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Farmacocinética es el estudio de la evolución temporal de las concentraciones y
cantidades de fármaco y sus metabolitos en los diferentes fluidos, tejidos y emuntorios
del organismo, así como el estudio de la evolución de la respuesta farmacológica y la
construcción de modelos adecuados para interpretar los datos obtenidos.
Entre sus objetivos están el desarrollo de nuevos medicamentos, las vías de
administración, diseño de FF, vías metabólicas, dosificación, procesos de eliminación, entre
otros.
Para que un fármaco pueda producir un efecto terapéutico o tóxico, es necesario que
alcance la Biofase, esto es la zona de interacción con los RECEPTORES CELULARES o DIANAS;
pero al llegar a dicha zona debe hacerlo además en una concentración determinada, la cual
será capaz de generar los efectos antes mencionados; por debajo de ella NO HAY EFECTO
TERAPÉUTICO y menos aún EFECTOS TÓXICOS.
La concentración de un fármaco depende del acrónimo LADME
L: Liberación del principio/s activo/s desde la forma farmacéutica.
A: Acceso del fármaco inalterado a la circulación sistémica (absorción).
D: Distribución a distintos lugares del organismo, incluyendo la biofase.
M: Biotransformación de la molécula original a uno o varios metabolitos, que suelen ser
menos tóxicos y menos efectivos que aquélla (metabolismo)
E: Excreción del fármaco o los metabolitos del organismo por cualquier vía (renal, biliar,
salivar, etc.).
Toda sustancia con actividad
farmacológica se define por
su configuración estructural y
por sus propiedades
físico-químicas y biológicas,
entre las que se incluye el
perfil farmacocinético.
Es aceptado que aquellos
fármacos que producen su
mecanismo de acción en
forma reversible, esto es que
interactúan en los sitios
activos de las células blanco
mediante uniones químicas
débiles (Enlace iónico, Fuerzas
de Van der Waals, puentes de
hidrógeno, etc.), la intensidad
y la duración del efecto
farmacológico están
condicionadas por la
concentración de fármaco
en el lugar de acción, también
denominado biofase.
Si graficamos la concentración del fármaco en el organismo, generalmente en plasma,
obtenida a diferentes tiempos tras su administración, nos genera una curva de
concentraciones plasmáticas-tiempo que, cuando la administración es extravasal, describe
esta figura:
Si bien los procesos cinéticos experimentados por un fármaco en el organismo suceden
simultáneamente en el tiempo, al principio, en la parte ascendente de la curva, predomina el
proceso de absorción, hasta
alcanzar un máximo que se
corresponde con la
Concentración máxima
(Cmax) alcanzada en sangre
por ese fármaco, a partir de
esa forma farmacéutica y en
un tiempo determinado
(Tmáx).
Ya en la curva descendente de
la gráfica el predominio
corresponde a los procesos de
distribución y eliminación,
teniendo en cuenta que éste
último se desarrolla en dos
etapas, en principio la
metabolización del fármaco
y posteriormente la
excreción, que constituye la
salida definitiva del
organismo.
● Concentración mínima efectiva: Representa la concentración mínima necesaria en los
receptores para que se produzca el efecto farmacológico deseado, lease, la
concentración del fármaco por encima de la cual se observa el efecto terapéutico.
● Concentración mínima tóxica: Representa la concentración a la cual, si se excede,
comenzarán a manifestarse los efectos indeseables y/o nocivos para el organismo. El
cociente CMT/CME define el índice terapéutico del fármaco. A mayor índice, más fácil
es conseguir efectos terapéuticos sin producir efectos tóxicos.
● El tiempo transcurrido entre la administración del fármaco hasta que comienza el
efecto terapéutico se denomina tiempo de latencia, osea hasta que la Cp alcanza la
CME.
● La intensidad del efecto farmacológico es proporcional al número de receptores
ocupados. A mayor Cp, mayor es la respuesta observada hasta alcanzar un máximo.
● El espacio generado entre la CME y la CMT se denomina ventana terapéutica y
corresponde al rango de dosis del fármaco con las cuales vamos a obtener efecto
farmacológico y con pocas posibilidades de efectos indeseados.
● La superficie debajo de la curva (AUC) nos indica la cantidad de fármaco que accede
inalterada a la circulación sistémica=absorbido.
● La semivida de eliminación es el tiempo que tarda en reducirse a la mitad la
concentración plasmática.
Velocidad de absorción
La Velocidad de absorción, se define como el número de moléculas de un fármaco que
se absorbe en la unidad de tiempo. Depende de la constante de absorción y del número de
moléculas que se encuentran en solución en el lugar de absorción.
La constante de absorción (Ka) se expresa como la probabilidad que tiene una
molécula de absorberse en la unidad de tiempo. es una constante característica de un
determinado fármaco y por lo tanto no varía. Lo que va a modificar la velocidad de absorción,
es el número de moléculas de ese fármaco que se encuentren disueltas en el lugar de absorción y
que son las que pueden ser absorbidas.
Semivida de absorción
La semivida de absorción se expresa como el tiempo que tarda en reducirse a la mitad
el número de moléculas que quedan por absorberse y es la inversa de la constante de
absorción.
(t1/2)= 0,693/Ka
En consecuencia, cuanto más rápida sea la absorción de un fármaco, mayor será su constante y
menor su semivida de absorción.
La absorción puede ser de Orden 1 o también llamada de primer orden y de orden 0.
En la absorción de Orden 1, la velocidad de absorción disminuye en la medida que la
cantidad de fármaco que queda por absorberse también disminuye, como consecuencia la
cantidad de moléculas que se absorben en la unidad del tiempo, disminuye en forma
exponencial.
Esta cinética es característica de la mayoría de los fármacos que en la FF están inicialmente
disponibles para absorberse
En la absorción de Orden 0, el número de moléculas que se absorbe en la unidad del
tiempo permanece constante durante o la mayor parte del proceso de absorción. Esta cinética
es característica de las FF de administración tal como la perfusión IV continua, la
administración de gases anestésicos, los preparados de absorción prolongada IM, subcutáneos
o dérmicos, y las FF de administración oral de liberación lenta. Aquí el número de moléculas
no disminuye con el tiempo.
Distribución
El proceso de distribución comienza inmediatamente que el fármaco ingresa al organismo y
permite el acceso de este a los distintos órganos en los que debe actuar, y también a los
órganos donde se realizaran los procesos de eliminación del mismo del organismo.
FARMACODINAMIA
Dianas y mecanismos celulares
Proteinas de transporte: membranas biologicas som impermeables al agua. Las proteinas de
membrana se dividen en dos grandes grupos: canales ionicos y proteinas transportadoras.
Las proteinas canales transportan agua e iones especificos a favor de su gradiente, pasan por
difusion pasiva. Lo mantienen cerrado o abierto, la difusion es masiva.
Las transportadoras facilitan el movimiento de pequeñas moleculas, pero solo pueden fijar
una o pocas moleculas al mismo tiempo.
Asi se pueden clasificar en activos y pasivos.
Poseen un sensor de voltaje, que ante cambios de potencial, el campo electrico crea una fuerza
de potencial que obliga a la proteina a abrir el canal
Canales Na: su entrada genera una despolarizacion en forma de potencial de accion o en
espiga. Posee subunidades alfa y betta asociadas, y sus alteraciones patologicas son conocidas
como canalopatias. Algunas isoformas de canales na poseen sitios de recepcion de
tetrodotoxina y saxitoxina, que bloquean los canales y los cierran. Algunas isoformas son
resistentes a ellos
Canales de Ca: hay varios subtipos cuyas cineticas de apertura y cierre son distintas.
Sub unidades alfa, beta y gama, la sub u alfa 1 es la principal diana de bloqueantes
inorganicos, toxicos y organicos pequeños.
Canales de K: provocan su salida, aumentando la negatividad o hiperpolarizando. Es la
familia mas extensa y diversa. Sub unidad alfa y beta. La familia 6tm/1p es la mas numerosa y
a esta clase pertenecen los canales de K sensibles a Ca
Canales ionicos controlados por nucleotidos ciclicos
Dos familias: cng y hcn, no selectivos y selectivos respectivamente. Al fijarse un nucleotido
cíclico se provoca un fuerte aumento de la corriente en los canales cng y un cambio
despolarizante en los hcn
Canales ionicos controlados por ligandos
Son despolarizantes: receptor nicotinico cuya activacion por la acetilcolina abre el canal y
facilita la entrada de Na, el receptor 5ht que permite entrada de iones monovalentes,
receptores de glutamato asociados a na y k y de atp asociados a na y ca. Los receptores de
GABA son hiperpolarizantes.
Receptores ionitropos pentamericos
Receptor nicotinico: la activacion ocasionada por la acth genera entrada de na y tambien
influye en otros como k y ca
Canales de cl: gabba y glicina
Su apertura genera una entrada de cargas negativas a la celula. Estos canales son
estabilizadores. Hay 2 receptores de gabba, el A, ligado a canales de cl y los B unidos a
proteinas g y canales de ca y k. Posee 5 subunidades, 2 alfa, betta, gama y delta.
Canal cationico unido a receptor 5ht
El 5ht3 es el unico que genera despolarizacion. Su estimulacion provoca la generacion de
potenciales
El glutamato y el aspartato se comportan como exitadores en el SNC
B. SISTEMAS DE COTRANSPORTE Y ANTITRANSPORTE
Son sistemas que acoplan el transporte de un ion a favor de su gradiente
electroquímico con el movimiento de otra u otras sustancias (iones, glucosa, etc.) que van en
contra de su propio gradiente. Si el transporte de ambas sustancias va en la misma dirección,
se habla de cotransporte, y si lo hacen en sentido contrario, se denomina antitransporte.
Importantes nutrientes y sustancias (aminoácidos y glucosa) son transportados por
mecanismos de cotransporte con Na+ en diversos epitelios: mucosa digestiva y túbulo renal.
Pero para que el Na+ fluya a favor de su gradiente electroquímico es preciso que en la célula
epitelial haya otros mecanismos celulares que lo promuevan. Suelen ser bombas de Na+
(ATPasas).
Desde el punto de vista de la posible acción farmacológica, existen destacados mecanismos de
cotransporte. En las células de la nefrona, además del cotransporte Na+-glucosa y
Na+-aminoácidos del túbulo proximal, funciona en el epitelio grueso de la rama ascendente del
asa de Henle el cotransporte Na+-Cl–-2K+, y en el túbulo contorneado distal, el cotransporte
Na+-Cl–; estos dos cotransportes son inhibidos de forma selectiva por distintas familias de
fármacos que se comportarán como diuréticos. En el sistema nervioso deben señalarse sistemas
de cotransporte de extraordinaria importancia fisiológica y farmacológica. En la membrana de
las terminaciones nerviosas de sistemas de monoaminas y aminoácidos (noradrenalina,
dopamina, serotonina y GABA) existe un cotransporte de Na+-Cl–-neurotransmisor merced al
cual el neurotransmisor es captado por la membrana desde el espacio sináptico y es introducido
en la terminación nerviosa en contra de su gradiente.
Todos estos sistemas de cotransporte y antitransporte son realizados mediante la acción de
proteínas transportadoras. Algunas de ellas son glucoproteínas que contienen una secuencia
superior a los 1.000 aminoácidos. A ellas pertenecen los miembros de la familia de
transportadores del GABA (GAT), noradrenalina (NET), dopamina (DAT) y serotonina
(SERT).
C. SISTEMAS ENZIMÁTICOS DE TRANSPORTE ACTIVO
El transporte activo requiere el suministro acoplado de energía libre. Este transporte se
realiza mediante bombas cuya energía es proporcionada fundamentalmente por el ATP. El
elemento intermediario común de alta energía es la fuerza protomotriz y las enzimas que
intervienen son las denominadas protón-ATPasas. Son de destacar las ATPasas denominadas
P (Na/K; H/K; Ca2+), V (endocitosis y exocitosis) y F (síntesis de ATP mitocondrial), así como la
superfamilia ABC (ATPBinding Casette) que interviene en el transporte de moléculas muy
diversas, incluidos los xenobióticos.
Las ATPasas poseen uno o más sitios para fijar el ATP en la cara citosólica de la membrana.
Aunque se denominan ATPasas, el sistema se encuentra acoplado firmemente de tal forma
que no se puede disipar la energía almacenada en el enlace fosfoanhídrido del ATP; es decir, el
ATP no es hidrolizado en ADP y Pi a menos que se transporten iones. La proteína recoge la
energía liberada durante la hidrólisis del ATP y la utiliza para trasladar el ion en contra de un
gradiente de concentración o de potencial.
II. Receptores Fisiológicos
A. RECEPTORES ACOPLADOS A PROTEÍNAS G HETEROTRIMÉRICAS
1. Mecanismos generales e importancia fisiológica y farmacológica
Numerosos ligandos endógenos ejercen su acción celular mediante la interacción con
receptores de membrana plasmática que están asociados a diversas proteínas fijadoras de
nucleótidos de guanina (proteínas G heterotriméricas), y que se denominan por ello, entre
otros, receptores acoplados a proteínas G (GPCR). Por tener una estructura de siete
dominios transmembrana (cada uno con una estructura secundaria en forma de hélice α), y
por su capacidad de activar sistemas efectores generadores de segundos mensajeros,
también reciben el nombre de receptores heptahélicos y receptores metabotrópicos.
Los cambios en las concentraciones intracelulares de moléculas (segundos mensajeros)
capaces de modular la actividad de proteincinasas originan modificaciones reversibles en el
estado de fosforilación de múltiples proteínas de señalización de otras vías de transducción
de señales, lo que permite el entrecruzamiento y/o la regulación cruzada de los GPCR y de
proteínas con funciones variadas, entre ellas los factores de transcripción; de este modo, una
señal iniciada con la activación del GPCR puede llegar hasta el núcleo, donde modificará el
patrón de expresión génica. Es así cómo la activación sostenida de los GPCR provoca también
acciones a largo plazo.
Los principales sistemas efectores son los sistemas de la adenilil ciclasa (que cataliza
la formación de AMPc), la fosfolipasa C-β (que cataliza la hidrólisis del fosfatidilinositol
4,5-bifosfato), la fosfolipasa A2 (que cataliza la hidrólisis de fosfolípidos por la que se libera el
ácido araquidónico), la fosfolipasa D (que cataliza la hidrólisis de fosfolípidos por la que se
produce ácido fosfatídico), la fosfodiesterasa (que cataliza la hidrólisis de nucleótidos cíclicos,
muy importante en células retinianas) y ciertos canales iónicos.
1.1 Moléculas receptoras
La diversidad de señales extracelulares reconocidas por GPCR es excepcional e incluye
diferentes entidades químicas, como iones, aminas biógenas, aminoácidos, péptidos,
glucoproteínas, lípidos y nucleótidos. Es más, la percepción de estímulos sensoriales, tales
como la luz, los olores y los sabores es mediada a través de GPCR.
Existen dos condiciones para que un receptor sea clasificado como GPCR. La primera
condición está relacionada con su estructura molecular y la segunda con su capacidad para
interactuar con proteínas G heterotriméricas. En relación con la primera, cada uno de los
dominios estructurales considerados determina propiedades específicas que son las que
confieren a cada receptor su especificidad para unirse, por una parte, a un determinado
ligando y, por otra, a una determinada proteína G heterotrimérica. Todos los GPCR son
proteínas integrales de membrana y comparten un patrón estructural común.
En cuanto a la segunda condición, los GPCR actúan sobre las proteínas G
heterotriméricas como factores intercambiadores de nucleótidos de guanina
(Guanine-nucleotide Exchange Factor [GEF]). Así, el receptor activado induce un cambio
conformacional en la subunidad α de la proteína G heterotrimérica, que lleva a la liberación
de GDP seguida de la unión de GTP, promoviéndose así la disociación de las subunidades α y
del dímero βγ constituyentes de la proteína G. Ambas entidades, la subunidad α con GTP
unido y el dímero βγ modulan diversas vías de señalización celular.
● GPCR A: Receptores para fotones, aminas biógenas (Ach, serotonina, NA,
dopamina e histamina) y otros ligandos pequeños, oxitocina, ADH, LH, FSH,
TSH).
● GPCR B: Receptores para CRF, VIP, calcitonina, glucagón y secretina.
● GPCR C: Glutamato, GABA, Ca2+ y receptores gustativos.
Los GPCR pueden estar activos de forma espontánea en ausencia de ligandos. El
concepto de receptor constitutivamente activo, es decir, la habilidad de los GPCR para
alcanzar una conformación activa de forma constitutiva, se demuestra por el descubrimiento
de ligandos que actúan como agonistas inversos. Además, los GPCR, para ejercer sus
funciones, pueden existir de forma constitutiva en forma de dímeros, o que, tras activación
por un ligando, pueden unirse dos GPCR iguales para formar homodímeros.
Desde el punto de vista farmacológico, los GPCR son sitios o dianas lógicos sobre los cuales
los fármacos pueden actuar como agonistas o como antagonistas. La mayoría de estos
fármacos estimulan o inhiben la
actividad receptorial al
interaccionar con el sitio de
unión reconocido por los
ligandos endógenos, denominado
ortostérico. En consecuencia, la
mayor parte de fármacos
utilizados clínicamente
representan tanto agonistas
ortostéricos (ligandos que
imitan la acción de los ligandos
endógenos sobre los GPCR), como
antagonistas neutros, o los
agonistas inversos. Pero los
GPCR, al igual que otras
moléculas importantes en las vías
de señalización (p. ej., enzimas),
contienen uno o más sitios de fijación adicionales denominados alostéricos, que son
reconocidos por los denominados ligandos moduladores o alostéricos. Por definición, estos
sitios alostéricos son distintos de los sitios implicados en la unión de los ligandos ortostéricos,
permitiendo así que los ligandos ortostéricos y alostéricos se unan a sus sitios en el receptor de
forma simultánea.
1.2 Proteínas G heterotriméricas
Las proteínas G heterotriméricas comprenden varias familias de proteínas celulares
que desempeñan múltiples funciones. Su nombre se debe al hecho de que fijan los nucleótidos
de guanina GDP y GTP, y poseen actividad intrínseca GTPasa. Tienen un papel central en la
transducción y tráfico de señales intracelulares en respuesta a la activación de GPCR. De
forma distinta a los GPCR, no son proteínas integrales de membrana, sino que se encuentran
asociadas a la membrana plasmática por su cara interna. Su estructura es de tres
subunidades, la alfa es fijadora de GDP/GTP (alfa q, i, s, o, etc).
En su forma inactiva, las tres subunidades están unidas formando un heterotrímero y
el sitio de fijación para nucleótidos de guanina situado en la subunidad α está ocupado por el
GDP. La fijación del ligando agonista al receptor hace que el complejo ligando-receptor se
asocie a la proteína G heterotrimérica y la active: el GDP es desplazado del sitio de unión en la
subunidad α por un mecanismo dependiente de Mg2+ y su lugar es ocupado por GTP; el
complejo α-GTP se disocia del dímero βγ y se une a la proteína del sistema efector y modifica
su actividad.
1.3 Proteínas reguladoras de la señalización de proteínas G heterotriméricas
Las proteínas reguladoras de la señalización de proteínas G (RGS) modulan la
actividad de las proteínas G heterotriméricas in vitro e in vivo. Su función más conocida es
inhibir la señalización de las proteínas G mediante la aceleración de la actividad GTPasa
(GTPase Activating Protein [GAP]) que hidroliza el GTP presente en las subunidades α activas
(α-GTP) de proteínas G heterotriméricas, y facilitar de nuevo su asociación con el dímero βγ.
2. Proteínas efectoras y sistemas de generación de mensajeros intracelulares
2.1 Mecanismos generales
La activación del sistema efector da lugar a los segundos mensajeros. Estos, a su vez,
activarán proteincinasas que catalizan la fosforilación de sustratos proteicos muy variados
en estructura, función y ubicación subcelular. La reacción consiste básicamente en la
transferencia de grupos PO4 desde el ATP hasta uno o más grupos hidroxilo (OH) presentes en
aminoácidos (serina, treonina y tirosina) de la cadena proteica. La adición de estos grupos
fosfato altera la conformación de la proteína afectada y, como consecuencia, su actividad
biológica: aumento o disminución de la actividad catalítica si se trata de una enzima, cambio
conformacional o posicional, capacidad para asociarse a otras proteínas, etc.
2.2 Actividad adenilil ciclasa
Numerosos mediadores endógenos se median por activación o inhibición de la
actividad enzimática adenilil ciclasa, encargada de generar AMP cíclico (AMPc) a partir del
ATP en presencia de iones Mg2+ . La adenilil ciclasa, en realidad, es una familia de enzimas de
estructura glucoproteica que se localizan como proteínas integrales de membrana plasmática;
se han identificado hasta nueve isoformas que se agrupan en tres subfamilias atendiendo a su
respuesta diferencial a diferentes elementos reguladores, especialmente las subunidades de
proteínas G heterotriméricas, el ion calcio, y a la fosforilación por proteincinasas dependientes
de segundos mensajeros. Todas ellas comparten una estructura básica similar: dos porciones,
cada una de las cuales posee seis segmentos transmembrana y dos segmentos citoplasmáticos
que son los más conservados y en los que reside su actividad catalítica.
La acción del AMPc concluye mediante hidrólisis para formar 5’-adenosinmonofosfato
(5’-AMP) por acción de una actividad enzimática de tipo fosfodiesterasa (PDE). La acción del
AMPc consiste en la activación de una proteincinasa específica llamada proteincinasa
dependiente de AMPc o PKA. Es un tetrámero que contiene dos subunidades reguladoras (R) y
otras dos catalíticas (C). Cada subunidad R contiene dos sitios de unión para el AMPc; la unión
del AMPc a las subunidades R reduce su afinidad por las C, las cuales quedan libres para
expresar su actividad transferidora de grupos fosfato del ATP. Los sustratos de esta
fosforilación son un grupo numeroso de proteínas. Unas son de carácter enzimático y su
fosforilación significa, según los casos, el paso a un estado de actividad o de inhibición. Otras
son de carácter estructural y su fosforilación provoca modificaciones funcionales de actividad.
Algunos ejemplos son: receptores colinérgicos nicotínicos y muscarínicos, receptor glutamato,
alfa 2 y betas adrenérgicos, GABA, canales iónicos voltaje dependientes y asociados a ligando,
entre otros.
2.3 Actividad fosfolipasa C-β
Metabolismo de fosfoinosítidos, generación de mensajeros y movilización de Ca2+.
Numerosos mediadores endógenos ejercen sus acciones fisiológicas mediante sistemas
de transducción de señales en los que el complejo «receptor-proteína G-efector» estimula el
metabolismo y el recambio de fosfoinosítidos. La familia de proteina G es de las Gq, y el
sistema efector es una actividad enzimática denominada fosfolipasa C-β (PLC-β) que
hidroliza específicamente el enlace éster-fosfato de los fosfoinosítidos. El fosfoinosítido
sustrato es el fosfatidilinositol-4,5-bifosfato (PIP2) y los productos resultantes de la hidrólisis
en la membrana plasmática son el inositol-1,4,5-trifosfato (IP3) y el diacilglicerol (DG). El
IP3 abandona la membrana celular y emigra al citoplasma donde activa un receptor que
funciona como canal de Ca que se abre y permite la salida masiva de este ion al citoplasma y
aumenta su concentración. Este se une a calmodulina y permite la entrada de Ca a la celula.
En esta acción participa un metabolito tetrafosforilado de inositol, el inositol
1,3,4,5-tetrafosfato (IP4). Entonces IP3 e IP4 son los segundos mensajeros. El DAG permanece
en la membrana plasmática, donde estimula la actividad de la proteincinasa C (PKC). La PKC
representa una familia de enzimas fosforilantes activadas por ciertos lípidos de membrana.
Antes de su activación, la PKC se encuentra en el citoplasma en forma inactiva, pero cuando
aumenta la concentración intracelular de Ca2+ por el efecto movilizador del IP3, la PKC es
transferida a la membrana celular. Allí es activada al fijarse a los fosfolípidos. La actividad
PKC puede ser activada de modo persistente por ésteres de forbol. El resultado, al igual que con
la PKA, son fenómenos relacionados con la secreción celular, activación de plaquetas,
regulación de la expresión de genes, crecimiento celular, diferenciación, metabolismo,
transmisión nerviosa, etc.
Los fosfoinosítidos se encuentran sometidos a un ciclo metabólico.
El diacilglicerol puede seguir varias vías metabólicas:
a) fosforilación para convertirse en ácido fosfatídico, el cual, si existe inositol.
regenera el PI y cierra el ciclo de recambio de fosfoinosítidos.
b) metabolización por lipasas que, dejan libre el ácido araquidónico, importante
precursor de los eicosanoides (prostaglandinas, tromboxanos, leucotrienos y
lipoxinas).
Actividad del Ca2+ intracelular. La concentración intracelular del Ca2+ es la resultante de los
procesos de entrada y salida de dicho ion. La entrada tiene lugar a partir del espacio
extracelular, a través de los diversos canales, intercambiadores Na+/Ca2+ y por depósitos
intracelulares (retículo endoplásmico). Este depósito contiene dos canales de liberación de
Ca2+, el receptor IP3 y el receptor rianodina. En cuanto a los procesos de salida destacan las
bombas Ca2+ATPasas, que extraen el Ca2+ hacia el exterior de la célula o lo introducen en
los depósitos del retículo endoplásmico. Numerosas señales que actúan sobre las células
ejercen su acción específica como consecuencia del incremento de Ca2+ intracelular que
producen. Por ello debe ser considerado como segundo mensajero. En el citoplasma existen
proteínas de pequeño tamaño con constantes de afinidad por el Ca2+ dentro del intervalo
apropiado, que contribuyen a taponarlo. Funcionan como reguladores celulares. Algunos
ejemplos son fosfolambano, la troponina C, la parvalbúmina, la calbindina, la calretinina y la
calmodulina. La calmodulina de células eucariotas es una proteína que presenta cuatro sitios
de fijación para el Ca2+. La fijación del Ca2+ a la calmodulina provoca cambios
conformacionales que le permiten unirse a, e interactuar con las proteínas estructurales y
enzimas cuya actividad regula.
2.4 Canales iónicos
Uno de los mecanismos principales de transducción de señales en neurobiología es la
regulación directa de canales iónicos por receptores metabotrópicos (GPCR) mediante
proteínas G. La acción de la proteína G está delimitada a la membrana plasmática, ya que no
implica la generación o presencia de intermediarios en el citoplasma. Los canales
rectificadores de la entrada de K+ son una familia importante en la excitación neuronal.
2.5 Receptores acoplados a proteínas G y señalización en el núcleo
Existen receptores intracelulares que, tras ser activados por sus ligandos, se
introducen en el núcleo y modifican o regulan la expresión génica. Pero también los ligandos
que activan GPCR son capaces de provocar modificaciones o respuestas a largo plazo que
implican la regulación de la expresión génica. Esta acción se desarrolla en dos fases:
1. inducción de genes de acción inmediata o temprana (Immediate
Early-Genes [IEG]), se mantiene elevado no más de 30-60 min.
2. los factores de transcripción inducibles penetran de nuevo en el núcleo para
activar los genes de acción tardía, de inicio más lento y duración mayor,
capaces de codificar proteínas diversas.
2.1 Activación de Ras y cascada de cinasas
Ver cuadro de arriba.
2.2. Regulación del ciclo celular por MAP cinasas
Cuando hablamos de ciclo celular en una célula eucariota nos referimos a las fases por
las que progresa una célula hasta concluir en su división en dos células.
El ciclo celular de las células eucariotas está dividido en cuatro fases:
1. La fase G1 es el período durante el cual las células se preparan para el proceso
de replicación del ADN.
2. La fase Go es una forma especializada de G1, que es usada para describir las
células que han salido del ciclo celular y llegan a ser quiescentes.
Hay un punto de control antes de terminar G1, osea antes de replicar el ADN. El compromiso
para dividirse viene típicamente marcado por la fosforilación de la proteína supresora de
tumores codificada por el gen del retinoblastoma (Rb), y la activación del factor de
transcripción E2F1.
3. La fase S es el período de síntesis de ADN.
4. La fase G2 es un período durante el cual se expresan los componentes
mecánicos que organizarán los cromosomas.
5. La fase M (de mitosis) comprende un fenómeno citológico que divide el
conjunto duplicado de cromosomas y coordina los pasos de la división celular
para producir dos células a partir de una.
Proteinas del ciclo celular.
Ciclinas. expresión celular aumenta o disminuye en función de la fase de ciclo celular
considerada. Cada ciclina está presente sólo durante una fracción particular del ciclo e
interactúa con una cdk específica. Las más importantes son: ciclina A, ciclina B, ciclina D,
ciclina E y H
Cinasas dependientes de ciclinas (cdk). Familia de cinasas que fosforilan residuos de serina
y treonina, y cuya actividad requiere la unión de una ciclina específica.
Inhibidores de cinasas dependientes de ciclinas (CKI). Se caracterizan por bloquear la
actividad cinasa ciclina/cdk formando un complejo inactivo y, en ocasiones, actuando como un
inhibidor competitivo uniéndose a la cdk en el sitio de unión para la ciclina. Ej p21 producto
de un gen inducido por p53.
3. Receptores con otras actividades enzimáticas intrínsecas
Existen receptores de membrana que poseen actividad proteína fosfatasa en su
dominio citosólico. La activación de estos receptores conlleva la eliminación de los grupos
fosfato de los residuos fosfotirosina presentes en diversos sustratos proteicos, con lo que
modifican su actividad.
Otros receptores de membrana presentan actividad serina/treonina cinasa; al ser
activados, fosforilan residuos de serina o treonina en su propio dominio citosólico.
4. Receptores asociados a actividad enzimática tirosincinasa
Éstos no poseen la actividad enzimática tirosincinasa en su molécula, sino que se
encuentran directamente asociados a otras moléculas citosólicas independientes, que son las
tirosincinasas
C. CONVERGENCIA DE LAS VÍAS DE SEÑALIZACIÓN INTRACELULAR ACOPLADAS A
RECEPTORES DE MEMBRANA
Las vías de mensajeros intracelulares (AMPc, Ca2+, MAPK) confluyen formando redes
complejas de interacción a múltiples niveles.
Ejemplos como: Niveles de interacción entre las vías de AMPc y Ca2+. y Interacción entre
las vías de segundos mensajeros y las cascadas de MAPK.
D. MECANISMOS DE REGULACIÓN DE RECEPTORES DE MEMBRANA
Puesto que los receptores son los elementos celulares que primero reciben la señal de
los ligandos, su presencia y estado de actividad deben estar sometidos a sistemas de
regulación que, en cierto modo, protejan a la célula del exceso de señales que pueda recibir,
en cantidad o en duración.
1. Receptores acoplados a proteínas G heterotriméricas (GPCR)
La actividad de un GPCR insertado en la membrana plasmática es el resultado del
balance coordinado entre los mecanismos que regulan los procesos de señalización,
desensibilización y resensibilización. La desensibilización es la atenuación o desaparición con
el tiempo de la respuesta al GPCR al estímulo agonista
Existe un proceso de desensibilización rápida, que se debe a la fosforilación de la
proteína receptora provocada por la activación del propio receptor. Puede deberse a la
activación de:
A. Cinasas específicas cuyo único sustrato es el GPCR activado, y se llaman cinasas
de receptores acoplados a proteínas G (GRK); es el caso de la desensibilización
homóloga.
B. Cinasas dependientes de segundos mensajeros (p. ej.,PKA, PKC) que pueden ser
activadas por la estimulación producida por ligandos sobre otros receptores; es
la desensibilización heteróloga,
Cuando la activación se prolonga o se repite, aparece un proceso en el que la
endocitosis se acompaña de la degradación de las proteínas receptoras e incluso de una
reducción en su resíntesis, lo que significa que habrá una reducción en el recuento o número
total de moléculas de ese receptor. Esta disminución del número de receptores se denomina
«regulación a la baja» (down-regulation).
2. Receptores con actividad intrínseca tirosincinasa (RTK)
En el caso de los RTK que fijan factores de crecimiento, cobra especial importancia la
cinasa PI-3K en la endocitosis y posterior regulación a la baja. La fosforilación de los residuos
de tirosina sirve como sitios de fijación específica para diversas proteínas. Pero sólo cuando se
suprimen los sitios de fijación a PI-3K se consigue alterar el proceso de internalización de los
receptores.
E. ACCIONES RELACIONADAS CON RECEPTORES INTRACELULARES (CITOPLASMÁTICOS
Y NUCLEARES)
Varias moléculas lipófilas de pequeño tamaño difunden a través de las membranas
celular y nuclear para interactuar directamente con proteínas globulares (receptores
citoplasmáticos y nucleares), que actúan como factores de transcripción celulares. Algunos
ejemplos de este tipo de moleculas son:
❖ Las hormonas de naturaleza esteroidea (estrógenos, gestágenos,
andrógenos, gluco y mineralocorticoides),
❖ los retinoides ( ácido retinoico y otros derivados de la vitamina A),
❖ las hormonas tiroideas y
❖ la vitamina D con sus metabolitos activos.
Todos estos compuestos se fijan y regulan la actividad de factores de transcripción
muy parecidos estructuralmente. Los factores presentan tres dominios:
A. el N-terminal de longitud y secuencia muy diferentes entre los factores.
B. el de fijación al ADN que se encuentra hacia el centro de la molécula y posee
un motivo «en dedo de cinc» y
C. el segmento C-terminal al que se fija el ligando.
La secuencia de ADN a la que se fija el factor de transcripción se llama elemento de
respuesta hormonal.
La acción del receptor (factor de transcripción) puede consistir en promover la
transcripción o suprimir la acción inhibidora que alguno de estos factores esté ejerciendo.
Las hormonas también pueden reprimir la expresión de genes.
La actividad de los receptores esteroideos puede ser modulada por procesos de
fosforilación derivados de otras vías intracelulares de señalización.
III. ACCIONES RELACIONADAS CON LA INHIBICIÓN DE ENZIMAS
1. Conceptos básicos y su aplicación
Una estrategia con posibilidades casi ilimitadas de acción, es actuar sobre las
actividades enzimáticas que intervienen en la síntesis o en la transformación de
mediadores endógenos, bien del propio organismo o de agentes patógenos que lo invaden.
En general, la actividad terapéutica observada se corresponde con acciones farmacológicas
que son eminentemente de carácter inhibidor.
El fundamento en que se basa la utilización de la inhibición enzimática como
mecanismo de acción farmacológica es el hecho de que la inhibición de una enzima, elegida
como diana adecuada, provoque el incremento o acumulación del sustrato (o sustratos) y
reducción del metabolito (o metabolitos), de forma que uno de estos dos resultados represente
la aparición de una respuesta clínicamente útil. Se consigue al:
a. Inhibir directamente la enzima de una reacción simple por la que el sustrato es
metabolizado.
b. Inhibir directamente una enzima dentro de una cadena o vía biosintética
c. Inhibir la enzima responsable de la síntesis de un cofactor cuya regeneración
es indispensable para que se mantenga la cadena de biosíntesis.
d. Inhibir simultáneamente dos o más pasos enzimáticos a lo largo de una vía de
biosíntesis.
e. Inhibir enzimas que tuvieran como objetivo metabolizar sustancias
inhibidoras.
f. Administrar, junto con el fármaco activo y útil, otro que inhiba las enzimas
metabolizadoras del primero, potenciando así su acción.
Para que un inhibidor enzimático sea un buen fármaco ha de elegir bien el ambiente
bioquímico en que se mueve la enzima (determinado por el compartimento subcelular donde
se localiza la enzima, por el lugar que ocupa en una cadena determinada de reacciones, y por
las peculiaridades de las distintas fuerzas reactivas que entran en juego en dicha cadena), ha
de actuar de modo específico y sin reacciones adversas (inhibir enzimas de un organismo
infectante sin que se vean afectadas las enzimas del organismo infectado).
2. Tipos de inhibición
A. Reversibles. Cuando el inhibidor se fija a la enzima mediante una combinación
apropiada de fuerzas de Van der Waals, puentes de hidrógeno, enlaces electrostáticos y
fuerzas de atracción hidrófobas. La intensidad de dicha unión está determinada por la
constante de equilibrio Ki para la disociación del complejo enzima-inhibidor-sustrato
en el caso de los inhibidores clásicos. Pueden ser competitivos, no competitivos, o de
tipo mixto. La mayoría son competitivos. Para que esto suceda es que el diseño de
inhibidores se base, en buena parte, en su parecido estructural con el sustrato.
B. Irreversibles. A partir de una unión inicial del inhibidor (o del sustrato) con la enzima,
se forma un enlace covalente entre un grupo funcional situado en la enzima y uno de
estos dos: el inhibidor o un residuo reactivo formado a partir del sustrato. Se dividen
en dos grupos:
a. Dirigidos al sitio activo. Una vez unido el inhibidor a la superficie de la enzima,
forma un enlace covalente con un grupo funcional en el sitio activo de la
enzima.
b. Con base en el mecanismo (sustratos «suicidas»). Al actuar como sustratos, son
modificados inicialmente por la enzima convirtiéndose en una molécula que
contiene la función reactiva y ésta forma luego el enlace covalente con el grupo
situado en la enzima.
IV. NUEVOS MECANISMOS DE ACCIÓN MOLECULAR
Se destacan la acción mediante anticuerpos específicos (anticuerpos, policlonales y
monoclonales, permite señalar e interferir la acción de moléculas específicas. Los anticuerpos
monoclonales adoptan dos nomenclaturas: la terminada en –ximab corresponde a los
anticuerpos quimera, la terminada en –umab corresponde a los anticuerpos humanizados.) y
la terapia génica (dedicado a una molécula endógena indispensable en la regulación de la
expresión génica y de su inactivación, el ARN. Habla un poco del ARNi y el siRNA).