Mecanismos de patogenicidad de Listeria

Lizbeth Paola Arizmendi

Samantha Janiot Rivera
Jhon Eduard Miranda
Yesenia C Navarro
 Listeria spp
● Bacilos Gram positivos.
● Anaerobios facultativos.
● No esporulados. No presentan cápsula.
● Contenido de DNA G+C del 36-38%.
● Crecimiento en un rango de temperaturas de 1 a 45 °C.
● Es móvil.
● Beta hemólisis estrecha.
● Tamaño de 0.5 μm de ancho por 1,2 de largo
● El género Listeria actualmente incluye 17 especies
reconocidas. Solo dos de estas especies, Listeria
monocytogenes y Listeria ivanovii son patógenas.
 Crecimiento en:
Patógeno Alimentario Ambientes ácidos
Bajas temperaturas
Altas concentraciones de sal

Afecta principamente a : Es capaz de cruzar:

Neonatos Barrera placentaria

Ancianos Barrera intestinal
Embarazadas Barrera hematoencefálica
Inmunocomprometidos
Etapas para la infección por Listeria monocytogenes

PARTE 3 PARTE 1

Movimiento Entrada a la célula y

direccional lisis fagolisosómica
Patogenia

PARTE 2
Replicación bacteriana
INTESTINO
Enterocito

Célula caliciforme
INTESTINO

Internalina A

E-Cadherina

Células caliciformes
INTESTINO

Células caliciformes
 Barrera hematoencefálica

E-Caderina
Internalina A
Bazo

Internalina B c-Met
Hígado

Barrera placentaria
 En embarazadas y recién
nacidos puede causar:

● Aborto espontáneo
● Amnionitis
● Parto prematuro
● Sepsis Neonatal
● Meningoencefalitis
● Muerte neonatal

En pacientes no
Inmunocompetentes:
● Fiebre
● Dolores musculares
● Cefalea
● Rigidez del cuello
● Confusión
● Pérdida de equilibrio
Barrera placentaria ● Convulsiones.
listeriolisina O

Hepatocito
FORMACIÓN DE PORO EN MEMBRANA CELULAR Listeriolisina O

Membrana Celular
 Fragmentación
mitocondrial

Modificación de
histonas

DeSUMOlación

Formación de poro
 lntA

lntC
 lntA

BAHD1
ActA
 Gram: Bacilos Catalasa Motilidad a 22°C Factor CAMP:
Gram positivos (H2O2 al 3%) Positiva Positivo
Positiva (Forma de sombrilla

Reducción de Reducción de Ureasa: TSI: A/A, Gas

nitratos: telurito a teluro: Negativo negativo; H2S
Negativo Positivo negativo

Utilización de CH:
Hidrólisis de la Glucosa, maltosa,
Rojo de metilo: ramnosa, salicina,
esculina: Desarrollo a 4°
Positivo Positivo: Manitol .
Positiva C: Positivo
Negativo: Xilosa
(Variable
 Tratamiento
Listeria monocytogenes, resistencia natural a las
cefalosporinas.

● Ampicilina : Impide la replicación e inhibe la síntesis de

peptidoglicano.
● Gentamicina: (Aminoglucósido) Impide la producción de
proteínas de la bacteria.
● Amoxicilina.
Patogenia
 Enfermedad transmitida
Listeria monocytogenes
La bacteria:
por los alimentos. (Listeriosis) ● Estilo de vida
saprófito.
● Ubicación: suelo,
Los CCE de USA estiman su La mayoría de los casos se
vegetación, y heces
responsabilidad por año presentan en:
de animales.
en: ● Inmunocomprometidos
● Altamente resistente
● 1600 casos ● Embarazadas
Tasa de a las precauciones
● 260 muertes ● Recién nacidos
mortalidad: antibacterianas
● Ancianos
aproximadamente comunes tomadas en
de un 20%. la preparación de
Principales alimentos.
manifestaciones clínicas: ● La dosis infecciosa
● Sepsis Infecciones diseminadas, es alta.
● Meningoencefalitis preocupantes para mujeres ● Un adulto promedio
● Muerte embarazadas. ingiere 105 UFC,
cuatro veces al año.

Desafío de evaluar la virulencia de
Listeria monocytogenes in vivo.
Gran cantidad de animales
requeridos.
Estudios han analizado cepas
patógenas para comprender Uso de códigos de
su evolución y estructura de barras de ADN
la población. (etiquetas de firma).
Análisis de la virulencia de Permiten el análisis
clusters clonales representativos multiplexado de varias cepas
en relación con cepas de dentro de un solo animal.
referencia históricas.
Permite comprender cómo la virulencia
ha evolucionado en aislados clínicos a lo
largo del tiempo al compararlos con
cepas de referencia de laboratorio.
 Caracterización de la virulencia de 77 Propósitos:
cepas de L. monocytogenes.

● Identificar cepas con una mayor o

menor virulencia sistémica en
comparación con las referencias de
laboratorio.
72 Cepas 5 cepas de pacientes
asociadas al inmunocomprometidos
embarazo. sin condición de
embarazo.
● Evaluar las tendencias en virulencia,
comparando las cargas bacterianas en
68 Cepas de aislado
los órganos de las mujeres en
esporádico.
condición de embarazo.
4 cepas de brotes
transmitidos por
alimentos.
Materiales y métodos
 77 aislados clínicos:
Cepas de Las bacterias se cultivaron
en medio de infusión de
referencia: Se obtuvieron de los Centros
cerebro y corazón. (BHI)
para el Control y la Prevención
● 10403S de Enfermedades.
(susceptibles a la Cuando fue necesario, los
eritromicina). medios se suplementaron
72 cepas mujeres embarazadas: con los siguientes
● DP-L3903
● 68 (94%) fueron aisladas de casos esporádicos. antibióticos.
(resistente a la
● 4 (6%) fueron de brotes. ● cloranfenicol
eritromicina).
● 10403S (7,5μg/ml)
etiquetadas con Se obtuvieron del Memorial ● ácido nalidíxico
firmas. Sloan-Kettering Cancer Center. (25 μg/ml)
● estreptomicina
(200μg/mL)
5 cepas aisladas de la sangre de pacientes ● eritromicina
inmunocomprometidos. (2 μg/mL).
 Integración de la etiqueta de firma (código de barras de ADN) en cepas clínicas

Se insertaron etiquetas de firma únicas de Las cepas clínicas marcadas generadas

40pb en el genoma de L. monocytogenes en este estudio usaron las etiquetas 116,
mediante la integración específica del sitio del 119, 191, 205, 210, 219, 231, 234, 242,
vector pPL2 288 y 296.

Las integraciones se confirmaron por

selección de resistencia al cloranfenicol
y PCR.
*Este estudio se llevó a cabo en estricta conformidad con las recomendaciones de la Guía para el cuidado y uso de animales de laboratorio de los Institutos Nacionales de Salud. Todos los protocolos fueron revisados ​y aprobados por el
Comité de Cuidado y Uso de Animales de la Universidad de California, San Francisco (IACUC # AN079731-03A).

INFECCIONES ANIMALES

Se cultivaron cepas 11 cepas marcadas diferencialmente se

combinaron en proporciones iguales para
individuales en BHI a
generar diez grupos de entrada
37 ° C

Las cobayas Hartley embarazadas Se inocularon ratones CD1

se inocularon en el día gestacional hembras no embarazadas de 6 - 8
35 con un total de 1x108 UFC de semanas de edad con 2x105 CFU
bacterias agrupadas por animal. bacterias agrupadas por animal.
En el caso de los ratones, los Se sembraron alícuotas de cada
bazos murinos se eliminaron a conjunto de salida en placas de
las 48 h.p.i. agar BHI que contenían 25μg/mL
Los órganos se homogeneizaron de ácido nalidíxico. CFU por Se almacenaron los coágulos de
Los bazos y placentas del en 0,2% de Igepal (Sigma) con órgano se enumeraron, y colonias
conejillo de indias se eliminaron estas suspensiones a -20ºC.
un triturador de tejidos. de cada conjunto de salida se
a las 24 h.p.i. rasparon de las placas y se
resuspendieron en PBS.

Se realizó PCR Para secuenciar
y analizar el ADN de las cepas
DETERMINACIÓN DE VIRULENCIA:
Se calculó un puntaje z que describe
la abundancia relativa normalizada
para cada cepa en comparación con
10403S
ENSAYO DE COMPETENCIA DIRECTA:
Se inocularon ratones hembra CD1 de 6-8
semanas de edad con 2x105 UFC de un
aislado clínico (susceptible a la eritromicina)
y 10403S (resistente a la eritromicina) 1: 1.
Las bacterias se recuperaron del bazo a las 48
h.p.i. y se enumeraron, las colonias
individuales se probaron para determinar la
susceptibilidad diferencial a la eritromicina
Al grupo de control se le inyectó una relación
1: 1 de dos cepas 10403S que diferían en su
susceptibilidad a la eritromicina.
La significación estadística se determinó
mediante ANOVA de una vía con las
comparaciones múltiples de Dunnett después
de la prueba.
RESULTADOS
Aislamientos clínicos y método de detección in vivo Cuatro cepas provenían de tres brotes diferentes de
listeriosis asociadas con las siguientes fuentes de
alimentos contaminados:
(i) queso estilo mexicano en 2005 (aislado de la
placenta, serotipo 4b) ,
(ii) carne de deli de pavo en 2006 (sangre placentaria
y neonatal) aislamientos de madre y neonato no
relacionados, serotipo 4b)
(iii) queso de cabeza de cerdo en 2011 (aislado de
sangre materna, serotipo 1 / 2a) .
Solo las cepas del CDC fueron serotipadas. Entre
estos, el serotipo 4b fue el más común, seguido por
1/2 a y 1/2 b
Perfilar la virulencia sistémica en ratones y conejillos de indias

3A. Los ratones se infectaron por vía intravenosa (i.v.) con un total de 2x105 3B. Usando qPCR con cebadores específicos para cada código de barras de ADN, se determinó la abundancia
UFC / animal (10 animales / grupo). La mediana de la carga bacteriana en los relativa promedio de cada cepa clínica en comparación con 10403S entre las bacterias recuperadas de cada
bazos control 48 horas después de la inoculación (h.p.i.) fue de 7,2x107 CFU bazo.
3C. De acuerdo con los resultados, las dos cepas hipervirulentas 13 y 79 eran 4A.La carga bacteriana mediana en los bazos del grupo de control fue 2.4x106 CFU, y
5 veces más virulentas que 10430S y la cepa 63 era 2 veces más virulenta. varió de 3.6x106 CFU (Grupo D) a 3.1x107 CFU (Grupo C) en los bazos de animales
inoculados con grupos que contenían aislados clínicos, lo que indica una mayor carga
general.

La mediana de carga bacteriana en el grupo de control fue de 8.2x105 CFU por placenta
 Pantalla de virulencia en la placenta de conejillo de indias

4B. Se identificaron 22 cepas hipervirulentas y 20 hipovirulentas

4C. Determinamos la abundancia relativa de aislados clínicos en la placenta de
cobaya en comparación con 10403S. Identificamos 14 cepas clínicas con alta y
10 con baja virulencia en la placenta
4D. Determinación de la abundancia relativa de aislados clínicos en la placenta de cobaya en comparación con
10403S. Identificamos 14 cepas clínicas con alta y 10 con baja virulencia en la placenta
CONCLUSIONES
● Además de la virulencia bacteriana, factores independientes como la dosis ingerida, la genética materna y la salud materna en general pueden
influir de manera importante en el resultado de la exposición a L. monocytogenes.

● La colonización placentaria exitosa requiere una infección sistémica robusta. Sin embargo, esto no significa que L. monocytogenes no haya
desarrollado determinantes especializados para infectar la placenta.

● La falta de una clara diferencia entre el brote y las cepas esporádicas sugiere que la epidemiología listerial no es una función de la virulencia de
los patógenos, sino de otros factores, probablemente relacionados con las prácticas individuales de comportamiento / salud y producción de
alimentos.

● Se encontró un estrecho acoplamiento entre la carga bacteriana materna y la infección placentaria, lo que sugiere que un factor principal de
susceptibilidad placentaria es el grado de infección materna.

● El enfoque del código de barras del ADN es una forma poderosa y económica de evaluar el rendimiento de un gran número de clones diversos en
modelos animales.