BAZELE TEORETICE ALE

C R O M AT O G R A F I E I D E G A Z E
 Clasificarea tehnicilor cromatografice

c.p. c.a.
c.p. c.a. c.p. c.a.

c.a. - cromatografie de adsorbţie

c.p. - cromatografie de partiţie p.2 - Bazele teoretice ale cromatografiei
Absorbţia şi adsorbţia ...

ABsorbţie ADsorbţie

p.3 - Bazele teoretice ale cromatografiei

 Distribuţia concentraţiei solutului în
faza mobilă şi faza staţionară
direcţia de curgere

Faza mobilă
profilul concentraţiei
transfer din faza solutului în faza mobilă
staţionară
în faza mobilă

profilul concentraţiei
solutului în faza
staţionară
transfer din faza
mobilă
în faza staţionară

Faza staţionară p.4 - Bazele teoretice ale cromatografiei

intensitate
Ti m p d e r e t e n ţ i e ş i o r d i n e d e e l u ţ i e

octan nonan
Injecţie pic 1

timp

p.5 - Bazele teoretice ale cromatografiei

 Forma picului cromatografic

Concentraţie
distanţă
Răspunsul detectorului

tr

punct de inflexiune

injecţie timp sau volum

p.6 - Bazele teoretice ale cromatografiei
Schema procesului cromatografic
direcţia de curgere a f.m. detector cromatogramă

timp

coloana cromatografică p.7 - Bazele teoretice ale cromatografiei

 Lărgirea zonei cu probă

coloană

start

p.8 - Bazele teoretice ale cromatografiei

Factori ce duc la lărgirea zonei cu probă
- echilibrul interfazic -
faza mobilă direcţie de eluţie

faza staţionară

zona cu probă la intrare în coloană

faza mobilă

faza staţionară

zona cu probă în coloană, la un timp oarecare de eluţie

p.9 - Bazele teoretice ale cromatografiei
Factori ce duc la lărgirea zonei cu probă
- difuziune longitudinală -

zona cu probă la scurt timp după intrarea în coloană

difuziune longitudinală

zona cu probă după un timp mai îndelungat de eluţie

direcţie de eluţie

p.10 - Bazele teoretice ale cromatografiei

Factori ce duc la lărgirea zonei cu probă
- difuziune structurală -

timp

p.11 - Bazele teoretice ale cromatografiei

Factori ce duc la lărgirea zonei cu probă
- difuziune transversală -
zona cu probă la intrare în coloană

direcţie de eluţie

zona cu probă în coloană, la un timp oarecare de eluţie

p.12 - Bazele teoretice ale cromatografiei

Factor de separare şi factor de capacitate

retenţia relativă sau factorul de separare (pentru compuşii 1 şi 2)

α = (tr2’/tr1’) = k2’/k1’ = K2/K1

factorul de capacitate

k’ = (tr – tm)/tm= CsVs / CmVm= K (Vs/Vm)

(raportul între timpul petrecut de un component în f.m. respectiv f.s.)

coeficientul de partiţie
K = Cs/Cm

p.13 - Bazele teoretice ale cromatografiei

 Numărul de talere teoretice şi
înălţimea echivalentă a talerului

Numărul de talere teoretice (N)

tR – timpul de retenţie
wh – lăţimea picului la ½ din înălţime

Înălţimea echivalentă a talerului teoretic (H)

L – lungimea coloanei

p.14 - Bazele teoretice ale cromatografiei

 2((tR)y - (tR)x)
Rezoluţia Rs = -----------------
Wx + Wy

rezoluţie rezoluţie

intensitate
intensitate

0.5 0.75

rezoluţie
intensitate

intensitate
1.0 rezoluţie
1.5

timp timp

p.15 - Bazele teoretice ale cromatografiei

Compararea rezoluţiei
la diverse concentraţii

p.16 - Bazele teoretice ale cromatografiei

Izoterma de adsorbţie

p.17 - Bazele teoretice ale cromatografiei

Picuri cromatografice asimetrice

2
41 .7 (t r / w0.1 )
N ≈
A / B + 1 .25

p.18 - Bazele teoretice ale cromatografiei

 E c u a ţ i a Va n D e e m t e r

B
H = A+ + Cµ x
µx

Unde A, B, C sunt contribuţii din:

A difuziune structurală
B difuziune longitudinală
C timp de echilibrare

ux debitul liniar

p.19 - Bazele teoretice ale cromatografiei

 Separarea gaz - cromatografică
Injector

Detector
Cromatograf

Coloană
cromatografică
Calculator sau
Gaz purtător “Cuptor” înregistrator

Proba: amestec A+B+C+D+E

E A
Cromatogramă

B E
D
A C

B
C
Intensita
te

D
??? - volatilitate 0 5 10 15 20
??? - punct de fierbere Timp (minute)
??? - masă moleculară
??? - polaritate
??? - matrice, solvent, stabilitate termică, alţi factori. p.20 - Principiul determinării gaz-cromatografice
Domeniul de aplicabilitate al GC Factori determinanţi
volatilitate
- exemplificare -
●

● punct de fierbere
● masă moleculară
● polaritate
● matrice
● solvent
● stabilitate termică
● tipul coloanei

p.21 - Clase de substanţe analizabile prin GC

Domeniul de aplicabilitate al GC

p.22 - Clase de substanţe analizabile prin GC

F a z a m o b i l ă - c u r b e l e Va n D e m t e r
pentruH2, He şi N2

Debite recomandate (ml / min):

Diametru interior Hidrogen Heliu

0.10 mm 1.0 0.5
0.25 mm 2.5 1.3
0.32 mm 3.2 1.9
0.53 mm 5.3 4.2

p.23 - Descrierea părţilor componente ale GC

Faza mobilă – cerinţe de puritate

p.24 - Descrierea părţilor componente ale GC

Faza mobilă – cerinţe de puritate

p.25 - Descrierea părţilor componente ale GC

Dispozitive de măsurare şi reglare a debitului

p.26 - Descrierea părţilor componente ale GC

Dispozitive de măsurare şi reglare a debitului
- exemplificare pentru split-splitless -

p.27 - Descrierea părţilor componente ale GC

 INJECTOARE Sisteme de introducere a probei
● clasice
● cu splitare
● split-splitless
● on column
● P T V, a l t e t i p u r i

PTV

On column Split-splitless
p.28 - Descrierea părţilor componente ale GC
Injectoare - avantajele
injecţiei split-splitless

p.29 - Descrierea părţilor componente ale GC

Sisteme automate de introducere a probei

p.30 - Descrierea părţilor componente ale GC

 Coloane cromatografice

solut adsorbit la
suprafaţa fazei
Convenţionale staţionare

peretele coloanei
capilare
Capilare

solut dizolvat
în faza staţionară
depusă pe peretele
capilarei

p.31 - Descrierea părţilor componente ale GC

 Polaritatea coloanelor cromatografice
Me
Si O 100 % metil (HP-1, DB-1 etc.) Nepolară
Me n

Ph Me
5% fenil (HP-5, DB-5, etc.) Nepolară
O Si O Si O 35% fenil (HP-35, DB-35, etc.) Polaritate medie
Ph Me 50% fenil (HP-50+, DB-17, etc.) Polaritate medie
m n

R Me
6% cianopropilfenil (HP-1301, DB-1301, etc.) Polaritate medie
O Si O Si O 14% cianopropilfenil (HP-1701, DB-1701etc.) Polaritate medie
R' m Me n 50% cianopropilfenil (HP-225, DB-225, etc.) Polaritate mare

H H
HO - - C-C-O- -H 100% PEG (HP-WAX) Polară

H H
p.32 - Descrierea părţilor componente ale GC
Polaritatea coloanelor cromatografice

HP-17: 50% fenil şi 50% metil siloxan

comparativ cu
HP-50+ : (50%)-Difenil (50%)-Dimetilpolisiloxan

CH3

Si O Si O Si O
CH3 m n CH3 n

! coloanele sunt diferite !

p.33 - Descrierea părţilor componente ale GC

Polaritatea coloanelor cromatografice
C10 C12
Hexanol
100% Metil
(nepolar)

0 2 4 6 8
condiţii identice la GC
coloane de dimensiuni identice
C10 C12 fază staţionară diferită

Hexanol 100% PEG

(polar)

0 2 4 6 8

p.34 - Descrierea părţilor componente ale GC

Ordinea de eluţie şi punctele de fierbere

p.35 - Descrierea părţilor componente ale GC

Caracteristicile coloanelor cromatografice

● faza staţionară
● diametrul interior
● lungimea
● grosimea filmului
p.36 - Descrierea părţilor componente ale GC
Caracteristicile coloanelor cromatografice
- diametrul interior -

80°C izoterm
21.81
0.25 mm
0 5 10 15 20

16.06 0.32 mm
0 2 4 6 8 10 12 14 16

Timpul de retenţie este invers proporţional cu diametrul interior

p.37 - Descrierea părţilor componente ale GC

Caracteristicile coloanelor cromatografice
- diametrul interior -

n =58,700 n =107,250

0.53 mm 0.32 mm
capacitate pentru probă : < 2 ug < 500 ng

p.38 - Descrierea părţilor componente ale GC

Caracteristicile coloanelor cromatografice
- lungimea coloanei -

Lungime (m) N
15 71,430
30 142,860
60 285,720

0.25 mm ID
N/m = 4762

p.39 - Descrierea părţilor componente ale GC

Caracteristicile coloanelor cromatografice
- lungimea coloanei -

R=0.84 R=1.16 R=1.68

2.29 min 4.82 min 8.73 min

15 m 30 m 60 m

p.40 - Descrierea părţilor componente ale GC

 Caracteristicile coloanelor cromatografice
- grosimea filmului -
7.00
grosimea mai mare 0.25 µm
a filmului conduce la 0 2 4 6 8
timpi de retenţie
mai mari
25.00
1.00 µm
0 5 10 15 20 25

grosimea mai mare a filmului

conduce la pierderi de f.s. mai mari
p.41 - Descrierea părţilor componente ale GC
Caracteristicile coloanelor cromatografice
- grosimea filmului -

formarea produşilor siloxanici de degradare H3C CH3

Si
HO O
CH3 CH3 CH3 CH3 CH3
Si O Si O Si O Si O Si Si
CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH O
CH3 CH3
Si O Si O Si O Si O Si O Si O Si OH 3
CH3
CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3 CH3

CH3 CH3 CH3 CH3

Si O Si O Si O Si OH
CH3 CH3 CH3 CH3 + H3C CH3
O
Si
O
H3C Si Si CH3
O CH
H3C 3

Reacţia se repetă

p.42 - Descrierea părţilor componente ale GC

 Detectori

Distructivi
• Spectrometru de masă (CI/EI)
• Ionizare în flacără (FID)
• Pentru azot şi fosfor (NPD)
• Flame - fotometric (FPD)
• Emisie atomică (AED)
• ICP, ICP-MS

p.43 - Descrierea părţilor componente ale GC

Detectori distructivi

FPD
FID

NPD AED

p.44 - Descrierea părţilor componente ale GC

Detectori

Nedistructivi
• Conductivitate termică (TCD)
• Captură de electroni (ECD)
• Fotoionizare (PID)
• Infraroşu (FT-IR)
• RMN

p.45 - Descrierea părţilor componente ale GC

 Detectori nedistructivi

TCD

PID

ECD

p.46 - Descrierea părţilor componente ale GC

Cromatograme cu detectori diferiţi

p.47 - Descrierea părţilor componente ale GC

Sistemul de termostatare al coloanei

Parametrii de performanţă:

● Temperatura maximă
● Gradientul maxim

● Precizia de măsurare a temperaturii

● Liniaritatea dinamicii de încălzire

● Viteza de răcire

● Timpul de stabilizare

● Volumul

● Omogenitatea temperaturii în incintă

● Calitatea izolaţiei termice

p.48 - Descrierea părţilor componente ale GC

 Sistemul headspace

Sistem static

Sistem dinamic

p.49 - Descrierea părţilor componente ale GC

Sistemul headspace cu compensare de presiune

p.50 - Descrierea părţilor componente ale GC

Sistemul headspace

inj.lichid

Headspace

p.51 - Descrierea părţilor componente ale GC

Sistemul headspace

1 ml 5 ml 5 ml + NaCl
sol.apoasă ciclohexan + dioxan

Influenţa volumului de probă şi a adaosului

de NaCl asupra senzitivităţii
Influenţa temperaturii asupra senzitivităţii p.52 - Descrierea părţilor componente ale GC
 O C H3 MS ca detector GC
H3C C N
N C
CH
C C
O N
H
N informaţie obţinută :
(~1 nanogram) Spectrometru ● masa moleculară
de masă
compus pur separat ● distribuţia
cromatografic
izotopică
● fragmentarea

ionului molecular
194
Mass Spectrum

Cromatograf

67 109
Abundance

55
82
E A
42

D 94 136 165

B 40 60 80 100 120 140 160 180 200

C Mass (amu)
Proba: amestec A+B+C+D+E
p.53 - Principiul de funcţionare al MS
 Schema spectrometrului de masă
Introducerea probei Ieşirea datelor

Intrare Achiziţia de
date

S urs a de ioni
S eparator de
(camera de Detector
ioni
ionizare)

Pompe de
vid

p.54 - Principiul de funcţionare al MS

Schema spectrometrului de masă

p.55 - Principiul de funcţionare al MS

 Calibrarea
tensiunilor MS

p.56 - Principiul de funcţionare al MS

 Sistemul de vid al spectrometrului MS
Presiune (Torr) Drum liber mijlociu (meters)
760 6.0x10-8
1 4.5x10-5
10-3 4.5x10-2
10-5 4.5x10
10-7 4.5x102
10-9 4.5x104

Pompe de vid preliminar Pompă de difuzie Pompă turbomoleculară

ex.”rotary-vane”
p.57 - Sistemul de vid al MS
Metode de ionizare a probei

p.58 - Sisteme de ionizare

Schema camerei de ionizare clasice (EI)

Colector p e n tr u e le c tr o n i E le c t r o d d e
f o c a liz a r e

Ioni pozitivi
+
Repeller Molecule
neutre
Inlet
+ _
_
+ + + + + +
+
ioni către
separator
e- e- e- ul
_ Electroni magnetic

Filament Electrod
accelerare

p.59 - Sisteme de ionizare

 Mecanismul ionizării probei
M + e- M+. + 2e-
M+.

unde M+. => ionul molecular

Ioni moleculari formaţi în EI:

M+.
(M+1)+. (M+1)+.

(M+2)+.
...

p.60 - Interpretarea spectrlor de masă

Ionizarea chimică CI

p.61 - Sisteme de ionizare

Alura spectrelor în EI respectiv CI pentru efedrină

EI

CI

p.62 - Sisteme de ionizare

 Schema separatorului de ioni
cu sector magnetic

traiectoria în
domeniu

traiectorie în afara
domeniului
(ioni prea uşori)

Detector
Sursa de
ioni
N traiectorie în afara
domeniului
Electromagnet (ioni prea grei)

p.63 - Sisteme de separare a ionilor

 Schema separatorului de ioni
cu sector magnetic cu dublă focalizare

p.64 - Sisteme de separare a ionilor

Schema separatorului de ioni
cu filtru quadrupolic
ion resonant

ion nerezonant

_
Detector
+

+
_

Sursa de
ioni

Tensiune
continuă
şi alternativă

p.65 - Sisteme de separare a ionilor

Schema separatorului de ioni
cu trapă ionică

p.66 - Sisteme de separare a ionilor

Schema separatorului de ioni
cu timp de zbor (TOF)

p.67 - Sisteme de separare a ionilor

Schema separatorului de ioni
cu rezonanţă ciclotronică

p.68 - Sisteme de separare a ionilor

Detectorul multiplicator de electroni

microcanal
dinodă

p.69 - Detectoare de ioni

Detectorul multiplicator de fotoni

p.70 - Detectoare de ioni

Abundenţa picurilor izotopice
C10H14
13
C 10 * 1.11% = 11.1%
2
H 14 * 0.015% = 0.21%
-------
135
pic / 34pic 11.31%

p.71 - Interpretarea spectrlor de masă

Picul molecular şi picul de bază
- tetrahidrocanabinol -
PB
PM

p.72 - Interpretarea spectrlor de masă

Dificultăţi în
atribuirea
spectrelor

p.73 - Interpretarea spectrlor de masă

Utilizarea bibliotecilor de spectre

p.74 - Utilizarea bibliotecilor de spectre

Dificultăţi la căutarea în bibliotecă
- spectru MDMA -

p.75 - Utilizarea bibliotecilor de spectre