CAPITULO 15

MUTACIÓN, REPARACIÓN, Y RECOMBINACIÓN

Procesos principales responsables de la variación genética: mutación y

recombinación.
LA MUTACIÓN
 cambio en la secuencia de DNA de un gen.
 La mutación es especialmente significativa ya que es la fuente primordial del
cambio evolutivo; nuevos alelos surgen en todos los organismos, algunos
espontáneamente y otros como resultado de la exposición a la radiación o a
sustancias químicas del ambiente.
 Los nuevos alelos producidos por mutación se convierten en la materia prima
de un segundo nivel de variación, llevado a cabo por la recombinación.
LA RECOMBINACIÓN
 es el resultado de un proceso celular que causa que los alelos de los diferentes
genes se agrupen en nuevas combinaciones.
MUTACIONES GÉNICAS
 son procesos mutacionales que tienen lugar dentro de genes individuales.
RELACION DE MUT. Y RECOM.: Se verá que los tipos de daño del DNA potencialmente más graves, una rotura de
doble cadena, es también un paso intermedio en el proceso normal de recombinación de una célula durante el
entrecruzamiento meiótico. De esta manera, se puede establecer un paralelismo entre la mutación y la recombinación a
dos niveles. Primero, como se mencionó anteriormente, la mutación y la recombinación son las mayores fuentes de
variación. Segundo, los mecanismos de reparación y recombinación de DNA tienen algunas características en común,
incluyendo el uso de algunas de las mismas proteínas. Por esta razón, primero se explorarán los mecanismos de
reparación de DNA y después estos se compararán con los mecanismos de recombinación de DNA.

15.1 LAS CONSECUENCIAS FENOTÍPICAS DE LAS MUTACIONES EN EL DNA

MUTACIÓN PUNTUAL
 alteración de único par de bases del DNA o a un número pequeño de pares de bases adyacentes.
 mutaciones puntuales se clasifican en términos moleculares que muestra los principales tipos de cambios del DNA
y sus efectos en la función proteica cuando ocurre en la región codificadora de la proteína de un gen.

TIPOS DE MUTACIONES PUNTUALES

Los dos principales tipos de mutaciones puntuales en el DNA son:
1. Sustituciones De Bases.
1. Las sustituciones de bases son mutaciones en las que un par de bases es sustituido por otro.
2. Las sustituciones de bases se pueden dividir en dos subtipos:
a. Transiciones:
Sustitución de una base por otra base de la misma categoría química. Una purina se sustituye por
una purina (A por G o G por A) o bien una pirimidina se sustituye por una pirimidina (C por T o T
por C).
 b. Transversiones.
Sustitución de una base de una categoría química por una base de otra. Una pirimidina se sustituye
por una purina (C por A, C por G, T por A, o T por G) o bien una purina se sustituye por una
pirimidina (A por C, A por T, G por C, o G por T).

2. La Inserción o Deleción De Bases.

 Las mutaciones de inserción o deleción son de hecho inserciones o deleciones de pares de nucleótidos.
 se usa el término mutaciones indel (por inserción-deleción).

Consecuencias moleculares de la mutación puntual en la región codificadora

 Para sustituciones de una sola base, hay varios posibles resultados, pero todos son consecuencia directa de dos
aspectos del código genético: la degeneración del código y la existencia de codones de terminación de la
traducción
Mutaciones sinónimas.
 La mutación cambia un codón por otro que determina el mismo aminoácido.
 Las mutaciones sinónimas también hacen referencia a mutaciones silenciosas.
 Las mutaciones sinónimas nunca cambian la secuencia de aminoácidos de la cadena polipeptídica
Mutaciones de cambio de sentido.
 Un codón que determina un aminoácido se cambia por un codón que determina otro aminoácido. Las mutaciones
de cambio de sentido se pueden llamar mutaciones no sinónimas.
 una mutación de cambio de sentido puede provocar la sustitución de un aminoácido por otro químicamente
similar, denominada sustitución conservadora
Mutaciones sin sentido.
 Un codón que determina un aminoácido es sustituido por un codón de terminación de la traducción (stop).
 Las mutaciones sin sentido conducirán a la terminación prematura de la traducción. Por ello se espera que
afecten gravemente la función proteica
NOTA: mutaciones en un sitio de corte y empalme pueden variar drásticamente la región codificadora, dando lugar a
largas inserciones o deleciones que pueden o no seguir el marco de lectura.

MUTACIONES INDEL
 pueden tener consecuencias en una secuencia polipeptídica situada más allá del sitio de mutación.
 La adición o deleción de un único par de bases de DNA cambia el marco de lectura del resto del proceso de
traducción, desde el sitio donde ocurre la mutación del par de bases hasta el siguiente codón stop en el nuevo
marco de lectura. Por lo tanto, estas lesiones se llaman mutaciones de desplazamiento del marco de lectura.
 Estas mutaciones causan que la secuencia aminoacídica completa traducida aguas abajo desde el sitio de la
mutación no tengan relación con la secuencia aminoacídica original. De esta manera, las mutaciones de
desplazamiento del marco resultan típicamente en la pérdida completa de la estructura y función de la proteína
normal.

Las Consecuencias Moleculares De La Mutación Puntual En La Región No Codificadora

DNA
 sitios de unión incluyen los sitios donde se unen la RNA polimerasa y sus factores asociados
 sitios donde se unen las proteínas específicas de la regulación de la transcripción.
RNA
 sitios importantes de unión incluyen los sitios de unión de mRNAs bacterianos a ribosomas
 sitios 5’ y 3’ de corte y empalme para la unión de exones de mRNAs eucarióticos
 sitios que regulan la traducción y localizan el mRNA en áreas particulares y compartimientos dentro de la célula.
LEER: la consecuencia funcional de cualquier mutación puntual en las regiones citadas depende de si la mutación
destruye (o crea) un sitio de unión. Las mutaciones que alteran tales sitios pueden cambiar el patrón de expresión de un
gen, respecto a la cantidad normal de producto expresado en un momento determinado o en algún tejido concreto, o
alterar la respuesta a determinadas situaciones ambientales. Estas mutaciones reguladoras alterarán la cantidad de
producto proteico, pero no la estructura de la proteína. Alternativamente, las mutaciones en algunos sitios de unión
pueden obliterar completamente un paso necesario en la expresión génica normal (como la unión de la RNA polimerasa
o de factores de corte y empalme) y por lo tanto inactivar totalmente el producto génico o bloquear su formación.

15.2 LAS BASES MOLECULARES DE LA MUTACIÓN ESPONTÁNEA

Las mutaciones génicas pueden surgir espontáneamente o pueden ser inducidas.
 Las mutaciones espontáneas ocurren de manera natural y surgen en todas las células.
 Las mutaciones inducidas surgen por causa de la acción de algunos agentes, denominados mutágenos, que
incrementan la tasa a la que ocurren las mutaciones.

TEST DE FLUCTUACIÓN DE LURIA Y DELBRÜCK

Luria y Delbrück diseñaron su “test de fluctuación” como se describe a continuación. Inocularon 20 pequeños cultivos,
cada uno con unas pocas células, y se incubaron hasta obtener 108 células por mililitro. Al mismo tiempo, un cultivo
mucho más grande también se inoculó e incubó hasta obtener 108 células por mililitro. Los 20 cultivos individuales y
las 20 muestras del mismo tamaño del cultivo grande se sembraron en presencia del fago. Los 20 cultivos individuales
mostraron una alta variación en el número de colonias resistentes: 11 placas no tenían colonias resistentes, y las restantes
tenían 1, 1, 3, 5, 5, 6, 35, 64 y 107 por placa. Las 20 muestras del cultivo grande mostraron mucha menor variación de
placa a placa, todas en el rango de 14 a 26. Si los fagos estuvieran induciendo mutaciones no habría razones que
explicaran por qué la fluctuación debería de ser mayor en cultivos individuales, ya que todos estaban expuestos de manera
similar a los fagos. La mejor explicación era que las mutaciones ocurrían aleatoriamente en el tiempo: las mutaciones
tempranas daban números más altos de células resistentes porque las células mutantes tenían tiempo para producir
muchos descendientes resistentes. Las mutaciones tardías producían menos células resistentes. Este resultado llevó al
actual paradigma de la mutación; es decir, en virus, bacterias o eucariotas la mutación puede ocurrir en cualquier célula,
en cualquier momento y al azar.
REPLICA DE PLACA
Una técnica denominada réplica en placa, desarrollada por Joshua y Esther Lederberg en 1952. Se sembró una población
de bacterias en placas de medio no selectivo (es decir, sin fagos) y de cada una de las células se formó una colonia. Esta
placa se denomina placa matriz. Sobre la superficie de la placa matriz se aplicó suavemente un trozo estéril de terciopelo,
que quedó impregnado de células allí donde había una colonia. De esta manera, el terciopelo aparece como una “copia”
de toda la placa matriz. El terciopelo se depositó entonces en placas replicadas conteniendo medio selectivo (es decir,
con fagos T1). Al tocar las placas con el terciopelo, algunas células adheridas al terciopelo se depositaron sobre la
superficie de las placas replicadas, en las mismas posiciones relativas que las colonias de la placa matriz. Como se
esperaba, se encontraron unas pocas colonias mutantes resistentes en las placas replicadas, pero la mayoría de las placas
replicadas mostraron el mismo patrón de colonias
MENSAJE: La mutación es un proceso aleatorio. Cualquier alelo de cualquier célula puede mutar en cualquier
momento.
MECANISMOS DE MUTACIÓN ESPONTÁNEA.
Las mutaciones espontáneas surgen de diversas fuentes.
1. Proceso de replicación del DNA.
 Un error en la replicación del DNA puede producirse cuando se forma un par de nucleótidos ilegítimos (digamos,
A-C) durante la síntesis del DNA, que da lugar a la sustitución de bases que puede ser una transición o bien una
transversión.
a. Transición.
- Cada una de las bases del DNA puede aparecer en una de varias formas, denominadas tautómeros, que son
isómeros que difieren en la posición de sus átomos y en los enlaces que se forman entre ellos.
- La forma ceto de cada base es la que se encuentra normalmente en el DNA, mientras que las formas imino
y enol son raras. Las formas imino y ceto pueden emparejarse con bases equivocadas formando un
emparejamiento erróneo.
-posibles emparejamientos erróneos causados por el cambio de un tautómero por otro, que recibe la
denominación de desplazamiento tautomérico.
b. Transversión.
- pirimidina es sustituida por una purina o viceversa. Las transversiones no pueden generarse mediante los
emparejamientos erróneos.
-Con las bases del DNA en su orientación normal, la creación de una transversión por un error en la
replicación requeriría, en algún momento durante la síntesis del DNA, el emparejamiento erróneo de una
purina con una purina o de una pirimidina con
NOTA. Aunque algunos errores en la replicación producen mutaciones de sustitución de base, otro tipo de errores de la
replicación pueden conducir a mutaciones indel.

2. Lesiones espontáneas.
 son daños que se producen en el DNA de forma natural, también pueden causar mutaciones. Dos de las lesiones
espontáneas más frecuentes son el resultado de la despurinización y de la desaminación.
a. La despurinización, la más común de las dos, es la pérdida de una base purínica. La despurinización consiste
en la eliminación del enlace glucosídico entre la base y la desoxirribosa y la consiguiente pérdida de un
residuo de guanina o adenina del DNA.
b. La desaminación de la citosina produce uracilo. Residuos de uracilo no reparados se emparejarán con los
de adenina durante la replicación, produciendo la conversión de un par G-C en un par A-T (una transición
G·C – A·T).

3. Las bases dañadas oxidativamente

 Especies activas de oxígeno, como los radicales superóxido (O2·-), el peróxido de hidrógeno (H2O2) y los
radicales hidroxilo (OH), se generan como subproductos del metabolismo normal aerobio. Todas ellas pueden
causar daños oxidativos en el DNA, así como en sus precursores (como el GTP), que dan lugar a mutaciones.

Mutaciones espontáneas en humanos: enfermedades de repeticiones de trinucleótidos.

 Un mecanismo común responsable de varias enfermedades genéticas es la expansión de una repetición de tres
pares de bases. Por esta razón, se denominan enfermedades de repetición de trinucleótidos.
 Un ejemplo es la enfermedad humana denominada síndrome del X frágil.
  la enfermedad de Huntington también han sido asociadas a la expansión de la repetición de trinucleótidos en un
gen.
 La enfermedad de Huntington y la enfermedad de Kennedy (también llamada la atrofia muscular espinal y bulbar
ligada al cromosoma X) se deben a una amplificación de una repetición de tres pares de bases, CGA..
 Las enfermedades de repeticiones de trinucleótidos surgen debido a la expansión de varias copias de una
secuencia de tres pares de bases que suelen estar en varias copias, a menudo en la región codificadora de un
gen.

15.3 LAS BASES MOLECULARES DE LAS MUTACIONES INDUCIDAS

La producción de mutaciones en el laboratorio a causa de la exposición a mutágenos se denomina mutagénesis, y el
organismo se dice que ha sido mutagenizado.

Mecanismos de mutagénesis
1. Reemplazo de una base de DNA (incorporación de base analogos).
 Algunos compuestos químicos son lo suficientemente parecidos a las bases nitrogenadas normales del DNA.
 pueden causar mutaciones al provocar que, durante la replicación, se inserten nucleótidos incorrectos frente a
ellos.
 Por ejemplo, el 5-bromouracilo (5-BU) es un análogo de la timina que contiene bromo en la posición del carbono-
5 en lugar del grupo CH3 que aparece en la timina. Este cambio no afecta a los átomos que participan en los
puentes de hidrógeno durante el emparejamiento de las bases, aunque la presencia de bromo altera de forma
significativa la distribución de electrones en la base.
 la 2-amino-purina (2-AP). Este análogo de la adenina puede emparejarse con la timina, aunque también puede
emparejarse erróneamente con la citosina cuando está en estado protonado
2. Alteración de una base (emparejamiento erróneo o misspair)
 Algunos mutágenos no se incorporan al DNA, sino que en su lugar alteran una base, provocando un
emparejamiento erróneo específico.
 Ciertos agentes alquilantes, tales como el metanosulfonato de etilo (EMS) y la ampliamente utilizada
nitrosoguanidina (NG) funcionan de esta manera.
 Los agentes alquilantes también pueden modificar las bases de los dNTP (donde N puede ser cualquier base),
que son precursores de la síntesis del DNA.
 Los agentes intercalantes constituyen otra clase importante de modificadores del DNA. Este grupo de
compuestos incluye la proflavina, el naranja de acridina y una clase de compuestos químicos denominados
compuestos ICR.
3. Daño de una base (no se aparea con ninguna base)
 Un gran número de mutágenos dañan una o más bases, de manera que se imposibilita el emparejamiento
específico entre las bases.
 El resultado es un bloqueo de la replicación, puesto que la síntesis del DNA no continuará más allá de una base
que no pueda especificar a su complementaria mediante enlaces por puente de hidrógeno.
 Algunas causantes de daños en las bases:
1. La luz ultravioleta
a. normalmente provoca daños en bases nucleotídicas de la mayoría de organismos. La luz ultravioleta
genera distintos tipos de alteraciones en el DNA, denominados fotoproductos. Estas lesiones son el
fotodímero ciclobutano-pirimidina y el fotoproducto 6-4
 2. La radiación ionizante
a. causa la formación de moléculas ionizadas y excitadas que pueden dañar el DNA.
b. Estas especies pueden dañar las bases dando lugar a diferentes productos de aductos y de
degradación. Entre los más corrientes, que provocan mutaciones, se encuentran el glicol timina y el
8-oxodG
c. Esta radiación puede causar la rotura del enlace N-glucosídico, conduciendo a la formación de sitios
apurínicos o apirimidínicos
MENSAJE. Los mutágenos inducen mutaciones mediante varios mecanismos diferentes. Algunos mutágenos
mimetizan las bases normales y se incorporan al DNA, donde luego establecen emparejamientos incorrectos. Otros dañan
las bases y producen emparejamientos erróneos específicos, o impiden completamente el emparejamiento porque
eliminan el reconocimiento entre las bases.
El test de Ames
 evaluando mutágenos en nuestro entorno
 proporcionaría así una forma importante de explorar miles de compuestos y evaluar un aspecto de su riesgo al
ambiente y a la salud. Hoy en día se sigue utilizando como herramienta importante para la evaluación de la
seguridad de los compuestos químicos.

15.4 MECANISMOS DE REPARACIÓN BIOLÓGICA

Maneras con las que se puede dañar el DNA
 interior de la célula (replicación, reactivos del oxígeno, etc.)
 exterior (ambientales: luz ultravioleta, radiación ionizante, mutágenos)
El hecho es que los organismos que abarcan desde las bacterias hasta los humanos y plantas pueden reparar
eficientemente su DNA mediante una variedad de mecanismos que juntos emplean hasta 100 proteínas de reparación
conocidas. De hecho, nuestra compresión actual nos muestra al DNA como la única molécula que los organismos reparan
más que reemplazan. Como se verá, los fallos de estos sistemas de reparación son una causa importante en enfermedades
humanas hereditarias.
El mecanismo de reparación más importante es la función correctora de la DNA polimerasa I y la DNA polimerasa III
como parte del complejo de replicación. Como consta aquí, tanto la DNA polimerasa I como la DNA polimerasa III son
capaces de escindir bases que se han insertado erróneamente dando lugar a emparejamientos erróneos.

1. Reversión directa del daño en el DNA

 La forma más simple de reparar una lesión, una vez que ha ocurrido, es eliminarla directamente, regenerando a
continuación la base normal.
 El dímero de ciclobutano-pirimidina (CPD) puede repararse con una encima denominada CPD fotoliasa. La
encima se une al fotodímero y lo rompe regenerando la base original. Este mecanismo de reparación se denomina
fotoreactivación porque la encima requiere luz para funcionar.
 Las transferasas de grupo alquilo también son enzimas implicadas en la reversión directa de las lesiones.
Eliminan ciertos grupos alquilo añadidos a la posición O-6 de la guanina por mutágenos como la
nitrosoguanidina y el metanosulfonato de etilo.
2. Reparación por escisión de bases
 una base o un segmento más largo de la cadena de DNA es eliminado y reemplazado por un segmento
nucleotídico recién sintetizado complementario a la cadena molde opuesta.
 Como estos sistemas dependen de la complementariedad u homología entre la cadena molde y a la cadena que
se está reparando, se denominan sistemas de reparación dependientes de homología.
  ruta incluye la eliminación y reemplazo de una o más bases.
 El primer sistema de reparación dependiente de homología que se examinará es la reparación por escisión de
bases.
 El principal blanco de la reparación por escisión de bases son los daños de bases que no abultan.
 Este tipo de daños puede ser el resultado de la variedad de causas incluyendo la metilación, la desaminación, la
oxidación o la pérdida espontánea de una base del DNA.
 La reparación por escisión de bases se lleva a cabo por:
1. Glicosilasas de DNA (ej. Glucosidasa del uracilo) que rompen enlaces de unión entre la base y el azúcar,
liberando la base alterada y generando un sitio apurínico o apirimidínico (AP).
2. Una enzima denominada endonucleasa AP, mella entonces la cadena dañada aguas arriba del sitio AP.
3. Una tercera enzima, la desoxirribofosfodiesterasa, limpia un tramo de DNA eliminando los residuos
vecinos de azúcar-fosfato permitiendo así a la DNA polimerasa rellenar los huecos con nucleótidos
complementarios a la cadena opuesta.
4. La DNA ligasa sella entonces el nuevo nucleótido al resto de la cadena
MENSAJE. En la reparación por escisión de bases, un daño no voluminoso en el DNA es reconocido por una de las
enzimas denominada glicosilasa del DNA que corta los enlaces base-azúcar, liberando la base incorrecta. La reparación
consiste en la eliminación del sitio en el que falta la base y la inserción de la base correcta usando como guía la
complementariedad de la cadena no dañada.
3. Reparación por escisión de nucleótidos
 este mecanismo puede corrige aductos voluminosos que distorsionan la hélice de DNA y aductos como los
dímeros de ciclobutano-pirimidina causados por la luz ultravioleta, además de daños de más de una base.
 Enfermedades autosómicas recesivas, xeroderma pigmentosum (XP) y el síndrome de Cockayne, son causadas
por defectos en la reparación por escisión de nucleótido.
 La reparación por escisión de nucleótido es un proceso complejo que requiere docenas de proteínas. A pesar de
esta complejidad, el proceso de reparación se puede separar en cuatro fases:
1. Reconocimiento de la o las bases dañadas
2. Ensamblaje del complejo multiproteico en el sitio dañado
3. Corte de la cadena dañada varios nucleótidos aguas arriba y aguas abajo del sitio dañado y eliminación de los
nucleótidos que haya (30) entre los cortes
4. Uso de la cadena no dañada como molde por la DNA polimerasa, seguido de la ligación de la cadena
 Dos tipos de reparaciones por escisión de nucleótido que difieren en el reconocimiento del daño
1. Reparación por escisión de nucleótido unido a la transcripción (TC-NER del inglés transcription-coupled
nucleotide-excision repair). repara regiones de DNA transcritas
2. Reparación genómica global (GGR del inglés global genomic repair), corrige las lesiones en cualquier lugar
del genoma y se activa cuando la horquilla de reparación se detiene.
 trastornos genéticos heterogéneos en los que el paciente tiene mutaciones en uno de los genes que desempeñan
sus funciones en un proceso particular, en este caso en la reparación por escisión de nucleótidos.

MENSAJE. La reparación por escisión de nucleótidos es una ruta versátil que reconoce y corrige las lesiones del DNA
debidas en gran parte a daños causados por la luz ultravioleta, que al hacerlo, libera el bloqueo de la horquilla de
replicación y el complejo de transcripción.
Reparación postreplicativa: reparación de emparejamientos erróneos
 La ruta más importante que corrige los restantes errores replicativos se denomina la reparación de
emparejamientos erróneos.
 Esta ruta de reparación reduce la tasa de error a menos de 10-9 debido al reconocimiento y reparación de las
bases erróneamente emparejadas y pequeños bucles producidos por inserciones y delecio- nes de nucleótidos
(indel) durante el transcurso de la replicación.
 El sistema de reparación de emparejamientos debería ser capaz de hacer al menos tres cosas:
1. Reconocer pares de bases mal emparejadas
 El primer paso en la reparación de emparejamientos erróneos es el reconocimiento del daño en el
DNA recién replicado por la proteína MutS.
2. Determinar cuál de las dos bases del emparejamiento erróneo es la incorrecta
 La unión de esta proteína a la distorsión de la doble hélice de DNA causada por un emparejamiento
erróneo de bases inicia la ruta de reparación de emparejamientos erróneos atrayendo otras tres
proteínas al sitio de la lesión (MutL, MutH y UvrD).
3. Escindir la base incorrecta y realizar la síntesis de la reparación
 La proteína clave es MutH, que realiza la función crucial de cortar la cadena que contiene la base
incorrecta
MENSAJE. El sistema de la reparación de emparejamientos erróneos corrige los errores que no son corregibles por la
función correctora de la DNA polimerasa replicativa durante la replicación. La reparación está restringida a la cadena
recién sintetizada, que en procariotas es reconocida por el mecanismo de reparación porque le falta la señal de la
metilación. Uno de los objetivos importantes del sistema de reparación de emparejamientos erróneos en humanos son las
secuencias cortas repetitivas que se pueden expandir o borrar durante la replicación mediante el mecanismo de
apareamiento erróneo por deslizamiento.

Reparación propensa a error: síntesis por translesión de DNA

 Hay mecanismos de reparación que son en sí mismo fuentes importantes de mutación.
 Estos mecanismos parece que se desarrollaron para prevenir hechos potencialmente más graves como la muerte
celular o el cáncer.
 Tanto en procariotas como en eucariotas, este bloqueo de la replicación puede evitarse mediante la inserción de bases
no específicas.
 En E. coli el proceso requiere la activación del sistema SOS. La inducción de SOS es el último recurso, que permite
la supervivencia de la célula a cambio de un cierto grado de mutagénesis.
Pasos del mecanismo SOS
1. la luz ultravioleta induce la síntesis de una proteína denominada RecA.
2. la polimerasa replicativa (DNA polimerasa III) se detiene en el sitio dañado del DNA, el DNA que está por
delante de la polimerasa continúa desenrollado, exponiendo regiones de cadena sencilla a las que se unirán
proteínas de unión a cadena sencilla.
3. la proteína RecA se une las proteínas de unión a cadena sencilla formando un filamento de DNA-proteína.
Este filamento es la forma biológica activa de RecA.
4. RecA actúa como señal que da lugar a la inducción de algunos genes que cifran los miembros de una recién
descubierta familia de polimerasas de DNA que pueden evitar el bloqueo de la replicación y son distintas a
las polimerasa replicativas.
5. Las DNA polimerasas que pueden evitar la detención de la replicación se han encontrado en diversos
taxones, desde lavaduras a la especie humana.
Estas polimerasas de translesión o de bypass, como han acabado siendo denominadas, difieren de las polimerasa
replicativas de varias maneras.
 Primero, pueden tolerar aductos inusualmente grandes en las bases. Mientras que las polimerasas replicativas
se detienen si la base no encaja con un sitio activo, las polimerasas de bypass tienen bolsillos mucho más
grandes que pueden acomodar bases dañadas.
 Segundo, en algunas situaciones la polimerasa de bypass tiene una tasa de error mucho mayor, en parte
porque no tiene la actividad correctora 3´ -> 5´ de la polimerasa replicativa principal.
 Tercero, sólo pueden añadir unos pocos nucleótidos antes de desprenderse. Esta característica es interesante
porque la principal función de una polimerasa propensa a error es desbloquear la horquilla de replicación,
no la de sintetizar largos trechos de DNA que puedan contener muchos errores.
MENSAJE. En la síntesis por translesión, se reclutan polimerasas de bypass hacia la horquilla de replicación que se
ha parado debido a una lesión en la cadena molde. Las polimerasas de bypass introducirán errores durante la síntesis que
podrán persistir y dar lugar a mutaciones o podrán ser reparadas por otros mecanismos tales como la reparación de
emparejamientos erróneos.

Reparación de roturas de doble cadena

La reparación libre de error se caracteriza por dos etapas:
 eliminación de la base dañada, y quizá de las bases vecinas, de una de las cadenas de la doble hélice
 uso de la otra cadena como molde para rellenar el hueco de la cadena sencilla, mediante la síntesis de DNA.
Mutaciones de rotura de doble cadena:
 las dos cadenas de la doble hélice se dañarán de manera que la complementariedad de bases no pudiera
aprovecharse.
 Si no se repararan las roturas de doble cadena, podrían causar varios tipos de aberraciones cromosómicas que
darían como resultado la muerte celular o un estado precanceroso.
Las roturas de doble cadena pueden surgir:espontáneamente (por ejemplo, en respuesta a especies de oxigeno
reactivo producidos como subproducto del metabolismo celular) o pueden ser inducidos mediante radiación ionizante.
Se conocen varios mecanismos que reparan las roturas de doble cadena, y se siguen descubriendo nuevos. En la siguiente
sección se describen dos mecanismos distintos: la unión de extremos no-homólogos y la recombinación homologa.
1. Unión de extremos no homólogos.
 Una vía mediante la cual los eucariotas superiores vuelven a unir los extremos rotos de doble cadena
es por un mecanismo más bien poco elegante pero importante denominado unión de extremos no
homólogos, NHEJ (del inglés nonhomologous end joinig),
a. primer paso en la ruta NHEJ es el reconocimiento del daño. La ruta NHEJ se inicia
cuando dos proteínas muy abundantes, KU70 y KU80, se unen a los extremos rotos,
formando un heterodímero que tiene dos funciones.
b. Primero, evita que los extremos tengan daños adicionales, y en segundo lugar, recluye
otras proteínas que cortan los extremos de las cadenas generando los extremos 5´-P y
3´-OH necesarios para la ligación. La DNA ligasa IV une entonces los dos extremos.

MENSAJE. NHEJ es una ruta propensa a error que repara las roturas de doble cadena en eucariotas superiores
volviendo a enlazar los dos extremos libres. La identificación de genes responsables de trastornos hereditarios es una
manera importante mediante la que los genetistas aíslan componentes anteriormente desconocidos de la reparación o de
otras rutas biológicas.
 2. Recombinación homóloga.
 Si la rotura de doble cadena ocurre después de la replicación de una célula que se está dividiendo, el
daño se podrá corregir por un mecanismo libre de error denominado templado de cadena dependiente
de la síntesis (SDSA, del inglés synthesis-dependent strand anneling). Éste usa la cromátida hermana
disponible en la mitosis como molde para asegurar un reparación correcta.
a. El primer paso en la SDSA es la unión de los extremos rotos mediante proteínas y
enzimas especializadas, la digestión de los extremos 5´ por una endonucleasa que
expone regiones de cadena sencilla, y el recubrimiento de estas regiones con proteínas
entre las cuales hay un homólogo de la RecA, la Rad51.
b. Rad51 forma largos filamentos porque se asocian con las regiones de cadena sencilla
expuestas. Los filamentos de Rad51-DNA participan entonces en una búsqueda notable
de la secuencia complementaria, en la cromátida hermana no dañada, que usarán como
molde para la síntesis de DNA. Este proceso se denomina invasión de cadena. El
extremo 3´ de la cadena invasora desplaza un de las cromátidas hermanas no dañadas,
que forma un lazo D (debido al desplazamiento), y sirve como cebador en la síntesis de
DNA desde su extremo 3´ libre. La nueva síntesis continúa desde los extremos 3’ hasta
que ambas cadenas se desenrollan de sus moldes y se anillan. La ligación sella las mellas,
dejando un fragmento reparado de DNA que tiene una característica distintiva: se ha
replicado de forma conservativa.

MENSAJE. El templado de cadena dependiente de la síntesis es un mecanismo libre de error que repara las roturas de
doble cadena en células en división en las que hay una cromátida hermana disponible que sirve como molde para la
síntesis de reparación.

15.5 EL MECANISMO DEL ENTRECRUZAMIENTO MEIÓTICO

Roturas de doble cadena programadas inician la recombinación meiótica

 El entrecruzamiento meiótico es un proceso extraordinariamente preciso que tiene lugar entre dos cromosomas
homólogos.
 la recombinación se inicia cuando una enzima denominada SpoII hace cortes en el DNA de doble cadena en uno de
los cromosomas homólogos después de que la horquilla de replicación haya pasado a través de una región
cromosómica
 Después de realizar los cortes, la enzima SpoII permanece unida a los nuevos extremos 5’ libres donde parece que
sirve para dos propósitos.
 Primero, protege los extremos de daños adicionales, incluyendo la falsa recombinación con otros extremos libres.
Segundo, podrá atraer a otras proteínas que son necesarias para el siguiente paso en la recombinación. Este paso es
en realidad muy similar a lo que sucede en la reparación de roturas de doble cadena en células en división.
 Los extremos 5’ son digeridos (retirados) y un complejo proteínico se une los extremos 3’ de cadena sencilla
 Forman parte de este complejo la proteína Rad51, que, como se ha mencionado, es homólogo a la proteína RecA que
participa en la extraordinaria búsqueda de la complementariedad en la cromátida hermana.
 En este punto, la recombinación meiótica toma una ruta completamente distinta a la que seguía la reparación de
roturas de doble cadena. En la meiosis, Rad51 se asocia con otra proteína, Dmc1, que sólo está presente durante la
meiosis
 los filamentos que contienen Rad51-Dmc1 guían la búsqueda de una secuencia complementaria. Sin embargo, en
contraste con la reparación de roturas de cadena doble, el filamento busca en el cromosoma homólogo, no en la
cromátida hermana. Esta búsqueda culmina con la invasión de cadena y formación del lazo D, igual que en la
reparación de roturas de doble cadena. Estos hechos son necesarios para la formación de un quiasma en meiosis I.
 Es decir, los homólogos se unen como resultado de la recombinación.
MENSAJE. La recombinación meiótica se inicia con la enzima SpoII, que introduce cortes de doble cadena en el
cromosoma después de que se hayan replicado, pero antes de la separación de los homólogos.
Factores complicados.
 El primer factor es que el número de quiasmas que unen cromosomas homólogos es mucho menor que el de cortes
hechos por la SpoII.
 El segundo factor que complica el proceso es que el entrecruzamiento meiótico tiene en realidad varios resultados
genéticos distintos.

El análisis genético de las tétradas proporciona indicios del mecanismo de recombinación

conversión génica: durante el entrecruzamiento, algunos alelos se hubiesen “convertido” en los alelos opuestos.
 las dos cadenas de la doble hélice llevan la información de dos alelos distintos del gen A al finalizar la
meiosis.
 Por lo tanto, la conversión génica se puede explicar si el proceso de la meiosis forma DNA heterodúplice, es
decir, DNA con un segmento en el que una cadena es la secuencia nucleotídica del alelo A y la otra es la
secuencia nucleotídica del alelo a. Tras la mitosis, las dos células hermanas que resultan de la división del
núcleo que contiene este heterodúplice será diferente, una con A y la otra con a.
 Se podría suponer que A y a difieren en un único par de bases; siendo G-C en A y A-T en a. Se podría
suponer además que, para cualquier gen en particular, se formará un único heterodúplice poco frecuente en
la meiosis de manera que A-T en uno de los productos se convierte en G-T (pronto se verá el mecanismo).
Entonces podemos representar los productos de la meiosis como:
1. G-C 2. G-C 3. G-T 4. A-T
Después de la mitosis posmeiótica, las octadas resultantes serán
1. G-C 2. G-C 3. G-C 4. G-C 5. G-C 6. A-T 7. A-T 8. A-T.

El modelo de rotura de doble cadena para la recombinación meiótica.

 Un modelo para explicar el origen del DNA heterodúplice en la recombinación meiótica donde comienza en el punto
de la invasión de cadena
 La cadena invasora se utiliza como cebadora de la síntesis usando la cadena complementaria de la cromátida A como
molde.
 Esta nueva síntesis alarga el lazo D de cadena sencilla, que sirve como molde para la síntesis de DNA en que la otra
cadena sencilla (a) actúa de cebador. La actividad polimerasa rellena los huecos y la DNA ligasa une los extremos
dando como resultado una estructura peculiar que parece el entrecruzamiento de dos cadena simples.
 El “entrecruzamiento” de cadena sencilla se denomina unión de Holliday, Las dos uniones se denominan doble unión
de Holliday o estructura de Holliday. El modelo propone que esta estructura inestable se resuelve produciendo un
entrecruzamiento recíproco de doble cadena. Además, o el modelo explica las conexiones físicas de suma
importancia entre cromosomas homólogos en la meiosis. La doble unión o estructura de Holliday es inestable y ha
de ser resuelta en una de dos maneras. Dicho simplemente, cada una de las estructuras puede ser resuelta mediante
rotura de forma “vertical” u “horizontal” y reunión de cadena única. Una resolución tiene como resultado el
entrecruzamiento recíproco de doble cadena (mostrado a la izquierda) y la ausencia de entrecruzamiento en la otra
(derecha).
MENSAJE. Los productos con entrecruzamientos y sin entrecruzamiento de la recombinación meiótica surgen de
cortes de doble cadena programados. Los entrecruzamientos se forman tras la resolución de la doble unión de Holliday,
mientras que la vía que da lugar a la ausencia de entrecruzamiento sigue la resolución alternativa de la doble unión de
Holliday o bien una vía distinta parecida al sistema de reparación SDSA.

15.6 CÁNCER: UNA CONSECUENCIA FENOTÍPICA IMPORTANTE DE LA MUTACIÓN

Las mutaciones inductoras del cáncer pueden pertenecer a un limitado número de grandes categorías:
 aquellas que incrementa la capacidad de la célula de proliferar
 aquellas que descienden la susceptibilidad de la célula a seguir la vía de la muerte celular programada, denominada
apoptosis
 aquellas que incrementan la tasa de mutación de la célula en general o su longevidad de manera que aumenta la
probabilidad de cualquier mutación, incluyendo las que fomentan la proliferación o la apoptosis.

Diferencias entre células normales y células cancerosas

 Un tumor maligno, o cáncer, está compuesto por un agregado de células, todas ellas derivadas de una célula
fundadora aberrante.
 Las células cancerosas suelen distinguirse de las células normales que las rodean por una serie de cambios fenotípicos
específicos, tales como una tasa rápida de división, la invasión de nuevos territorios celulares, una elevada tasa
metabólica y una morfología anormal.

Mutaciones en células cancerosas

Existen dos tipos generales de mutaciones asociadas a los tumores:
1. las mutaciones en los oncogenes
 Las mutaciones en los oncogenes actúan en las células tumorales como mutaciones dominantes
afectando a la ganancia de función características clave de las mutaciones en los oncogenes.
 las proteínas codificadas por el oncogén están permanentemente activadas en las células tumorales
 la mutación esté en uno de los dos alelos es suficiente para contribuir a la formación de un tumor.
Estos genes es su estado normal, antes de mutar, se denominan protooncogenes.
2. las mutaciones en los genes supresores de tumores.
 Las mutaciones en genes supresores de tumores que inducen la formación de tumores son
mutaciones recesivas de pérdida de función. Es decir, este tipo de mutaciones hace que se pierda
mucha o toda la actividad de los productos génicos codificados (es decir, una mutación nula).
Además, para que se desarrolle el cáncer, la mutación debe estar presente en ambos alelos del gen.
 Las mutaciones en p53 aparecen asociadas a muchos tipos de tumores. En realidad, se ha estimado
que un 50% de los tumores humanos carecen de un gen p53 funcional. La proteína p53 activa es un
regulador transcripcional que se activa en respuesta a la presencia de daños en el DNA.

MENSAJE. Los oncogenes codifican formas mutadas de proteínas de las células normales como resultado de una
mutación dominante, normalmente debido a su activación inapropiada. Por otro lado, los genes supresores de tumores
codifican proteínas cuya pérdida de actividad pueden contribuir a un estado canceroso, y como tal, son mutaciones
recesivas. Los agentes mutagénicos pueden causar algunos cánceres porque el cáncer es en parte causado por versiones
mutantes de genes normales que dan lugar a un crecimiento descontrolado.
 RESUMEN

Los cambios en el DNA de un gen (mutaciones puntuales) generalmente suponen uno o algunos pocos pares de bases.
Las sustituciones de un único par de bases pueden crear codones sin sentido o de cambio de sentido (de terminación de
la transcripción). Una purina reemplazada por otra purina (o una pirimidina reemplazada por otra pirimidina) es una
transición. Una purina reemplazada por una pirimidina (o viceversa) es una transversión. Las adiciones o deleciones de
un único par de bases producen mutaciones de cambio de fase. Algunos genes humanos que contienen repeticiones de
trinucleótidos (sobretodo los que se expresan en tejido neural) mutan debido a la expansión de estas repeticiones y de
esta manera pueden causar enfermedades. La formación de monoaminoácidos repetidos en el polipéptido cifrado por
estos genes, es responsable de los fenotipos mutantes.
Las mutaciones pueden ocurrir espontáneamente como subproductos de procesos celulares normales como la replicación
del DNA o el metabolismo, o pueden ser inducidos por radiaciones mutagénicas o sustancias químicas. Debido a su
especificidad química los mutágenos a menudo causan un tipo de cambio específico. Por ejemplo, algunos producen
exclusivamente transiciones G·C → A·T, otros exclusivamente cambios de fase.
Aunque las mutaciones sean necesarias para generar diversidad, muchas mutaciones están asociadas a enfermedades
genéticas hereditarias como el xeroderma pigmentosum. Además, las mutaciones que ocurren en células somáticas son
el origen de muchos cánceres humanos. Se han desarrollado muchas rutas biológicas para corregir el amplio espectro de
mutaciones espontáneas e inducidas. Algunas rutas, como la reparación por escisión de base o nucleótido o la reparación
de emparejamientos erróneos, usan la información heredada en forma de complementariedad de bases para realizar una
reparación libre de error. Otras rutas que usan la polimerasa de bypass para corregir las bases dañadas introducen errores
en la secuencia de DNA.
La corrección de las roturas de doble cadena es particularmente importante porque estas lesiones pueden llevar a la
desestabilización de reordenaciones cromosómicas. La ruta de unión de extremos no-homólogos vuelve a ligar los
extremos rotos de manera que la detención de la horquilla de replicación no resulte en la muerte celular. En células que
se están replicando, la reparación libre de error de las roturas de doble cadena puede hacerse mediante la ruta del templado
de cadena dependiente de la síntesis, que utiliza la cromátida hermana para reparar la rotura.
Cientos de roturas de doble cadena programadas inician el entrecruzamiento meiótico entre cromátidas no hermanas.
Como las otras roturas de doble cadena, las roturas meióticas deben ser procesadas rápida y eficazmente para evitar
graves consecuencias como la muerte celular y el cáncer. La forma en la que esta reparación se lleva a cabo es aún objeto
de investigación. Un modelo actual, estudiado a partir de la segregación en la formación de esporas fúngicas, propone el
uso de las cromátidas no hermanas del cromosoma homólogo como molde para reparar las roturas. Según este modelo,
muchas de las roturas dan lugar a productos sin entrecruzamiento y son probablemente resueltos por un mecanismo
parecido al SDSA. Sin embargo, las roturas críticas en la formación de quiasmas dan lugar a entrecruzamientos tras la
formación y consiguiente resolución de la doble unión o estructura de Holliday.