Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Zaragoza C II

Q.F.B.

Laboratorio Bioquímica Celular y de Tejidos II

“Anatomía de un mamífero (Rattus norvegicus)”

Grupo: 2551

Asesor:

Equipo: 7

Integrantes:

 Irving Gerardo Campos Gómez

 Carlos Alberto Gachuz Silva
 Jesús Aaron de la Rosa Piñon
 Marco Antonio Salgado Olivares

14/02/19

2019-2
OBJETIVOS

 Analizar los órganos externos de la rata e identificar los diferencias entre

una rata macho y una hembra
 Realizar una disección de la rata y analizar los órganos de las cavidades
torácica, abdominal y pélvica
 Extraer los órganos de la rata y comparar su morfología y fisiología con la
de los humanos
METODOLOGÍA

Una vez traída la rata (Wistar) del bioterio se procedió a verificar que estuviera
muerta, posteriormente se colocó a la rata en posición decubito supino sujetando
sus cuatro patas (con ayuda de hilo grueso) sobre la tabla de disección. Se analizó
el exterior de la rata identificando los órganos sensoriales y los órganos genitales
externos. Con ayuda de las tijeras mayo se hizo un corte del área pelvica al tórax y
cuatro cortes transversales (partiendo del punto superior e inferior de la primera
insicion), con las pinzas allis se sujeto la piel de la rata y con ayuda de las pinzas
de disección y las tijeras se cortó el difragma y see partio en dos la caja toracica.
Ya que se tuvieron expuestos los órganos de ambas cavidades (toracica y
abdominal) se extrajo en el siguiente orden los órganos: hígado, pancreas,
estómago, intestino delgado y grueso, riñones, glándulas suprarrenales, ovarios,
matriz y corazón. Todos loa órganos fueron puestos en una charola de papel
aluminio y se

DISCUSIÓN DE RESULTADOS

En la fotosíntesis, la energía solar se convierte en energía química mediante organismos

fotosintéticos (en este caso la clorofila que está en los cloroplastos, contenidos en las
células vegetales de las hojas). Durante la fotosíntesis no se absorben de igual manera
todas las longitudes de onda en la luz del sol ya que los organismos fotosintéticos
contienen moléculas llamadas pigmentos. (UCMP, 2010)

Los pigmentos son materiales (moléculas o

grupos de ellas) que cambian el color de la luz
que incide sobre ellos (reflejándola o
absorbiéndola), el resultado de esta absorción
“selectiva” es el color con el que se perciben a
la vista dichos colores (Finlay, 2003). Como en
el caso de las plantas que contienen un exceso
de α y β clorofila, pigmentos verdosos que
contienen un anillo de porfirina con un 𝑀𝑔2+ en
el centro, esta es una molécula estable en forma
de anillo alrededor de la cual los electrones son
libres de migrar. Debido a que los electrones se Imagen 1. “Molécula de α-clorofila”
mueven libremente, el anillo tiene el potencial de ganar o perder electrones fácilmente,
mecanismo mediante el cual la clorofila captura la energía solar. Las clorofilas absorben la
luz de todas las longitudes del espectro visible excepto la longitud de 480-580 que es el
rango de la luz verde, siendo esta reflejada y dando el color característico verde a las
plantas que tienen este pigmento. (Larkum, 2005) Hay varios tipos de clorofila: α, esta
molécula hace posible la fotosíntesis, todas las plantas, algas y cianobacterias a
contienen; β. Que se presenta solo en algas verdes y cianobacterias; un tercer grupo c se
encuentra en la cromista y dinoflagelados. (UCMP, 2010). Los carotenoides son
generalmente pigmentos naranjas y amarillos, estos compuestos están formados por dos
pequeños anillos de seis carbonos conectados por una “cadena” de átomos de carbono.
Los carotenoides no pueden transferir energía solar directamente a la via fotosintética,
sino que deben pasar su energía absorbida a la clorofila (por eso se les llama pigmento
accesorio) (UCMP, 2010). Los flavonoides son metabolitos secundarios que pueden
absorber hasta un 90% de la radiación UV del sol y que reflejan la luz roja, lo que le
confiere dicho color a las plantas. (Smirnoff. 2002)

Para el experimento se utilizaron hojas de espinaca fresca (compradas en una

verdulería) y hojas rojas de un rosal de una jardinera de la escuela).

Imagen 2. “Hoja de rosa roja silvestre” Imagen 3. “Hoja de espinaca”

A las dos variedades de hojas se les realizo el mismo tratamiento, que consta de:

1) Lavar las hojas únicamente con abundante agua, para retirar el exceso de tierra y otras
sustancias que contamine la extracción.
 2) Con un mortero se pulverizo las hojas
(previamente desvenadas), mientras se le
agregaba etanol al 76° (7mL aprox.), esto
para poder extraer los pigmentos (α y β
clorofilas, carotenoides, flavonoides, etc.)
de las hojas. Se realizan extracciones con
etanol debido a que aparte de ser
económico y poco contaminante,
pigmentos como las clorofilas y los
carotenoides son muy solubles (a
diferencia de los flavonoides que si son
solubles en agua y se extraen con la sola
Imagen 4. “Pulverización de las
pulverización). (Torossi 2007)
hojas con etanol”
3) Se filtró la mezcla con ayuda de papel filtro de poro abierto, para poder realizar una CP
sin material orgánico que tape los poros del papel.

Cromatografía en papel de pigmentos de hojas verdes (A) y rojas (B) con etanol:

4) En dos vasos de precipitado de 200mL se colocaron 2 tiras (una x vaso) de 20x7 cm, al
vaso “A” se le agrego la mitad del filtrado de hojas verdes y se diluyo con 3mL de etanol
(para favorecer la elución), se dejó eluir durante media hora hasta que se observó la
separación de los componentes del filtrado (pigmentos). Lo mismo sucedió con el vaso “B”
pero este contenía filtrado de hojas rojas en lugar de verdes.

Xantofilas
α-Clorofila
β-Clorofíla

Imagen 5. “Vaso A, CP hojas

verdes”
 Flavonoides
Xantofilas
α-Clorofila
β-Clorofíla

Imagen 6. “Vaso B, CP hojas

rojas”

En la cromatografía en papel se observan 3 bandas de separación en el caso de la

muestra de hojas verdes que corresponde a verde fuerte (Rf= 1.02), verde claro
(Rf=1.04), amarillo (Rf=1.09) y en la muestra de hojas rojas se ven 4 bandas siendo las
primeras 3 iguales a la muestra de hojas verdes más una banda de flavonoides (Rf=1.13).

Tomando en cuenta lo mencionado, el pigmento verde fuerte es de mayor polaridad,

mientras que el pigmento rojo es de menor polaridad, para poder observar una mejor
separación de estas fases se recomienda una mezcla de eluyente de Benceno-acetona-
éter de petróleo. (Torossi 2007)

Análisis espectrofotométrico de pigmentos de hojas verdes:

5) Del filtrado de hojas verdes (del restante del mortero) se tomó una alícuota de 5mL y
se realizó una dilución 1:30 con etanol para poder observar las muestras en el
espectrofotómetro. Lo mismo se realizó con el filtrado de hojas rojas.
 6) Se colocó un poco de la dilución en la
celda y se procedió a hacer un barrido
leyendo la absorbancia de la muestra a
diferentes longitudes de onda (cada 10
nm) empezando en la longitud 400 y
terminando en la 750. Cada lectura se
ajustaba un blanco con etanol. Lo mismo
se realizó para la muestra de las hojas
rojas.

Imagen 7. “Muestras diluidas de pigmentos”

Tabla 1. “Absorbancia de pigmentos de la hoja Tabla 2. “Absorbancia de pigmentos de la hoja

verde a diferentes longitudes de onda” roja a diferentes longitudes de onda”
Longitud de onda Absorbancia Longitud de onda Absorbancia

400 0.404 400 0.388

410 0.449 410 0.400

420 0.489 420 0.410

430 0.537 430 0.452

440 0.549 440 0.458

450 0.418 450 0.354

460 0.387 460 0.336

470 0.392 470 0.310

480 0.295 480 0.245

490 0.141 490 0.131

500 0.066 500 0.069

510 0.038 510 0.045

520 0.030 520 0.040

530 0.037 530 0.034

540 0.037 540 0.036

 550 0.041 550 0.039

560 0.050 560 0.042

570 0.056 570 0.046

580 0.062 580 0.054

590 0.075 590 0.055

600 0.080 600 0.061

610 0.089 610 0.071

620 0.092 620 0.066

630 0.114 630 0.081

640 0.189 640 0.140

650 0.297 650 0.241

660 0.244 660 0.200

670 0.079 670 0.061

680 0.021 680 0.014

690 0.013 690 0.007

700 0.004 700 0.004

710 0.002 710 0.002

720 0.003 720 0.003

730 0.004 730 0.004

740 0.003 740 0.003

750 0.003 750 0.003

Grafica 1. “Comparación de absorbancias de pigmentos de hojas rojas y hojas verdes a

diferentes longitudes de onda”

A
 Absorbancia de pigmentos
0.6

0.5

B
0.4
ABSORBANCIA

E
0.3

0.2

D
0.1
C
F
0
400
410
420
430
440
450
460
470
480
490
500
510
520
530
540
550
560
570
580
590
600
610
620
630
640
650
660
670
680
690
700
710
720
730
740
750
LONGITUD DE ONDA (NANOMETROS)

La línea roja corresponde a las lecturas de hojas rojas y la línea verde a las lecturas de
hojas verdes.

Imagen 8. “Espectro de absorción de

pigmentos (teórico)”
La grafica muestra el barrido de las absorbancias de los pigmentos de ambas hojas, la
línea verde representa los pigmentos de hojas verdes y la línea roja los pigmentos de las
hojas rojas, en ambos casos las líneas presentan un comportamiento similar (teniendo
picos y decrecimientos de absorbancia a las mismas longitudes de onda), la única
diferencia visible es una mayor absorbancia durante todas las mediciones para los
pigmentos de hojas verdes, esto se puede deber a que si se compara la gráfica con la
imagen 8, se puede ver que se trata del comportamiento de las clorofilas, las cuales se
encontrarían en menor concentración en las hojas rojas.

En la gráfica existen 6 longitudes de onda importantes que revelan (al comparar con la
imagen 8) el pigmento presente en la muestra:

A. Pico máximo de toda la grafica correspondiente a la longitud de onda 440,

comparándola con la imagen 8 coincide con el pico máximo de la α-Clorofila (440-
450). La grafica indica un comportamiento de la absorbancia de la clorofila alfa
desde 380 hasta 450 (luz azul) y despues de 600 a 700 (luz roja) (OpenStax
College, Biología)
B. Pico en 470 que corresponde a carotenos debido a que en esa longitud no existe
absorbancia de clorofilas. (OpenStax College, Biología)
C. Primer punto más bajo de la gráfica con longitud de onda de 520 correspondiente
al punto donde se deja de absorber la luz en carotenos. (OpenStax College,
Biología)
D. En la longitud de 630 se observa una asíntota que representa el comportamiento
de absorbancia máxima (de la luz roja) de la β-Clorofila. (OpenStax College,
Biología)
E. Existe un segundo pico máximo de longitud de onda en el espectro de luz roja, en
650 a 660 que corresponde al pico máximo de absorción de la α-Clorofila en este
espectro. (OpenStax College, Biología)
F. Por último se deja de obtener señales de absorbancia en la longitud de onda de
700, esto para todos los pigmentos (pero el último de ellos en absorber a esta
longitud es la α-Clorofila, seguido de la β-Clorofila a 675 y los carotenos a 525.
(OpenStax College, Biología)
Extracción de cloroplastos de las hojas de espinaca:

1) Se colocaron 4 hojas de espinaca (previamente desvenadas) en un mortero (enfriado

con hielo) se agregaron 20mL de solución buffer de Tris-HCl (pH 7.3), además de 10mL
NaCl 0.9% y macerar sobre hielo.

2) Se separó el material orgánico solido con ayuda de un papel filtro de poro abierto.

3) El filtrado se metió a la centrifuga (en un tubo de ensaye) por 10 min a 3500rpm

4) Una vez terminado de centrifugar se decantó el sobredrenante y se resuspendio el

botón (precipitado) con 7.5mL de solución buffer de Tris-HCl

5) Tomando una gota de la mezcla y colocándola en un portaobjeto (con cubre objetos) se

logró observar los cloroplastos de las células vegetales (a un objetivo de 40x).
 Imagen 8. “Cloroplastos de las células de la espinaca"

Los cloroplastos, al igual que las mitocondrias, son organelos que según la teoría
endosimbiotica fueron incluidos dentro de la célula eucariota primitiva, formando una
simbiosis, esto se cree debido a que contienen su propio material genético y estructuras,
así como dobles membranas. Los cloroplastos presentan una doble membrana externa y
un sistema de membranas interno, las membranas tilacoidales. Dentro de este organelo
ocurre un proceso llamado fotosíntesis, esta se divide en dos fases, la luminosa: se
realiza en la membrana de los tilacoides donde se halla la cadena de transporte de
electrones y la ATP sintasa responsable de la conversión de la energia lumínica en
energia química (ATP) y de la generación de poder reductor (NADPH). La fase oscura: se
produce en el estroma donde se halla el enzima RuBisCO responsable de la fijación de
CO2 mediante el ciclo de Calvin. (Karp, 2011)

La extracción de cloroplastos se lleva a cabo en frio para retrasar la degradación de de

los componentes celulares, para evitar la foto destrucción de la clorofila. La solución buffer
de Tris-HCl rompe las paredes celulares y extrae los cloroplastos, por último la solución
salina precipitara los cloroplastos disminuyendo su solubilidad en el disolvente. (Luna
2015)

En el microscopio se pueden observar cientos de bolitas de color verde que

corresponden a los cloroplastos, normalmente estas están dentro de una célula vegetal,
pero debido al aislamiento que realizamos estas se encuentran dispersas en la muestra.

CONCLUSIÓN
La fotosíntesis es un proceso metabólico muy importante debido a que por medio de este
se obtiene oxígeno y glucosa indispensables para los organismos heterótrofos, entender
el funcionamiento de los pigmentos que llevan a cabo este proceso y de las estructuras
celulares que los contienen, es de gran importancia para poder predecir y sintetizar
nuevos pigmentos que ayuden a la creación de moléculas importantes para los seres
vivos.

Se logró determinar las longitudes de onda a la cual absorben la luz en el rango de luz
visible (380-700 aprox.) los diferentes pigmentos presentes en las hojas de las plantas, los
cuales se compararon con las gráficas de absorbancia y así se identificó de que
pigmentos se trataba (alfa y beta clorofila y carotenos). Además se aisló y observo los
cloroplastos, que contenían dichos pigmentos.

CUESTIONARIO

1.- ¿Qué es fotosíntesis? Describa el proceso de manera general.

La fotosíntesis es un proceso químico usado por las plantas mediante el cual

producen energía química a partir de la energía lumínica solar. Gracias a esta
energía del sol, las plantas convierten el agua del suelo y el dióxido de carbono del
aire en glucosa, un nutriente esencial que les provee energía y permite la
fabricación de la celulosa.

2.- ¿Cuál es la importancia de los pigmentos fotosintéticos?

En la fotosíntesis no se usan de igual manera todas las distintas longitudes de

onda en la luz del sol ya que los organismos fotosintéticos contienen moléculas
llamadas pigmentos que absorben solo longitudes de onda específicas de la luz
visible, mientras que reflejan otras.

3.- En cuento a los pigmentos, ¿Cuál es la diferencia

entre una hoja verde y una hoja roja?

Las hojas de las plantas son verdes porque tienen

mucha clorofila, el pigmento principal que captura la luz
solar para el proceso de fotosíntesis. Hay dos tipos de
clorofila y entre ambas absorben todos los colores de la
luz excepto el verde, que es reflejado y por eso la
mayoría de las hojas tiene ese color. Las hojas también
producen otros pigmentos que absorben y reflejan
otros colores, pero generalmente tienen tanta clorofila que los demás pigmentos
quedan ocultos. Cuando la hoja se apresta a morir, la clorofila es removida y
comenzamos a ver los colores reflejados por los otros pigmentos, que pertenecen
a dos grupos principales: carotenoides (amarillo, anaranjado y pardo) y
antocianinas (rojo y morado).

4.- ¿Por qué se utiliza etanol en la extracción?

Los pigmentos clorofílicos son insolubles en el solvente universal llamado agua.

Pero sí son solubles (afinidad química) en solventes orgánicos como por ejemplo
alcohol etílico y acetona.

5.- ¿Cuál es la diferencia entre los diferentes tipos de clorofila además de su

estructura?

Aunque tanto la clorofila a como la clorofila b absorben luz, la clorofila a tiene una
función única y crucial al convertir la energía de la luz en energía química (como
puedes ver en el artículo reacciones dependientes de la luz). Todas las plantas
fotosintéticas, algas y cianobacterias contienen clorofila a, mientras que solo las
plantas y algas verdes contienen clorofila b, junto con algunos tipos de
cianobacterias.

6.- ¿Qué ventajas presenta el utilizar la cromatografía en papel?

Para lograr ver los diferentes colores de los pigmentos que componen a una hoja.

 clorofila b
 clorofila a
 xantofila
 carotenos

BIBLIOGRAFÍA

 Torossi B. Flavio D., “Una experiencia sencilla con fundamentos complejos: la

separación de pigmentos fotosintéticos mediante cromatografía sobre papel”.
2007. Articulo [Internet]. A. Química, 103(4), 45-51 [consultado 9/11/18] disponible
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Articulo [Internet]. [consultado 9/11/18] disponible en: ISBN 0-8129-7142-6
 Larkum Anthony WD, Kúhl. “Chlorophyll d: the pluzzle resolved”. 2005. Trends in
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phyll_d_the_puzzle_resolved_Trends_Plant_Sci_10_355-357
 UCMP, Berkeley. “Pigmentos fotosintéticos” (2010).[Internet]. [consultado 9/11/18]
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 Martin C. Fabian J., Castañeda Julian G.”Analisis de la clorofila spinaca oleracea y
cuantificación de albumina de espagueti utilizando espectofotometria”. (2006)
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(2008).México.
 Karp Gerald. “Biología Celular y Molecular: Conceptos y Experimentos”. Mc Graw
Hill. México. 2001. Pp 3009-311
 “Porque durante el proceso de aislamiento de cloroplastos se trabaja a bajas
temperaturas”. Luna [internet] [consultado 10/11/18] disponible en:
https://brainly.lat/tarea/6544364