Pineda Juárez Aranza Carolina

De los Santos Román Elsa María

Hurtado Mares Ixchel
Gallardo Padilla Luis Edgar
Biotecnología de alimentos
Dra. Rosa Icela Beltrán Hernández
Realización de la práctica: 31-01-19
Fecha de entrega: 7-02-19

PRÁCTICA 1

EXTRACCIÓN DE ADN

Objetivos

Objetivo general

Ensayar un procedimiento fisicoquímico para obtener ADN a partir de una muestra

vegetal y lograr la precipitación del mismo con base en su polaridad

Objetivos específicos

1. Extraer ADN de una muestra vegetal mediante la separación mecánica de

las células y la disolución de las membranas para la liberación del material
nuclear
2. Comprobar la acción de sales y solventes orgánicos sobre el ADN para hacer
evidente su presencia en la muestra
Material Reactivos Equipos
1 Probeta de 250 ml Hielos 1 licuadora
1 Perilla Etanol frio
1 Embudo de separación Proteasas
talle corto
1 Agitador Cloruro de sodio
3 vasos de precipitados Agua destilada
de 50 ml
1 Espátula acanalada
Gasa
2 pipetas graduadas de 5
ml
1 vaso de precipitado de
250 ml
1 Gradilla
1 Palangana
 Metodología
Extracción de ADN en col

Pesar 10g de col

Pesar 5 g de NaCl

Pesar 10 mg de proteasas

Mezclar 15 min

• Col
• NaCl
• 100ml de agua
destilada fría

Filtrar con la gasa y conservar el

filtrado

Añadir :
Agitar y dejar
• 20 ml de detergente liquido reposar 10 min
• 10mg de proteasa

Añadir 3 ml de agua destilada al

Rotular 2 tubos con M y C Añadir 3 ml del filtrado al tubo M
tubo C

Añadir 3 ml de etanol frío a cada

tubo

Esperar 10 min y observar

el precipitado del ADN
 Resultados.

C M

Figura 1. En el tubo uno se observa Figura 2. Representación de DNA

la muestra control y en el tubo dos precipitado. Recuperado de:
se presenta el DNA precipitado. http://www.pirweb.org/en/wp-
content/uploads/2017/10/Fruit-DNA-
Extraction-Instructions.pdf
Discusión

De acuerdo a los resultados obtenidos se presentó una precipitación parcial de

DNA, como se muestran en la figura 1. Uno de los problemas al trabajar con plantas
es la composición de la pared celular, la cual dificulta el acceso al interior para la
extracción de todo su contenido incluyendo el DNA, es importante resaltar que esto
depende de la composición de la planta (Velasco, 2005). En este caso la muestra
no representó dificultad al momento de extracción. Sin embargo, al someterlo a una
acción mecánica prolongada se obtuvo lo mencionado anteriormente, una
extracción parcial la cual posiblemente destruyó parte del material genético.

Conclusión

Con respecto a los resultados obtenidos, sí se logra el objetivo descrito en la

práctica ya que se pudo realizar la extracción de ADN, esto mediante la separación
mecánica de las células, con el uso igualmente de detergente para permitir la
disolución de las membranas, NaCl para la disolución del ADN y etanol para su
posterior precipitación.

Cuestionario

1. Comenta brevemente en qué consiste el procedimiento para la extracción de

ADN que se lleva a cabo en los kits comerciales.
Los kits comerciales proporcionan un metodo simple y en algunas ocasiones
poco tóxico para el aislamiento de ADN. El proceso no requiere soluciones
de fenol o cloroformo. El procedimiento consiste en realizar una
homogenización del tejido y lisis celular, después hay una separación de
proteínas celulares, esto se logra mediante un salado utilizando cloruro de
sodio estándar, después se realiza una precipitación de ADN sin necesidad
de utilizar etanol. Se debe hacer una redisolución del ADN con el buffer
indicado, por último, es necesario centrifugarlo para obtener una extracción
completa se requieren de dos a tres horas (Grafsky, A. J,1990).
2. Explica en qué pasos del proceso difiere el procedimiento de los kits
comerciales del que usaste en la práctica y si estas diferencias representan
ventajas para alguno de los procedimientos.

El método empleado en la práctica es similar al utilizado en los kits, en el kit

el ADN queda retenido en la membrana de sílice o en las perlas magnéticas
y ahí permanece durante la remoción de los lípidos y proteínas
posteriormente, para recuperar el AND, la membrana se lava con soluciones
deshidratantes y se somete a centrifugación para recuperar el ADN y
posteriormente este se vuelve a hidratar para su estudio.
En la práctica es similar ya que el ADN queda retenido por la acción del NaCl
mientras que el detergente y las proteasas sirve para remover las proteínas
y los lípidos para finalmente realizar separación del ADN por adición de
etanol. En la práctica faltó realizar la separación del ADN del etanol.
Las ventajas que presenta el kit frente al método utilizado es que es más
específico para recuperar ADN, recupera volúmenes mayores y en muestras
más complejas que pudieran tardar tiempo. (Nelson, D.L, 2005)

3. ¿Qué función tiene el cloruro de sodio en el proceso?

Tiene la función de disolver el ADN para poder extraerlo ya que los iones
salinos se ven atraídos por las cargas negativas del ADN (Universidad
popular del Cesar, 2014).

4. ¿Por qué precipita el ADN al adicionar el alcohol?

Al adicionar el alcohol y soluciones con altas concentraciones de iones de

sodio o amonio, la mezcla reduce las fuerzas repulsivas entre las cadenas y
permite que el ADN se pliegue sobre sí mismo haciéndolo insoluble, este
precipita en la interfase, de igual forma el alcohol separa el ADN de otros
componentes celulares (Alejos, 2014).
Bibliografía
Alejos, L. P. (2014). Herramientas Moleculares Aplicadas en Ecología: Aspecto
teorícos y prácticos. México, D.F: Secretaría de Medio Ambiente y Recursos
Naturales. Recuperado el 03 de 02 de 2019, de
http://www2.inecc.gob.mx/publicaciones2/libros/710/extraccion.pdf

Grafsky, A. J., Deely, D. and Braman, J. C. (1990) Strategies

Nelson, D. L. and Cox, M. M. (2005). Lehninger Principles of Biochemistry. Fourth

Edition. Publisher: W.H. Freeman
Universidad popular del Cesar (2014). Extracción de ADN. [online]
Es.slideshare.net. recuperado de:
https://es.slideshare.net/naya110/extraccion-de-adn-39981381 [Accessed
7 Feb. 2019].