICION DE LOS REACTIVOS
R1.- Sustrato ALT. Tampón TRIS 150 mmol/L pH 7,3, L-alanina 750 mmol/L, lactato deshidrogenasa
> 1350 U/L.
R2.- Coenzima ALT. NADH 1,3 mmol/L, 2-cetoglutarato 75 mmol/L. Biocidas.

PREPARACION DE LOS REACTIVOS

Reactivo de trabajo. Mezclar 4 mL de R1 + 1 mL de R2. Estable durante 4 semanas a 2-8ºC. Resguardar

de la luz.

MUESTRAS
Suero, plasma heparinizado u obtenido con EDTA, libre de hemólisis.
La ALT es estable en suero o plasma 24 horas a temperatura ambiente y hasta 1 semana a 2-8ºC.

INTERFERENCIAS
Lipemia (intralipid >15 g/L) no interfiere.
Bilirrubina (>30 mg/dL) no interfiere.
Hemoglobina (>10 g/L) no interfiere.
Otros medicamentos y sustancias pueden interferir.

EQUIPO ADICIONAL
Fotómetro o espectrofotómetro con compartimiento de medición termostatado a 30/37ºC, para leer a 340
nm.
Cronómetro, registrador gráfico o impresora.
Cubetas de 1-cm de paso de luz.
Pipetas de volumen variable para reactivos y muestras.

TÉCNICA
1.- Preincubar el reactivo de trabajo, muestras y controles a la temperatura de reacción.
2.- Ajustar a 0 el fotómetro con agua destilada.
3.- Pipetear en una cubeta:
Reactivo de trabajo 1,0 mL
Muestra o control 50 μL
4.- Mezclar suavemente por inversión. Insertar la cubeta en el compartimiento termostatado del
instrumento y poner el cronómetro en marcha.
5.- Incubar durante 1 minuto, y anotar la absorbancia inicial.
6.- Repetir las lecturas exactamente a los 1,2 y 3 minutos.
7.- Calcular la diferencia entre absorbancias.
8.- Calcular el promedio de los resultados para obtener el cambio promedio en absorbancia por minuto
(ΔA/min).
CÁLCULOS
U/L = ΔA/min x 3333 (37ºC)
U/L = ΔA/min x 1746 (30ºC)
Muestras con ΔA/min superiores a 0,160 a 340 nm deben diluirse 1:10 con solución salina y repetir el
ensayo. Multiplicar los resultados por 10.
Para expresar los resultados en unidades SI aplicar:
U/L x 0,01667 = μkat/L
PARAMETROS DE ALT
CANINO FELINO BOVINO EQUINO
ALT(U/L) 14-151 26-128 11-47 3-60

2. RESULTADOS DE LA PRÁCTICA.

Los estudiantes conocieron la técnica empleada para la determinación de la enzima ALT.

2.1. ASISTENCIA ESTUDIANTIL.
ALUMNOS INSCRITOS EN EL SEMESTRE 27
ALUMNOS ASISTENTES A LA PRÁCTICA. 9
TASA DE ASISTENCIA 100 %

2.2. RESULTADOS DE APRENDIZAJE EN LA PRÁCTICA

Reconoce la técnica a emplear para la determinación de la enzima ALT y determinar los parámetros de
la misma

2.4. CONCLUSIÓN.

Se pudo conocer la técnica a emplear para la determinación de la enzima ALT.

 3. RÚBRICA

Problema: 1 2 3 4
Conoce las normas
No conoce las
establecidas para la Conoce las normas Conoce las normas
normas establecidas Conoce las normas establecidas
determinación de establecidas para la establecidas para la
para la para la determinación de las
las diferentes determinación de las determinación de las
determinación de las diferentes pruebas
pruebas diferentes pruebas diferentes pruebas
diferentes pruebas bioquímicas en un 50 %
bioquímicas. bioquímicas en un 25 % bioquímicas en un 100 %
bioquímicas.
Conoce las técnicas No conoce las
Conoce las técnicas Conoce las técnicas Conoce las técnicas
establecidas para la técnicas establecidas
establecidas para la establecidas para la establecidas para la
determinación de para la
determinación de las determinación de las determinación de las
las diferentes determinación de las
diferentes pruebas diferentes pruebas diferentes pruebas
pruebas diferentes pruebas
bioquímicas en un 25 % bioquímicas en un 50 % bioquímicas en un 100 %
bioquímicas bioquímicas
Aplica las técnicas No aplica las
Aplica las técnicas Aplica las técnicas Aplica las técnicas
establecidas para la técnicas establecidas
establecidas para la establecidas para la establecidas para la
determinación de para la
determinación de las determinación de las determinación de las
las diferentes determinación de las
diferentes pruebas diferentes pruebas diferentes pruebas
pruebas diferentes pruebas
bioquímicas en un 25 % bioquímicas en un 50 % bioquímicas en un 100 %
bioquímicas bioquímicas

4. ANEXOS

1. EVIDENCIA FOTOGRÁFICA.

IMAGEN No. 1 IMAGEN No. 2

Observación de la técnica de determinación de ALT Observación de la técnica de determinación de ALT
 IMAGEN No. 3 IMAGEN No. 4
Vídeo de determinación de enzima ALT Observación del procedimiento para
determinar ALT

2. LISTADO DE ALUMNOS ASISTENTES QUINTO CURSO B

NOMBRE Y APELLIDO CÉDULA FIRMA
Arana Jocelyne 0950806125
Bustos Washington 0951713635
Brocell Sebastián 0929541498
Cabrera Daniela 0921460893
Banchon Adrián 0925447393
Cárdenas Andrea 0954197738
Calle Elizabeth 0930207328
Avilés Néstor 0853222775
Bonilla Luis 1203057487