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AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS INDUSTRIALES

Data · January 2000

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Pedro Mateos
Universidad de Salamanca
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TEMA 3: AISLAMIENTO Y SELECCIÓN DE MICROORGANISMOS
INDUSTRIALES
Dr. Pedro F. Mateos

I. OBJETIVOS 3.- Suelo: es el mayor almacén, pero

también el más difícil de manejar ya
Los microorganismos presentan una que se pueden encontrar todo tipo de
gran variedad metabólica por lo que en microorganismos y en una
distintos aislados microbianos concentración de 100 millones por
podemos encontrarnos una amplia gramo de suelo (gran variedad y
variedad de compuestos. Una de las cantidad).
tareas de la Microbiología Industrial es
desarrollar procedimientos que
permitan el aislamiento y selección de
microorganismos de interés industrial.
A fin de tener éxito, los métodos de
selección deben constituir una
actividad interdisciplinaria que
combine actividades de microbiología,
química, bioquímica, ingeniería y
bibliografía. El éxito de un programa
de selección depende de la fuente
utilizada para la obtención de los
microorganismos y del método elegido
para detectar la actividad deseada.

Aislamiento de microorganismos a
II. FUENTES DE OBTENCION DE partir de suelo
MICROORGANISMOS
4.- Colecciones internacionales de
1.- Fermentaciones naturales: vino, cultivos tipo.
pan, queso, materiales en
descomposición. Para el aislamiento de nuevos
productos metabólicos, los
investigadores intentan aislar cepas a
partir de ambientes extremos o poco
corrientes con la esperanza de que tales
cepas sean capaces de producir nuevos
metabolitos. Por ejemplo, se están
examinando microorganismos de las
grandes altitudes, hábitats fríos, aguas
marinas, profundidades de los océanos,
desiertos, géiseres, campos de petróleo,
etc.
Fermentación de mosto

2.- Animales y plantas enfermos:

vacunas.

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III. AISLAMIENTO DE
MICROORGANISMOS
El aislamiento de cepas puede llevarse
a cabo utilizando las técnicas
empleadas normalmente en
microbiología, siguiendo el siguiente
esquema a partir de una muestra de
suelo:
1.- La muestra de suelo se resuspende
en agua estéril.
2.- La suspensión se diluye 10-1 a 10-10
veces.
3.- Muestras de estas series de
diluciones (c.a. 100 µL) se siembran
sobre varios medios de cultivo
(dependiendo del tipo de
microorganismos que queramos aislar)
y luego se incuban.
4.- Se aislan colonias separadas de
distinta morfología y se purifican por
resiembra.
5.- Los cultivos puros se mantienen en
tubos de ensayo como cultivos en
medio sólido listos para realizar las
pruebas de selección.
El procedimiento de selección puede
ser acelerado frecuentemente probando
la actividad biológica de los aislados
iniciales directamente.
IV. SELECCION DE
MICROORGANISMOS
Screening (Búsqueda): Detección y
aislamiento de microorganismos de
interés industrial de entre una
población compleja de organismos
utilizando procedimientos selectivos.
Screening Primario: Detección y
aislamiento de microorganismos
potencialmente útiles.
Screening Secundario: Estudio de los
microorganismos aislados en el
screening primario para separar los que
tienen interés potencial de los que
tienen interés real y mejorar estas
cepas seleccionadas.
Para llevar a cabo un screening
primario generalmente se parte de una
población mixta (suelo, fermentaciones
naturales, etc.) donde existe tanto una
gran cantidad como variedad de
microorganismos potencialmente útiles
que debemos seleccionar. Para ello lo
primero que hacemos es utilizar
medios selectivos donde crezca el tipo
de microorganismo que nos interesa
aislar. A este medio se le pueden
añadir inhibidores para eliminar los
que no nos interesan. Por ejemplo, si
queremos obtener un microorganismo
aerobio lo creceríamos en presencia de
O2 con lo que los anaerobios no
crecerían; o bien si queremos
seleccionar hongos, añadiríamos
cloranfenicol, antibiótico que actúa
frente a bacterias pero que no afecta a
los hongos. Los parámetros generales
que tenemos que tener en cuenta son la
fuente de carbono, fuente de nitrógeno,
aireación, temperatura, pH e
inhibidores. Posteriormente se reaislan
en cultivo puro aquellos
microorganismos que hemos aislado
para su posterior estudio.
1.- Selección de microorganismos
productores de antibióticos y otros
agentes inhibidores del crecimiento
Los microorganismos productores de
antibióticos se encuadran dentro de las
bacterias (Bacillus, Pseudomonas y
fundamentalmente actinomicetos) y
hongos (Penicillium). Los parámetros
que se utilizarían para seleccionar estos
microorganismos productores de
antibióticos serían:
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 Temperatura: Hongos 20-22˚C;
Actinomicetos 28˚C
pH: Hongos pH ácido; Bacterias pH
neutro
Oxígeno: Todos los productores son
aerobios
Carbono: Actinomicetos glicerol,
quitina, almidón
Nitrógeno: Actinomicetos caseina,
arginina, asparragina; En general
amonio o nitrato.
Una vez crecidas las colonias que nos
interesan, se utiliza un medio que
contenga el microorganismo que sea
susceptible de inhibirse su crecimiento
por los antibióticos que queramos
seleccionar: Gram +, Gram -, amplio
espectro, etc. Se aislan, para ensayos
posteriores, aquellas colonias que
produzcan halos de inhibición.
Antibiograma
2.- Selección de microorganismos
productores de vitaminas y otros
factores de crecimiento
Necesitamos, al igual que para la
detección de antibióticos, un
microorganismo test que posea un
requerimiento absoluto para el factor
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de crecimiento que nos interesa
(auxótrofos). Estos microorganismos
pueden ser bien mutantes naturales o
mutantes provocados por la acción de
agentes mutágenos. El screening se
realiza de forma similar al de la
producción de antibióticos, aunque en
este caso al medio de cultivo le falta el
factor de crecimiento buscado, de tal
manera que el microorganismo test
sólo crecerá alrededor de las colonias
que produzcan este factor de
crecimiento (halo de crecimiento).
A escala industrial y de forma general
se utilizan como microorganismos
productores de aminoácidos a las
bacterias y como microorganismos
productores de vitaminas a los
eucariotas (levaduras y hongos
filamentosos). Esta premisa nos sirve
de orientación para elegir los medios
selectivos y de enriquecimiento para
aislar inicialmente a los
microorganismos productores,
bacterias u hongos.
3.- Selección de microorganismos
productores de enzimas
Debido a la dificultad que entraña el
manejo de microorganismos, siempre
que sea posible, se recurre a utilizar las
enzimas producidas por éstos en lugar
de las células enteras. A la hora de
realizar el screening se debe utilizar en
el medio de enriquecimiento como
fuente de carbono el sustrato del
enzima que buscamos (Amilasas ---->
Almidón; Celulasas ----> Celulosa).
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