DETERMINACIÓN DE SUSTANCIAS BIOLÓGICAMENTE ACTIVAS POR

VOLTAMPEROMETRÍA DE ONDA CUADRADA

1. INTRODUCCIÓN
Los ácidos ascórbico y fólico son sustancias presentes en seres vivos que realizan
funciones importantes. El ácido úrico es un producto del metabolismo de purinas que es
desechado con la orina. El exceso o deficiencia de los tres ácidos mencionados son
indicios de la aparición de algunas enfermedades altamente incapacitantes o fatales, o del
mal funcionamiento de células, órganos o glándulas.

La voltamperometría de onda cuadrada consiste en la aplicación de una señal eléctrica

que combina una escalera de potencial con un barrido lineal con el fin de generar
reacciones redox de la especie de interés en forma reversible y poder generar una
corriente eléctrica lo suficientemente grande para permitir su cuantificación a niveles bajos
de concentración.

La determinación de los valores de concentración de ácidos biológicamente activos se

realiza generalmente mediante cromatografía líquida de alta resolución o
espectrofotometría. No obstante, las propiedades redox de esas moléculas puede
aprovecharse para su cuantificación por métodos electroquímicos.

2. OBJETIVO
Determinar la concentración de sustancias bilógicamente activas en muestras acuosas.

3. CONSULTAS PRELIMINARES
3.1 En qué procesos metabólicos intervienen los ácidos ascórbico, úrico y fólico en el ser
humano?.
3.2 Consulte las frases R y S y las fichas de seguridad de las sustancias que se
emplearán en esta práctica, límites de exposición en recinto cerrado y su nivel de
toxicidad.

4. MATERIALES
MATERIAL CANTIDAD
Balones aforados 25.00 mL 2
Balones aforados de 10 mL 4
Balones aforados de 100 mL 1
Pipetas de 1.0 mL 2
Micropipeta 1
Pipetas de 5.00 mL 2
Erlenmeyer de 50 mL 6
Frasco lavador 1
Espátula 1
Vidrio reloj 1

5. REACTIVOS
SUSTANCIA(1,2) CANTIDAD
Ácido úrico
Ácido ascórbico
Acido Fólico 200 mL
Fosfato monobásico de sodio
Fosfato dibásico de sodio 200 mL
Cloruro de potasio 200 mL
1. Remitir al manual de protocolo de riesgo/seguridad y fichas técnicas de seguridad.
2. Remitir al manual de protocolo de preparación de soluciones

6. EQUIPOS
EQUIPO* CANTIDAD
Polarógrafo Metrohm VA 746 1
Balanza analítica 1
Plancha de calentamiento 1
*Remitir al manual de protocolo de calibración de equipos

7. PROCEDIMIENTO
Prepare las siguientes soluciones empleando como solvente agua deionizada.
100 mL de solución 0.1 M de buffer de fosfato a pH 6.0
10 mL de solución de cloruro de potasio 1.0 F
25 mL de solución 0.1 M de ácido ascórbico
25 mL de solución 0.1 M de ácido úrico
25 mL de solución 0.1 M de ácido Fólico

Introduzca en la celda de reacción 0.5 mL de solución de ácido ascórbico. Agregue 10 mL

de solución buffer y 1.0 mL de solución de cloruro de potasio. Programe el equipo con las
siguientes condiciones para realizar un estudio por voltamperometría de onda cuadrada.
Este mismo procedimiento lo debe repetir para las soluciones de los dos ácidos restantes.

No olvide que después de cada barrido debe hacer limpieza exhaustiva del electrodo.
Condiciones de trabajo
Electrodo de trabajo Carbón vítreo
Electrodo de referencia Ag/AgCl
Electrodo auxiliar Platino
pH de la solución de análisis 4.6
Velocidad de agitación 2000 rpm
Electrolito soporte Cloruro de potasio
Modo de trabajo Onda cuadrada
Pulso aplicado 50 mV
Tiempo del pulso 30 ms
Tiempo de medida 16 ms
Intervalo de potencial 200 a 1000 mV
Método de cuantificación Adición estándar

Identificada la señal generada por el ácido, cambie la solución de la celda y ahora

agregue 5 mL de muestra y los demás componentes en las cantidades arriba indicadas.
Realice el barrido de potencial. Después de realizar la primera medición agregue
volúmenes sucesivos de 100 microlitros del patrón de ácido y realice el barrido de
potencial después de cada adición.

Con los valores de corriente de pico obtenidos, construya una curva de adición estándar.
Y hallar la concentración del ácido en la muestra problema.
Recoger los residuos en el recipiente apropiado y lavar con abundante agua desionizada
los electrodos y el vaso de la celda de reacción.

8. OBSERVACIONES, CÁLCULOS Y RESULTADOS

Determinar la concentración de los ácidos en la muestra problema.

9. PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS
Qué otras sustancias orgánicas se pueden determinar por la técnica empleada?

10. RECUPERACIÓN, DESACTIVACIÓN Y/O ALMACENAMIENTO TEMPORAL DE

LOS RESIDUOS QUÍMICOS

10.1 RECUPERACIÓN
No aplica.

10.2 DESACTIVACIÓN
No aplica.

10.3 ALMACENAMIENTO TEMPORAL

11. BIBLIOGRAFÍA
Harris Daniel. Análisis Químico Cuantitativo. Grupo Editorial Iberoamérica. Bogotá 2002.
Skoog Y West, Química Analítica, McGraw Hill, Bogotá 2004.
Bard Allen. Electrochemical Methods, Fundaments and Applications, Jhon Wiley and
Sons, New York 2004.