UNIVERSIDAD DE CÓRDOBA LABORATORIO DE

BIOQUÍMICA PRACTICA Nº 4 PRUEBAS CUALITATIVAS

PARA CARBOHIDRATOS
Carlos Paternina, Jaime Bustamante, José Daza, Aníbal Rodríguez
RESUMEN:
En esta práctica se realizó la identificación de los diferentes
carbohidratos, la soluciones a estudiar fueron distintos carbohidratos ej;
(lactosa, sacarosa, glucosa…) en las cuales se utilizaron diferentes
pruebas que se basan en la reactividad de los grupos funcionales
carbonilo e hidroxilo que hacen parte de estos y les confieren la base
para la mayoría de las reacciones usadas para su identificación y su
respectivo análisis, en cada demostración se obtuvo resultados
positivos y en otros negativos, se tuvo en cuenta algunas propiedades
fisicoquímicas y según esto se determina la reacción para la
determinación de los carbohidratos.
INTRODUCCIÓN:
Los carbohidratos ‘’son compuestos que contienen cantidades grandes
de grupos hidroxilo. Los carbohidratos más simples contienen una
molécula de aldehído a estos se los llama polihidroxialdehidos o una
cetona (polihidroxicetonas). Todos los carbohidratos pueden ser como
monosacáridos, oligosacáridos o polisacáridos’’ (GONZALES & ARIAS,
2012,p.2)
Los carbohidratos ‘’se pueden clasificar como aldosas y cetosas, según
posean la función aldehído (‒CHO) o cetona (‒CO); además en su
estructura poseen grupos hidroxilo (‒OH) ’’ (ESPINOSA, 2013,p.21).
De acuerdo con lo anterior por medio de este informe se pretende
identificar los carbohidratos por los cambios que se dieron en las
sustancias al ser mezcladas almidón, fructosa, y sacarosa, haciendo
referencia a estos como fuentes de carbohidratos, para luego al
aplicarles los reactivos como el lugol que permitieron identificar y
comprobar los principales tipos de carbohidratos al que pertenecían
cada una de las mezclas, si fueron monosacáridos, disacáridos o
polisacáridos, y así verificar si fueron positivos o negativos teniendo en
cuenta los colores que se adquirieron en cada una de las sustancias y
cuando fueron expuestas al calor con el baño maría. Existen muchos
tipos de carbohidratos ‘’ se encuentran principalmente en los alimentos
tipo almidón, como el pan, fideos y arroz, así como en algunas bebidas
endulzadas con azúcares. La principal función es proporcionar energía,
también desempeñan una función importante para la estructura y el
funcionamiento de las células, tejidos y órganos’’ (JARAMILLO,
BORBOR, GARCIA, & JOHN GONGORA, 2013,p.2).
MATERIALES Y REACTIVOS
Estufa o calentador Pipetas de 5 y de 10ml Beakers de 100 y 400ml 10
tubos de ensayo Pinza para tubos de ensayo Gradilla Gotero Papel
tornasol Soluciones de: glucosa, galactosa, ribosa, arabinosa,
sacarosa, lactosa, fructosa, almidÛn, leche (traer de la casa) SoluciÛn
de yodo. Reactivo de Molish Acido sulf˙rico concentrado Reactivo de
Benedict Reactivo de Barfoed Reactivo de Bial Reactivo de Selliwanoff
Alcohol Amilico Acido clorhÌdrico concentrado HidrÛxido de sodio.
Teoría relacionada
Los carbohidratos, o las azúcares, son una gran parte de nuestra dieta.
Son las fuentes principales de la energía para los seres humanos. Los
carbohidratos están presentes en nuestro pan, granos, fruta, y la
mayoría de los otros alimentos que comemos. Son polímeros y
compuesto de monómeros. 1También se encuentran en las partes
estructurales de los vegetales y también en los tejidos animales, como
glucosa o glucógeno. Estos sirven como fuente de energía para todas
las actividades celulares vitales.
Los carbohidratos están formados principalmente por 3 elementos
(hidrogeno, oxígeno y carbono) y su fórmula general es (CH2O)6.
 Monosacáridos: 2Llamados también azúcares simples. Son los
azúcares más sencillos, no se hidrolizan y contienen de 3 a 6 átomos
 de carbono (desde triosas hasta hexosas). Los más importantes son
la glucosa, la sacarosa, xilosa y fructosa.3
 Oligosacáridos: Son polímeros de monosacáridos que se pueden
hidrolizar produciendo un bajo número de monosacáridos.
Comprenden desde disacáridos hasta hexasacáridos.
 Polisacáridos: Son compuestos formados por la unión de muchos
monosacáridos. Se hidrolizan produciendo muchas moléculas de
monosacáridos. 1

PRUEBA DE MOLISH: Es una reacción general para carbohidratos que

contienen más de 5 átomos de carbono. La aparición de un anillo
violeta-rojizo en el sitio de contacto de los dos líquidos, indica que la
muestra contiene carbohidratos
PRUEBA DE BENEDIT: Es una prueba específica para las sustancias
reductoras con grupos carboxilos libres. La aparición de un precipitado
verde, amarillo o rojo indica la presencia de un azúcar reductor. La
reacción o prueba de Benedict identifica azúcares reductores (aquellos
que tienen su OH anumérico libre
REACCIÓN DE BARFOED.
Sirve para distinguir monosacáridos reductores de disacáridos
reductores, basándose en la velocidad de reacción; en los
monosacáridos la formación del óxido cuproso es más rápido que en los
disacáridos. Este reactivo se compone de
Es un ensayo químico utilizado para detectar monosacáridos. Esta
prueba fue descrita por primera vez por el químico danés Christen
Thomsen Barfoed1 y se utiliza principalmente en botánica. El reactivo
de Barfoed se compone de una solución de 0.33 molar de acetato de
cobre neutro en una solución de 1% de ácido acético. No es
recomendable guardar el reactivo, sino prepararlo previamente a su
uso.
PRUEBA DE BIAL Es una prueba química para la presencia de
pentosas. Los componentes incluyen orcinol, ácido hidroclórico, y
cloruro férrico. Que En presencia de una pentosa, el pentosoma será
deshidratado para formar furfural. La solución dará muestra azulada.
Reacción de Seliwanoff: La prueba de Seliwanoff es una prueba
química que se usa para distinguir entre aldosas y cetosas. Los
azúcares son distinguidos a través de su función como cetona o
aldehído. Si el azúcar contiene un grupo cetona, es una cetosa, y si
contienen un grupo aldehído, es una aldosa. Esta prueba está basada
en el hecho de que, al calentar las cetosas son deshidratadas más
rápido que las aldosas.
Los carbohidratos se clasifican como cetosas o aldosas. Vale decir, que
las cetosas en el carbono 2 tienen una función cetona, que en presencia
de un ácido fuerte producen rápidamente derivados sulfúricos que
reaccionan con un difenol llamado resorcina que está contenido en el
reactivo de Seliwanoff.
PRUEBA DE SACAROSA: La sacarosa es un DISACARIDO de
glucosa y fructosa, unidas por un enlace O-glucosídico (tiene forma de
éter, R--O--R'), que lo convierte en un azúcar no reductor. Por tal razón
El ácido clorhídrico (HCl) cataliza irreversiblemente la ruptura de este
enlace, así que los productos que se obtienen son glucosa y fructosa en
disolución. Por otra parte, HCl también cataliza la apertura de las formas
anilladas en que se encuentran la glucosa y la fructosa, devolviéndolas
a su forma lineal abierta.
Análisis y discusión de resultados
1.

AL REALIZAR LA PRUEBA DE MOLISH, LA CUAL CONSISTE EN

AGREGAR 5 GOTAS DEL REACTIVO A 1ML DE CARBOHIDRATO,
(EN ESTE CASO LECHE, EL CUAL SE ENCUENTRA EN UN TUBO
DE ENSAYO) Y, POSTERIOR A ESTO SE LE AGREGA 1 ML DE
H2SO4 A LA SOLUCIÓN INICIAL, SE LOGRÓ IDENTIFICAR LA
PRESENCIA O NO DE CARBOHIDRATOS.
Tabla número 1, resultado para la prueba de molish
PRUEBA DE MOLISH, IDENTIFICACIÓN Y
RECONOCIMIENTO DE CARBOHIDRATOS
IDENTIFICACION DE
CARBOHIDRATOS
CARBOHIDRATOS COLOR POSITIVO NEGATIVO
LECHE VIOLETA X

Esta prueba es un ensayo para reconocimiento general de

carbohidratos la cual permite detectar la presencia de hidratos
de carbono en una muestra; está basada en la formación de
furfural o derivados de éste (originado por los ácidos
concentrados que provocan una deshidratación de los azúcares)
a partir de los carbohidratos para obtener el furfural que se
combina con el -naftol sulfonato originando un complejo púrpura.
También sirve para el reconocimiento general de carbohidratos
donde polisacáridos y disacáridos se hidrolizan formando
monosacáridos formando un color púrpura violeta.(Díaz et al.,
2009.

2. Prueba de Benedict
Al llevar a cabo el procedimiento de la prueba de Benedict, el
cual consiste en agregar 0.5ml del reactivo a cada una de las
muestras a analizar, (lactosa, glucosa y sacarosa), las cuales
están contenidas sus respectivos tubos de ensayo,
posteriormente se llevan los tubos a un baño de maría. A partir
de la información obtenida en el “experimento” logramos
 dictaminar si había o no presencia de carbohidratos y, además
identificar a aquellos carbohidratos reductores y no reductores.

Tabla número 2, resultados para la prueba de Benedict

RECONOCIMIENTO DE AZUCARES REDUCTORES

IDENTIFICACION DE
AZUCARES
REDUCTORES
CARBOHIDRATOS COLOR POSITIVO NEGATIVO
Sacarosa No --------------- ---------------
reaccionó
Lactosa Verde X
azuloso
Glucosa Verde X
marino
sucio y
opaco

OBS: identificamos a la glucosa y a la lactosa como carbohidratos

reductores. Esta ración dio positiva para la lactosa y glucosa porque en el
medio alcalino facilita que el azúcar esté de forma lineal, puesto que el azúcar en
solución forma un anillo de piranósico o furanósico. Una vez que el azúcar está
lineal, su grupo aldehído que tiene un oh libre que puede reaccionar con el ion
cúprico en solución; en la sacarosa, no dan positivo puesto que sus OH
anoméricos están siendo utilizados en el enlace glucosídico.

En resumen, se habla de azúcares reductores cuando tienen su OH anomérico

libre, y éstos son los que dan positivo en la prueba de Benedict.

En química, la reacción o prueba de Benedict identifica azúcares

reductores (aquellos que tienen su OH libre del C anomérico),
como la lactosa , la glucosa, la maltosa, y celobiosa. En
soluciones alcalinas, pueden reducir el Cu2+ que tiene color azul
a Cu+, que precipita de la solución alcalina como Cu2Ode
color rojo-naranja.
3. PRUEBA DE BARFOED
Se realizó el procedimiento de la prueba de Barfoed,
adicionando 0.5ml del reactivo a cada una de las muestras
contenidas en los distintos tubos de ensayo, luego se llevó a
hervir por un lapso de 2 minutos, al final el procedimiento de
pudo constatar cuál de estas muestran presenta presencia de
carbonos hidratados y además evidenciar si existe o no la
presencia de monosacáridos.
Tabla número 3, resultados para la prueba de BARFOED
DISTINGUIR MONOSACARIDOS DE DISACARIDOS

IDENTIFICACION DE
MONOSACARIDOS
CARBOHIDRATOS COLOR POSITIVO NEGATIVO
Galactosa Precipitado x
rojizo
Ribosa Rojo ladrillo x
Almidón No x
reaccionó

En la prueba de Barfoed la reacción es positiva para la

galactosa y ribosa, porque al utilizar acetato cúprico y ácido
acético con lo que solo los monosacáridos son capaces de
reducir el cobre, formando así un precipitado rojo ladrillo, en
tanto que el almidón es un disacárido que tienen menor poder
de reductor al tener comprometido uno de sus carbonos
anumérico en el establecimiento del enlace glicosídico, no
reaccionan y por lo tanto dan un resultado negativo.

4. Prueba de Bial
Se procedió a realizar la prueba de Bial, la cual consiste en
agregar 0.5ml del reactivo a cada uno de los tubos de ensayo
que contienen las muestras, (ribosa, arabinosa y almidón) luego
se llevaron cada una de la muestras al baño de maría pa
posteriormente adicionarle 1ml de alcohol etílico a cada una de
las muestras. Esto nos permitió observar cada uno de los
 cambios y por supuesto determinar la presencia de
carbohidratos y/o pentosas

Tabla número 4, resultados para la prueba de Bial

DETERMINAR LA PRESENCIA DE PENTOSAS

IDENTIFICACION DE
PENTOSAS
CARBOHIDRATOS COLOR POSITIVO NEGATIVO
Arabinosa Azul x
verdoso
Ribosa Azul x
verdoso
Almidón No x
reaccionó

En el laboratorio la prueba de bial al calentarse con el acido

clorhídrico, formo forfural que se condensa con orcinol en
presencia de iones férricos, esto cedió con la ribosa y arabinosa
por ser pentosas que reaccionaron con este reactivo arrojando
una coloración azul verdoso (positivo), en el caso del almidón
como tiene más de 5 carbono siendo así un polisacárido dio
negativo porque no reacciona con esta prueba.

5. PRUEBA DE SALIWANOF
Procedimos a realizar la prueba de saliwanof, la cual consiste en
agregar 1ml del reactivo a cada una de las muestras, (fructosa,
arabinosa, glucosa) y luego llevar las muestras a baño de maría
por un lapso de 3 minutos, procedimos a observar y analizar los
resultados obtenidos, esto nos ayudó a determinar si en las
muestras anteriormente mencionadas existe alguna de ellas que
contenga presencia de cetosas.

Tabla número 5, resultados para la prueba de Saliwanof

DETERMINAR LA PRESENCIA DE CETOSAS
 IDENTIFICACION DE
CETOSAS
CARBOHIDRATOS COLOR POSITIVO NEGATIVO
Arabinosa
Fructosa Rojo x
intenso
Glucosa Rojo tenue x

La fructosa da positiva porque pertenece al grupo cetona y

como Esta prueba es específica para cetosas y se basa en la
conversión de la cetosa en 5-hidro-metil-furfural y su posterior
condensación con resorcinol formando así complejos coloreados
rojo o rosado.
La razón por que dio negativo en la glucosa es sencillo porque
esta pertenece al grupo aldehído de esta forma no puede
reaccionar con esta reacción.

6. Prueba de la sacarosa
Agregamos 3ml de sacarosa en un tubo de ensayo, al cual se llevó
por un lapso de 5 minutos a baño de maría y luego le adicionamos
5 gotas de NaOH, para posteriormente dividir la muestra en dos
tubos de ensayos distintos (a y b) a la muestra contenida en el tubo
“a” se le adicionó reactivo de benedit y a la muestra contenida en el
tubo “b” se le adicionó el reactivo de saliwanoff, finalmente se
procedió a observar y analizar los resultados
Tabla número 6, resultados para la prueba de Sacarosa
DETERMINAR LA PRESENCIA DE AZUCARES

IDENTIFICACION DE
AZUCARES
CARBOHIDRATOS COLOR POSITIVO NEGATIVO
Sacarosa + Azul x
Benedict
Sacarosa + No x
Seliwanoff reaccionó
 Obteniendo así La hidrólisis que da como resultado la obtención de
glucosa que es una albosa y azúcar reductor y fructosa que es una
cetosa. Por esto las pruebas de Benedict da positiva por que
reacciona con la glucosa de la sacarosa y Seliwanoff porque
reacciona con el grupo cetosa de la fructosa.

CONCLUSION: En este experimento pudimos observar diferentes

formas para identificar la presencia de carbohidratos en una
muestra mediante reacciones químicas con diferentes reactivos, y
evaluando los resultados positivos o negativos identificamos los
diferentes tipos de sacáridos de acuerdo a la reacción a la que se
refería, y diferenciamos las distintas reacciones en base al
fundamento en que se basan las mismas.
En si se logró reconocer los carbohidratos por medio de reacciones
coloreadas de carácter cualitativo y así diferenciar Hexosas de
pentosas, aldosas de cetosas e identificar azucares reductores y no
reductores con la respectiva prueba.

• Mediante la reacción de Benedict pudimos identificar azucares

reductores y comprobar que la reducción que se lleva a cabo es
por la presencia del grupo aldehído.
• Se debe tener muy clara las estructuras de los carbohidratos y la
función de cada uno de los reactivos para poder saber cuál
reaccionara y cual no; como en el caso de la sacarosa con el
reactivo de Benedict que arrojó un resultado positivo pero que
teóricamente y mirando su estructura daba negativo ya que esta
carece de carbonos anuméricos libres.
• Gracias a esta práctica se logró comprender e identificar de
manera cualitativa los comportamientos de cada carbohidrato y la
manera cómo reaccionan, las pruebas de Acción reductora nos
ayudaron a seleccionar los carbohidratos reductores a partir de la
coloración rojiza que obtuvieron.
 Se concluye que el reactivo de Barfoed no solo identifica
azúcares monosacáridos sino que también ayuda a diferenciar
entre monosacáridos o disacáridos, la glucosa que es un
monosacárido reaccionó rápidamente

Bibliografía
http://html.rincondelvago.com/carbohidratos_1.html
http://www.eufic.org/upl/1/es/doc/carbohydrates_es.pdf
ESPINOSA, H. N. (2013). ACADEMIA. Recuperado el 4 de OCTUBRE de 2016,
de https://classroom.google.com/u/2/c/MTYxNjA4Njk0OVpa
CONN, E y Stumpf, P.K. Bioquímica F.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
1. Escriba cada una de las reacciones en las diferentes pruebas
para carbohidratos.
2. Explique los resultados de cada una de las pruebas realizadas?
3. Explique estructuralmente, porque la maltosa es un azúcar
reductor y por qué el almidón no lo sus observaciones
4. Consulte las enfermedades producidas por el mal metabolismo
de los carbohidratos.
5. ¿Por qué la celulosa a pesar de estar formada por moléculas de
glucosa es insoluble en agua?
6. ¿por qué la sacarosa es un azúcar no reductor? Consulte las
posibles estructuras de las muestras problemas.
La sacarosa no es un agente reductor, no forma osazonas Esto es porque el enlace
involucra el primer carbono de la glucosa y el segundo carbono de la fructosa, y no
queda grupos reductores disponibles. Cuando la sacarosa es hidrolizada, los
productos tienen una acción reductora

7. Consulte el fundamento de otras técnicas usadas para la

determinación de la Glucosa en el laboratorio
Solución al cuestionario

2. La Prueba De Molish, es una prueba que da positiva es presencia de lactosa que

es un azúcar reductora, es la prueba que reduce al azúcar de la leche dando una
coloración al formar el complejo.
Reactivo De Benedict, Es oxidante suave capaz de oxidar al azúcar de la leche ya
que este azúcar presenta al grupo carbonilo que al encontrarse libre hace que el
azúcar sea reductor, esta prueba se basa en la capacidad del carbohidrato de
reducir el Cu2+ en un medio alcalino a Cu+. Este Cu+ se oxida y precipita en forma
de Cu2O, lo que proporciona la coloración positiva de la reacción.
Reactivo De Barfoed; Siempre dar una prueba positiva en presencia de azúcar
reductores porque al formarse el óxido que precipita dando una coloración mientras
que este reactivo en presencia de almidón que un polisacárido no reductor no podrá
formarse al oxido cuproso dando una prueba negativa.
Prueba Bial, es una prueba para identificar azucares pentosas, ya que las pentosas
al reaccionar con ácido clorhídrico forma el furfural.
Prueba Seliwanoff; Se usa para azúcar aldosa y cetosa que en presencia de ácidos
minerales y calentándolas sufren deshidratación la cual da como resultado la
formación de un anillo pentagonal de furfural que luego se condensa dando una
coloración roja.
Prueba Sacarosa; Es un disacárido que carece de poder reductor esto se debe a
que carece de aldehído y cetonas libres y al aplicar la prueba de Benedict
y Seliwanoff están dan positivas, la hidrolisis acida hace que la glucosa y fructosa
reaccionen con el reactivo de Benedict y Seliwanoff.
Prueba Polisacárido; reaccionan con el yoduro de potasio dando como resultado
un poli yoduro toma una coloración azulina indicando la presencia del halógeno en
el almidón.
3.Porque la maltosa es un disacárido formando por la unión de dos unidades de
glucosa mediante enlace ∞14- glucosídico que hace que sea un azúcar reductor y
pueda formar el compuesto alfa glucopiranocil (1,4) alfa glupopiranos y el almidón
a pesar de estar formado por unidades de glucosa, forma un polímero o polisacárido
formando por la mezcla de amilasa y amilopectina que se unen mediante enlace
∞1-6 y ∞ 1,4 que al ser ramificado no deja aldehído o cetonas libres haciendo que
no sea reductor por lo que la prueba es negativa.

4. las enfermedades causas por los carbohidratos están directamente relacionadas

con los órganos del cuerpo que realizan el metabolismo.
Las siguientes enfermedades son causas por hidratos de carbono
Obesidad: se define como una acumulación anormal excesiva de grasa.

Diabetes tipo 1: se observa una sobre producción de insulina debida a la

destrucción auto inmune de las células B.

Diabetes tipo 2: en esta el cuerpo produce insulina pero no la suficiente a la que

produce la glucosa.
Caries.

Enfermedades cardiovasculares: impiden al corazón su normal funcionamiento.

5. La celulosa tiene una estructura lineal o fibrosa, en la que se establecen múltiples

puentes de hidrógeno entre los grupos hidroxilo de distintas cadenas yuxtapuestas
de glucosa, haciéndolas impenetrables al agua, lo que hace que sea insoluble en
agua, y originando fibras compactas que constituyen la pared celular de las células
vegetales.

6.No es un azúcar reductor porque no contiene ningún átomo de carbono anumérico

libre, puesto que los carbonos anuméricos de sus dos unidades monosacáridos
constituyentes se hallan unidos entre sí covalentemente mediante un enlace O-
glucosídico. Por esta razón, la sacarosa no es un azúcar reductor y tampoco posee
un extremo reductor.

7. Se puede determinar glucosa usando el reactivo de felling por que la glucosa al

tener aldehído en su estructura esta es reducida por el Cu+2 presenta en el
reactivo de felling y formara el Cu2 o que se precipita y da una coloración rojiza.