TÉCNICA PARA EXTRACCIÓN DE PLAGUICIDAS E HIDROCARBUROS (TEXAS): SEDIMENTOS Y

ORGANISMOS.

Reactivos:
Hexano R.A.

Cloruro de metileno R.A.

Alúmina (Óxido de Aluminio), para cromatografía en columna. 70 – 230 mallas.

La alúmina parcialmente desactivada se prepara colocando la cantidad necesaria en un vaso de
precipitado, calentándola en un horno a 450°C durante 4 horas. Se reduce la temperatura del horno
a 130°C y se mantiene a dicha temperatura durante 24 horas. Se enfría en un desecador y se le
añade 1% por peso de agua destilada. Se agita y se mantiene en un desecador durante una hora.

Gel de Sílice (Silica gel) para cromatografía en columna. 70 – 230 mallas.

El gel de sílice parcialmente desactivado se prepara colocando la cantidad necesaria en un vaso de
precipitado, calentándolo en un horno a 170°C y se mantiene a dicha temperatura durante 24 horas.
Se enfría en un desecador y se le añade 5% por peso de agua destilada. Se agita y se mantiene en
un desecador durante una hora.

Sulfato de sodio anhidro, P.A.

El sulfato de sodio se calienta a 450°C durante 4 horas. Se reduce la temperatura del horno a 130°C
y se mantiene a dicha temperatura durante 24 horas. Se enfría en un desecador antes de usarse.

Cobre en polvo.
Se pesan 50 grs. de cobre en polvo en un vaso de precipitado. Se cubre con ácido clorhídrico
concentrado, se revuelve con un agitador de vidrio y se deja reposar 5 minutos. Se decanta el acido
y se enjuaga varias veces con agua de osmosis hasta que el pH sea de alrededor de 7 (neutro). Se
lava 3 o 4 veces con metanol y se repite con metanol y se repite el lavado con cloruro de metileno.
Se almacena con hexano.

Dedales de extracción de fibra de vidrio.

Cuerpos de ebullición.
NOTA. Todo el material de vidrio debe limpiarse cuidadosamente usando el siguiente
procedimiento: se lava con agua y con jabón, se enjuaga con agua corriente y se deja secar, se
enjuaga con acetona o metanol y se cubre con papel de aluminio, se hornea a 400°C por 4 horas.

Métodos de análisis.

Preparación de las muestras

Se liofilizan tanto las muestras de sedimentos como de organismos. Una vez seca la muestra, se
homogeniza el sedimento en un mortero y se pasa por un tamiz de 0.5 µm. Las muestras de
organismos se homogenizan en licuadora.

Procedimiento de extracción
Se pesa una submuestra de 20 gramos de sedimentos en un dedal de extracción (mediana) y se le
agregaran los patrones internos (100 µl de PCB 103; 100 µl de DBOFB y un 1 ml de 9,10
dihidroantraceno). Se agregan 200 ml de cloruro de metileno a un matraz de fondo redondo de 250
ml y se agregan cuerpos de ebullición. En cada lote de muestras a analizar se debe incluir un blanco
de reactivos al cual se le agregan los patrones internos. Se ensambla el aparato de soxhlet y se lleva
a reflujo de 8 a 12 horas. Para el análisis de organismos se pesa una submuestra de 2 gramos, se
utiliza un dedal de extracción (chico) y se agregan 150 ml de cloruro de metileno.
Se evapora la fracción del cloruro de metileno en un baño María, utilizando una columna Snyder y
hasta obtener un volumen de extracto de 5ml. La muestra se trasvasa cuantitativamente a un tubo
graduado y se concentra mediante un flujo de nitrógeno hasta 2 ml, y poco a poco se irá cambiando
el solvente a hexano (NO DEBERA SECARSE LA MUESTRA). La muestra se trasvasa a un vial de 8 ml
para pasar por cromatografía de columna.

Cromatografía de columna
Se empaca una columna cromatografía de vidrio con llave de teflón y provista con un tapon de lana
de vidrio. Se lava la columna con 20 ml de cloruro de metileno, se desechan y se agregan otros 25
ml para lograr el empaque uniforme. Se pesan 10 gr de alúmina y 20 gr de gel de sílice parcialmente
desactivado en vasos de precipitados de 50 ml. Primero se agrega el sulfato de sodio (1cm) y
después la alúmina vía seca, usando un embudo y manteniendo la llave abierta durante el empaque.
Se agrega nuevamente sulfato de sodio (1 cm) y polvo de cromo (1 cm). Cuando el solvente alcance
la superficie del cobre, se intercambia el cloruro de metileno con 50 ml de hexano. El cobre solo se
utilizara para el análisis de sedimentos.
Para eluir la muestra, se deja que el nivel del solvente baje a la superficie del polvo del cobre y se
agrega la muestra junto con tres enjuagues del vial (0.5 ml cada uno). Se abre la llave para que
penetre la muestra y se inicia el procedimiento de elución: fracción 1 con 100 ml de hexano y 2 con
200 ml de hexano: cloruro de metileno 5:5.
Se evaporan ambas fracciones, utilizando columnas Snyder y en baño María, hasta un volumen de
5 ml. La muestra se trasvasa cuantitativamente a un tubo graduado y se concentra mediante un
flujo de nitrógeno hasta 2 ml, y poco a poco se irá cambiando el solvente a hexano para el caso de
la fracción 2. Se trasvasan cuantitativamente a viales de 2 a 8 ml.
La fracción 1 que contiene los hidrocarburos alifáticos saturados, se analiza por cromatografía de
gases usando detector de ionización de flama (FID). La fracción 2 que contiene los hidrocarburos
aromáticos, plaguicidas y policlorobifenilos se le agrega antes de inyectarse los estándares TCMX
(10 µl a cada muestra) y O-terfenil (5 µl a cada muestra) se analiza por cromatografía de gases
utilizando detector de ionización de flama y detector de captura de electrones para cada grupo
respectivamente.

Los cálculos se realizaran en base a curva de estándares tradicionales o mediante el programa de

cálculo de Texas.

Condiciones de Operación del Cromatógrafo de Gases

Detector Ionización de Flama

Captura de electrones
(ECD) (FID)
Capilar 30 m x 0.32 mm, .25 µm de
Columna x 0.2 mm x Capilar 2.5 m grosor de capa,
grosor, de capa, sílice fundido
0.33 µm de fundido sílice fenilmetil siloxano al 5%.
fenilmetil silicona al 5%
Gas acarreador
Nitrógeno a 1.5 ml / min Nitrógeno 1.1
mil / min
Gas de relleno Nitrógeno 18.1
Nitrógeno 28.5 mil / min
mil / min
Temp. inyección 280°C 275°C
Temp. Detección 300 °C 325°C
Temp. Inicial : 60 °C Temp. Inicial: 100°C
Tiempo inicial: 1min Tiempo: 1 minuto
Prog. Temp.
Rampa: 140°C/min – 6° C/min Rampa: 6°C /min
Rampa 2: 1.5 °C/min/250°C/min Rampa:10°C/min/300°C/5min
Temp final:290°C
Tiempo final: 20 min