INNOVATION

Techniques émergentes d’analyse

de l’eau utilisant du matériel
biologique

par Florence LAGARDE

Chargée de recherche au CNRS
et Nicole JAFFREZIC-RENAULT
Directeur de recherche au CNRS
Présidente du Club Microcapteurs Chimiques (CMC2)

Résumé : Il existe à l’heure actuelle une forte demande pour des méthodes d’analyse
rapides et peu coûteuses permettant le suivi des polluants chimiques présents dans
l’environnement et l’évaluation de leurs effets toxiques. Certains outils biologiques à base
de cellules, d’enzymes, d’anticorps ou d’ADN s’avèrent prometteurs, en complément ou
en alternative aux méthodes chimiques classiques. Dans cet article, nous évoquerons
plus particulièrement le cas des biocapteurs et des biosorbants (principes, avantages,
limitations, application à l’évaluation de la qualité des eaux, nouvelles tendances).
Abstract : There is currently an increasing need for fast and cost-effective analytical
methods suitable for water pollutants monitoring and toxicological impact assessment. In
this context, some biological tools based on whole cells, enzymes, antibodies or DNA
appear as excellent alternatives or complementary techniques to classical chemical
methods. This article will be more particularly focused on biosensors and biosorbents (prin-
ciples, advantages and limitations, application to water quality assessment, new trends).
Mots-clés : Qualité des eaux, analyse environnementale, polluants chimiques, toxi-
cité, biocapteurs, biosorbants
Keywords : Water quality, environmental analysis, chemical pollutants, toxicity, bio-
sensors, biosorbents

Points clés
Domaine : Techniques d’analyse
Degré de diffusion de la technologie : Emergence | Croissance | Maturité
Technologies impliquées : biocapteurs ; biosorbants
Domaines d’application : environnement
Principaux acteurs français :
Pôles de compétitivité : Axelera (Rhône-Alpes)
Centres de compétence : Laboratoire des Sciences Analytiques, UMR 5180, Uni-
versité Claude Bernard Lyon 1 ; Département de Chimie Moléculaire, UMR CNRS
5250, Université Joseph Fourier Grenoble ; Centre de Phytopharmacie, IMAGES EA
4218, Université de Perpignan ; Laboratoire Sciences Analytiques, Bioanalytiques
et Miniaturisation PECSA UMR 7195 ESPCI ParisTech ; IFREMER Centre de Brest ;
Laboratoire CBAC UMR 6144, IUT de La Roche sur Yon ; GEMBAS, UMR 5246 Uni-
versité Claude Bernard Lyon 1
Autres acteurs en Europe : un grand nombre de laboratoires ou centres de
recherche travaillent dans le domaine des biocapteurs et biosorbants. Leurs tra-
vaux sont mentionnés en bibliographie. En ce qui concerne les acteurs industriels,
on peut citer au niveau européen les sociétés Biacore (Suède), Windsore Scientific,
Affinity Sensors, Remedios, Euroclon Ltd, Universal Sensors (UK), XanTec Bioana-
lytics GmbH, BioTul AG et Dr Bruno Lange GmbH (Allemagne) pour les biocap-
teurs, R-Biopharm AG (Allemagne) et Randox Laboratories Ltd (UK) pour les
supports d’immunoaffinité.

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1. Contexte
L’industrialisation intensive ainsi que les utilisations agri-
coles et domestiques d’un nombre croissant de produits
chimiques ont conduit à la dissémination de nombreux
composés toxiques dans l’environnement, à l’origine d’une
pollution des écosystèmes aquatiques. En Europe, la directive
cadre sur l’eau DCE 2000/60/EC impose la connaissance et le
suivi d’un nombre important de substances dites prioritaires
avec pour objectif un retour au bon état chimique et écolo-
gique des masses d’eau pour 2015. La mise en place de pro-
grammes de suivi et de traitement efficaces nécessite
l’utilisation de méthodes d’analyse complémentaires :
– des méthodes de screening à haut débit, rapides et à
faible coût, capables de prévoir les effets biologiques dange-
reux (toxicité globale, génotoxicité ou œstrogénicité) des
mélanges de polluants présents dans les eaux ;
– des méthodes d’analyse classiques basées sur la sépara-
tion chromatographique des polluants (LC/MS, LC/MS/MS,
GC/MS ou ICP-MS), plus lourdes à mettre en œuvre, permet-
tant de réanalyser les échantillons positifs afin d’identifier les
composés responsables. Un certain nombre d’entre elles sont
des méthodes normalisées de laboratoire. Cependant, compte
tenu des limites de détection toujours plus basses à atteindre,
et de la complexité des échantillons, elles peuvent devenir
insuffisantes dans certains cas et le développement de sup-
ports de séparation et de traitement de l’échantillon plus
sélectifs ainsi qu’une pré-concentration des analytes devient
nécessaire.
Les techniques biologiques, telles que les bioessais, les bio-
capteurs ou les biosorbants peuvent répondre à ces différents
besoins. Les bioessais ont fait l’objet de nombreux dévelop-
pements par le passé et beaucoup sont actuellement
commercialisés. Ce type d’outil ne sera donc que très rapide-
ment évoqué dans cet article. Ce dossier aura pour but princi-
pal de faire le point sur les biocapteurs et les supports
biologiques, leurs avantages, leurs domaines d’applicabilité et
les limitations éventuelles qui freinent actuellement leur
commercialisation. Le lecteur pourra se référer aux
nombreuses revues consacrées à ces différents aspects et qui
seront mentionnées dans les différentes parties du dossier.
Nota : à voir : Dossier Techniques de l’Ingénieur [P 3 900].
2. Biocapteurs
2.1 Principes et différents modes
de transduction
2.1.1 Principes
Un biocapteur est un dispositif électronique qui sert à
transformer une interaction biologique en un signal élec-
trique. Ce dispositif est basé sur l’accouplement spatial
direct d’un composé biologiquement actif immobilisé,
appelé « biorécepteur » ou « élément de reconnaissance
biologique », avec un transducteur qui agit en tant que
détecteur et un amplificateur électronique.
Nota : à voir : Dossier Techniques de l’Ingénieur [F 4 010].
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2.1.2 Transduction électrochimique
Les capteurs électrochimiques sont classés selon leur mode
de transduction : potentiométrique, ampérométrique,
conductimétrique ou impédimétrique. Le principe de base
d’une mesure électrochimique repose sur le fait que certaines
substances électroactives en solution (molécules ou ions)
peuvent échanger des électrons avec une électrode, cela dans
des conditions analytiques bien définies en particulier par le
potentiel auquel cet échange a lieu. Les différents principes
exigent toujours une conception spécifique de la cellule élec-
trochimique. Une revue récente a été consacrée aux biocap-
teurs électrochimiques (principes et architectures) [1].
2.1.2.1 Transduction potentiométrique
Les électrodes sélectives existantes mettent en jeu des
équilibres d’échange d’ions An+ aux interfaces entre le milieu
de mesure et une membrane constituée d’un matériau
conducteur ionique (électrolyte solide inorganique ou orga-
nique, membrane liquide). La nature de l’ion échangé dépend
du matériau constituant la membrane (exemple : verres spé-
ciaux pour les ions H+, solide ionique pour les ions halo-
génures, polymère avec ionophore spécifique inclus pour
d’autres ions). Pratiquement, on détermine une différence de
potentiel Ep qui s’établit entre une électrode de référence et
l’électrode sélective, à courant nul.
La loi de Nernst relie l’activité de l’ion An+ et la différence de
potentiel Ep :
RT
Ep = E 0 + × ln aAn+ (1)
nF
avec E0 constante de l’électrode sélective,
aAn+ activité de l’ion An+.
Les transistors à effet de champ de type ISFET (Ion Sensi-
tive Field Effect Transistor ) constituent une classe de trans-
ducteurs potentiométriques. Le principe a été proposé pour la
première fois par P. Bergveld en 1970. Il s’agit d’une
combinaison de deux composants : le transistor MOSFET
(metal oxide semiconductor field effect transistor ) associé à
un film mince d’un matériau conducteur ionique. Actuel-
lement, seul le capteur ISFET permettant la mesure du pH est
commercial. Par dépôt d’enzymes ou de bactéries, il est
possible de suivre des réactions enzymatiques ou méta-
boliques génératrices d’ions H+ [2].
Nota : à voir : Dossier Techniques de l’Ingénieur [P 360].
2.1.2.2 Transduction conductimétrique
La conductimétrie est une technique électrochimique alter-
native à l’ampérométrie et à la potentiométrie. Son principe
repose sur la mesure de la conductivité électrique d’une solu-
tion électrolytique contenant des charges électriques mobiles,
constituées par l’ensemble des ions. Pratiquement, la mesure
de la conductance d’un électrolyte s’effectue en immergeant
dans la solution une cellule de mesure comprenant deux élec-
trodes soumises à un signal électrique, généralement alterna-
tif et de fréquence choisie pour minimiser les effets dus aux
polarisations.
La conductance électrique G, inverse de sa résistance, est
proportionnelle à la surface S de la section perpendiculaire à
la direction du courant et inversement proportionnelle à sa
longueur. Elle est donnée par l’équation suivante :
γS
G= (2)


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avec γ (S · cm–1) conductance spécifique ou conductivité,
caractéristique du milieu,
S (cm2) surface,

(cm) longueur.
S et
sont déterminées par étalonnage dans une solution de
conductivité connue.
Des microélectrodes conductimétriques constituées d’élec-
trodes interdigitées sont maintenant utilisées pour la réalisa-
tion de biocapteurs de type enzymatique [3].
2.1.2.3 Transduction impédancemétrique
Le principe de ce type de capteur électrochimique repose
sur la mesure de l’impédance d’une cellule électrochimique par
la technique de spectroscopie d’impédance. Cette technique
permet de contrôler le processus de transfert de charges à
l’interface électrode/électrolyte. Pratiquement, la mesure de
l’impédance s’effectue dans une cellule à trois électrodes, une
électrode de travail sur laquelle est déposé le biorécepteur,
une électrode de référence et une électrode auxiliaire. Une
tension sinusoïdale de faible amplitude, imposée entre l’élec-
trode de référence et l’électrode indicatrice, permet la mesure
d’un courant, de la même forme, généré entre l’électrode indi-
catrice et l’électrode auxiliaire. Le rapport de la tension appli-
quée à l’intensité du courant mesuré définit l’impédance du
système électrochimique. Cette impédance peut être repré-
sentée par un circuit électrique équivalent selon le type du
système (système faradique ou système non faradique). Ce
circuit permet d’exprimer les paramètres électriques qui défi-
nissent le phénomène de transfert de charges qui se produit à
l’interface électrode/électrolyte. Les biocapteurs impédance-
métriques s’appliquent avantageusement à l’étude des réac-
tions mettant en jeu des phénomènes d’affinité moléculaire de
type antigène-anticorps ou chémorécepteurs membranaires
car de faibles variations de conductance et de capacitance
peuvent être décelées à l’interface entre l’électrode et le bio-
récepteur immobilisé [4].
2.1.3 Transduction optique
Les transducteurs optiques sont variés et peuvent être
basés sur l’effet des entités biologiques servant de biorécep-
teurs sur l’absorption de la lumière, la fluorescence, la varia-
tion de l’indice de réfraction, ou d’autres paramètres optiques.
L’obtention d’un signal lumineux peut nécessiter une fonction-
nalisation préalable du biorécepteur ou de l’analyte cible (mar-
quage), ce qui augmente le temps d’analyse. Certaines
techniques, par contre, ne nécessitent pas de marquage [5].
2.1.3.1 Capteurs à fibre optique
Une fibre optique est un guide d’onde classiquement
constitué d’un cœur en silice d’indice optique n1 , entourée
d’une gaine d’indice légèrement inférieur n2 , le milieu ambiant
ayant un indice n0 . Les conditions de guidage de la lumière
sont définies par :
n02 sin2 θ 0 = n12 − n22 (3)
avec θ0 ouverture numérique de la fibre ou angle d’injection
limite du rayon incident.
Certains biocapteurs à fibre sont dits ponctuels : l’effet phy-
sique ou chimique est mesuré à l’extrêmité de la fibre où se
trouve déposé le biorécepteur. Le biocapteur ne fonctionne
qu’en réflexion. Il existe également des biocapteurs continus
pour lesquels la mesure est réalisée sur une longueur bien
définie de la fibre. La gaine de la fibre est éliminée sur cette
zone et la couche bioréceptrice est déposée à proximité du
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Branche de référence
Couche de gaine
Source
de lumière Détecteur
Branche sensible
Figure 1 – Schéma de principe d’un capteur à base
d’interféromètre Mach-Zehnder
cœur. Ce système peut fonctionner en réflexion ou en trans-
mission. L’immobilisation du biorécepteur est généralement
réalisée par adsorption ou fixation covalente sur une
membrane, ou confinement derrière une membrane
semi-perméable. Les biocapteurs à fibre les plus classiques
sont basés sur des mesures d’absorption, de fluorescence ou
de luminescence [6]. D’autres exploitent les propriétés de
l’onde évanescente correspondant à la puissance lumineuse
perdue à l’interface cœur-gaine. Ces biocapteurs nécessitent
le dégainage de la fibre et sont donc plus fragiles que les sys-
tèmes d’optique massive, basés sur les mêmes principes,
décrits dans les paragraphes suivants.
2.1.3.2 Interféromètres Mach-Zehnder
Ce type de capteur repose sur la perturbation de la lumière
se propageant dans un bras d’un guide optique. Quand une
lumière se propage dans un guide d’onde optique par l’inter-
médiaire de la réflexion interne totale, un champ évanescent
s’établit à l’interface cœur/gaine et se prolonge jusqu’au bout
du guide. Si la surface du guide d’onde est fonctionnalisée par
des molécules spécifiques d’intérêt, la couche sensible cause
un changement d’indice de réfraction et la vitesse de phase du
mode guidé diminue. Dans une configuration typique de
l’interféromètre Mach-Zehnder, la lumière de guidage est divi-
sée en deux branches par l’intermédiaire d’une jonction Y. Une
branche fonctionnalisée est utilisée comme bras sensible, alors
que l’autre est une branche de référence (figure 1). À la sor-
tie, la lumière propagée dans les deux branches est réunie
dans une deuxième jonction Y, et il en résulte une interfé-
rence. L’intensité de la lumière obtenue sera mesurée par un
détecteur photoélectrique. Un changement au niveau de la
surface du capteur provoque un changement de l’indice de
réfraction de la branche contenant l’élément sensible. Il en
résulte alors un changement de l’intensité de la lumière
détectée. Celle-ci est proportionnelle à cos (∆n2 k0 L), où ∆n2
représente la variation de l’indice de réfraction, k0 l’amplitude
du vecteur d’onde et L la longueur de la région sensible.
Ces structures sont fabriquées, soit en verre, soit en silicium
et sont ainsi facilement intégrées dans des laboratoires sur
puce [7].
2.1.3.3 Capteurs à Résonance Plasmonique
de Surface (SPR)
Ces capteurs reposent sur le principe physique de la réso-
nance plasmonique de surface [8]. L’élément sensible du bio-
capteur est déposé sur une surface métallique recouvrant un
support solide en verre fixé à la base d’un prisme
(configuration de Kretschmann). Ces systèmes permettent de
mesurer en temps réel, avec une grande précision et une
grande sensibilité, et cela sans marquage spécifique, les
caractéristiques d’interaction entre deux molécules, grâce à la
mesure de la variation de l’indice de réfraction au voisinage de
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l’interface. Ces capteurs ont donc été abondamment utilisés
pour l’étude des interactions d’affinité (exemple : anti-
gène-anticorps).
Les systèmes SPRi permettant l’imagerie en temps réel de
plusieurs plots fonctionnalisés avec différents systèmes d’affi-
nité sont en pleine expansion actuellement [9].
Nota : à voir : Dossier Techniques de l’Ingénieur [F 4 010].
2.1.3.4 Spectroscopie optique sur guide d’onde modal
(Optical waveguide lightmode spectroscopy,
OWLS)
Il s’agit d’une technique de détection nouvelle, basée sur le
champ évanescent pour l’étude in situ et sans marquage des
processus de surface au niveau moléculaire. Elle est basée sur
la mesure précise de l’angle de résonance d’une lumière laser
polarisée linéairement, diffractée par un réseau et couplée
dans une fine couche de guide d’onde. Le couplage est un
phénomène de résonance qui a lieu à un angle de résonance
donné, dépendant de l’indice de réfraction du milieu couvrant
la surface du guide d’onde. Dans la couche guide d’onde, la
lumière est guidée par réflexion totale interne sur les bords où
elle est détectée par des photodiodes. En faisant varier l’angle
d’incidence de la lumière, on obtient un spectre à partir
duquel sont calculés les indices effectifs à la fois pour le
champ électrique et le champ magnétique [10].
2.1.3.5 Fluorescence à réflexion totale interne
(Total internal reflection fluorescence, TIRF)
Cette technique a été utilisée avec des guides d’ondes pla-
naires et à fibre optique comme transducteurs optiques dans
de nombreux biocapteurs. La lumière est propagée le long du
guide d’onde, ce qui génère une onde évanescente à la sur-
face du milieu optiquement plus dense du guide d’onde
(quartz) et dans le milieu adjacent moins dense (milieu
aqueux). L’amplitude de l’onde établie décroît exponentiel-
lement avec la distance dans le milieu d’indice de réfraction le
plus bas. La fluorescence d’un fluorophore excité par le champ
évanescent peut alors être détectée. Ce phénomène ne
concerne que les fluorophores liés à la surface alors que les
fluorophores au sein du milieu liquide ne sont pas excités. Les
systèmes TIRF permettent la mesure de la cinétique en temps
réel de l’interaction de bioanalytes avec des molécules immo-
bilisées sur la surface du guide d’onde. C’est une technique
rapide, non destructive et sensible qui a été utilisée dans des
systèmes de détection automatisés pour le suivi
environnemental [11].
2.1.4 Transduction mécanique
Différentes méthodes mécaniques ont été utilisées en tant
que systèmes de détection pour les biocapteurs. Ces transduc-
teurs sont devenus de plus en plus populaires au cours des
dernières années.
2.1.4.1 Transducteurs basés sur l’effet piézoélectrique
Un cristal de quartz, soumis à une tension sinusoïdale, subit
une déformation mécanique liée à l’apparition d’un potentiel
électrique à la surface (effet piézoélectrique). À une fréquence
bien choisie, le cristal peut osciller à sa fréquence de réso-
nance. Tout changement de masse (∆m) intervenu à la sur-
face du cristal entraîne une diminution proportionnelle de sa
fréquence de vibration (∆F). Cette relation linéaire s’exprime
quantitativement par l’équation de Sauerbrey :
2 F02 ∆m
∆F = − ⋅ (4)
µQ ρQ A active dans une matrice organique (polymère hydrophile d’ori-
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avec F0 fréquence fondamentale,
A surface géométrique,
µQ mode de cisaillement,
ρQ densité du cristal piézoélectrique.
L’équation de Sauerbrey n’est applicable que pour des
couches suffisamment fines et rigides et elle perd son utilité
dans le cas de films viscoélastiques, en particulier des films de
polymères ou des polyélectrolytes.
Le biocapteur à effet piézoélectrique le plus utilisé est connu
sous le nom de microbalance à quartz (QCM).
2.1.4.2 BioMEMS
Les bioMEMS (bio-Micro-Electro-Mechanical-Systems) ou
microsystèmes électromécaniques, sont des systèmes méca-
niques de taille nanométrique. Ce dispositif permet la traduc-
tion des interactions biomoléculaires par une donnée
mécanique suite à une déflexion d’un microlevier. Une bio-
membrane, fixée à une plate-forme de silicium, constitue l’élé-
ment sensible du bioMEMS. Cette membrane, fonctionnalisée
par des molécules spécifiques d’intérêt (sondes), est entraînée
en vibration sur son mode fondamental grâce à l’action d’une
pastille piézoélectrique. Lorsque la biomembrane est en
contact avec une solution aqueuse contenant des espèces à
détecter (cibles), celles-ci sont captées par la sonde et le
poids de la membrane augmente. En détectant les vibrations
de cette biomembrane, on peut mesurer la variation de fré-
quence de résonance qui s’ensuit et ainsi estimer la quantité
de biomolécules présente dans le liquide. Ce bioMEMS permet
de détecter, de façon automatique et autonome, la présence
d’une molécule donnée contenue dans une solution aqueuse.
Le BioMEMS offre énormément d’avantages : une vitesse
accrue des réactions chimiques à l’échelle nanométrique, une
grande sensibilité, la possibilité de mesurer en temps réel, un
faible rapport signal sur bruit, une intégration aisée de plu-
sieurs capteurs sur une surface réduite [12].
2.1.5 Méthodes d’immobilisation du biorécepteur
Un point essentiel pour la fabrication d’un biocapteur est
l’immobilisation des entités biologiques actives (enzymes,
anticorps, cellules ou tissus...) sur la surface du transducteur.
Différentes procédures d’immobilisation du biorécepteur ont
été développées dans le but d’aboutir à une immobilisation
efficace et stable, de maintenir intactes les propriétés biolo-
giques du biorécepteur et de garantir une accessibilité et une
réactivité maximales. La sélection d’une méthode d’immobili-
sation appropriée dépend de la nature de la molécule biolo-
gique, du type de transducteur utilisé, des propriétés
physico-chimiques de l’analyte et des conditions opératoires
du biocapteur. Il existe plusieurs techniques d’immobilisation
que l’on peut subdiviser en procédés physiques et chimiques
(figure 2) [13].
L’immobilisation physique peut tout d’abord avoir lieu par
adsorption. L’adsorption est basée sur l’établissement d’inte-
ractions de faible énergie de type ionique, polaire ou hydro-
phobe, ou encore des liaisons hydrogènes, entre les groupes
fonctionnels du biorécepteur et la surface du support. Ce type
d’immobilisation possède l’avantage de préserver les proprié-
tés du biorécepteur, mais la faiblesse de la liaison peut entraî-
ner sa désorption suivant les conditions physico-chimiques du
milieu (pH, température...). Le biorécepteur peut être stabilisé
par addition d’une membrane mince polymérique permettant
la diffusion de la molécule cible. L’immobilisation physique par
piégeage consiste à incorporer la molécule biologiquement
gine naturelle ou synthétique) ou inorganique (sol-gel).
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+ + +
– – –
Retention par
Piègeage Adsorption
une membrane
Méthodes physiques
Coréticulation Liaisons covalentes
Méthodes chimiques
Figure 2 – Représentation schématique des différentes
méthodes d’immobilisation de l’élément biologique
L’immobilisation chimique peut avoir lieu par formation
d’une liaison chimique entre le biorécepteur et un groupe
réactif d’un agent d’immobilisation ou directement du support.
La coréticulation est, quant à elle, basée sur l’interaction entre
une protéine de charge (comme l’albumine) et un agent
bifonctionnel, comme la glutaraldéhyde, pour la formation
d’un réseau. Cette deuxième technique est utilisée principale-
ment pour la fixation d’enzymes ou d’anticorps sur les trans-
ducteurs, beaucoup plus rarement pour celle de cellules. Les
conditions de réaction, parfois trop agressives, peuvent en
effet engendrer des modifications de l’intégrité de la structure
des cellules et entraîner la perte d’enzymes, ainsi qu’une dimi-
nution de l’activité métabolique. Le greffage covalent est enfin
basé sur la réaction entre un groupement fonctionnel de
l’entité active et un groupement fonctionnel du support préa-
lablement activé. Les groupements fonctionnels disponibles au
niveau du biorécepteur proviennent des chaînes latérales des
acides aminés des protéines (enzymes, anticorps ou protéines
cellulaires de surface), notamment les groupements ε-amines
de la lysine, carboxyles de l’aspartate et du glutamate, sulfhy-
dryles de la cystéine et hydroxyphénoliques de la tyrosine.
Pour assurer la formation des liaisons covalentes avec le
transducteur, on procède à sa fonctionnalisation. Ainsi, par
exemple, des surfaces métalliques telles que l’or et l’argent
peuvent être fonctionnalisées avec des groupements amines,
hydroxyles ou carboxyles par réaction avec des aminoalcane-
thiols, hydroxyalcanethiols et carboxyalcanethiols simultané-
ment. Les surfaces d’oxydes sont fonctionnalisées par des
organosilanes. Plus récemment, des électrodes métalliques sur
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lesquelles sont déposés, par voie électrochimique, des films de
polymère conducteur fonctionnalisé (polypyrrole, polythio-
phène, polyaniline) ont été utilisées pour l’immobilisation des
biomolécules actives par formation de liaisons covalentes [14].
+
–
2.2 Application au suivi environnemental
Se reporter à [15] [16].
2.2.1 Biocapteurs à enzyme
Les enzymes sont des protéines ayant une fonction cata-
lytique vis-à-vis des réactions cruciales pour la vie de la
cellule. Leur site actif a une fonction de reconnaissance
spécifique de la molécule qui subit la réaction, que l’on
nomme substrat de l’enzyme.
Les enzymes sont classées en familles, correspondant au
type de réaction catalysée. Les oxydases, les réductases et les
hydrolases sont les enzymes les plus utilisées dans les biocap-
teurs. L’enzyme est immobilisée sur un transducteur qui per-
met la détection soit de la consommation d’un co-facteur
entrant dans la réaction enzymatique (exemple : l’oxygène
dans le cas des oxydases) ou de l’apparition d’un produit de la
réaction enzymatique. De manière générale, on associe une
hydrolase à un transducteur potentiométrique ou
conductimétrique ou une fibre optique permettant de détecter
le changement local de pH ou de conductivité. Les enzymes
réductases ou oxydases sont associées à un transducteur
ampérométrique ou conductimétrique, permettant d’enregis-
trer les transferts électroniques. Ces transferts électroniques
vers l’électrode sont favorisés par l’utilisation de médiateurs
redox qui permettent d’abaisser le potentiel imposé et qui
limitent les interférences avec d’autres espèces électroactives.
Les principaux polluants détectés par des biocapteurs enzy-
matiques sont listés dans le tableau 1.
2.2.2 Immunocapteurs
Les anticorps ou immunoglobulines (Ig) sont les
protéines du système immunitaire. Elles se forment géné-
ralement en réponse à l’agression d’un organisme par un
toxique, une protéine étrangère ou une bactérie qui
constitue l’antigène de cet anticorps. Il existe des anticorps
polyclonaux et des anticorps monoclonaux. Les anticorps
polyclonaux sont constitués de protéines dirigées contre le
même antigène mais peuvent cibler des sites différents
(épitopes), alors que les anticorps monoclonaux sont diri-
gés contre un seul et même épitope de l’antigène.
Les principales méthodes utilisées dans les immunocapteurs
sont :
– soit des méthodes de détection directe de la formation du
complexe antigène-anticorps (mesure de la modification des
propriétés électriques par spectroscopie d’impédance électro-
chimique, mesure de la modification des propriétés optiques
par résonance plasmonique de surface) ;
– soit des méthodes par marquage de l’antigène fixé par un
anticorps marqué par une enzyme conduisant, soit à des pro-
duits colorés ou fluorescents (transducteur optique), soit à des
produits électroactifs (transducteur électrochimique).
Le tableau 2 présente quelques exemples d’immunocapteurs
développés pour la détection de polluants aquatiques.
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Tableau 1 – Exemples de biocapteurs enzymatiques pour la détection de polluants chimiques

Polluant Type d’enzyme Transducteur Limite de détection Réf.
Polluants trophiques
Nitrates Nitrate réductase Ampéromètrique 3 µM [17]
Conductimétrique 5 µM [18]
Nitrites Nitrite réductase Ampérométrique 4 nM [19]
Conductimétrique 50 nM [20]
Maltose
Phosphates phosphorylase + Mutarot Ampérométrique 1 µM [21]
ase + Glucose oxydase
Maltose phosphorylase Conductimétrique 1 µM [22]
Matière organique
Protéinase K + Pronase Conductimétrique 0,583 µg/L forTOC [23]
(fraction protéique)
Micropolluants
Bisphénol A Tyrosinase Ampérométrique 1 µM [24]
(électrode BDD)
(nanotubes de carbone) 0,02 µM [25]
17β-estadiol Tyrosinase Ampérométrique 10 µM [24]
Catéchol Tyrosinase Ampérométrique 0,09 µM [26]
Pesticides Organophosphorus
Potentiométrique 1 µM [27]
organophosphorés hydrolase
Ampérométrique 0,1 µM [28]
Fibre optique 1 µM [29]

Tableau 2 – Exemples de biocapteurs immunologiques pour la détection

de polluants chimiques
Polluant Mode de détection Transducteur Limite de détection Référence
Pesticides (propanil, atrazine,
isoproturon) Marquage TIRF 0,01-0,02 µg/L [11]
Chlorpyrifos Marquage SPR 54-64 ng/L [30]
DDT et produits dérivés Marquage SPR 15 ng/L [31]
Atrazine Direct EIS 10 ng/mL [32]
Acide 2,4-dichlorophenoxyacétique Direct Ampérométrique 0,1 µg/L [33]
Testostérone Marquage TIRF Sub ng/L [34]
Bisphénol A Direct SPR 0,4 µg/L [35]
Marquage TIRF 0,008 µg/L [11]
Nonylphénols Direct Ampérométrique 10 µg/L [36]

2.2.3 Biocapteurs cellulaires
Un grand nombre d’ouvrages et de revues ont été consacrés
aux biocapteurs cellulaires, qu’ils soient utilisés pour la déter-
mination d’analytes ou de familles d’analytes cibles, ou pour
l’évaluation de la toxicité aquatique, comme nous le verrons
dans le paragraphe 2.3 [37] [38] [39] [40] [41].
Les principaux organismes utilisés pour l’élaboration de bio-
capteurs cellulaires sont les bactéries, les algues et les
levures. Ils présentent l’avantage d’être beaucoup plus
robustes que leurs composants isolés (enzymes, anticorps ou
ADN) et peuvent plus facilement s’adapter à des modifications
de pH et de température. Le nombre élevé d’enzymes et de

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cofacteurs présents dans la cellule lui confère la possibilité de
réagir avec un large spectre de substrats, ouvrant la voie vers
le développement de biocapteurs permettant la détection d’un
grand nombre d’analytes, cela parfois au détriment de la
sélectivité. Ces organismes peuvent néanmoins être facile-
ment modifiés génétiquement afin de limiter leur réponse à un
composé donné ou à une famille de composés [40] [41]. Les
modes de transduction utilisés pour ce type de biocapteur
sont essentiellement électrochimiques et optiques. Les
méthodes d’immobilisation des cellules par piégeage à l’inté-
rieur d’un réseau polymérique ou par greffage au support
fonctionnalisé avec des anticorps par interactions anti-
gène-anticorps sont les plus courantes car elles sont douces et
permettent de préserver l’activité métabolique des
micro-organismes.
2.2.3.1 Biocapteurs électrochimiques
L’application la plus courante des biocapteurs ampéro-
métriques à base de bactéries ou de levures concerne la
détermination de la DBO5 qui correspond à la consommation
d’oxygène de ces micro-organismes en 5 jours par respiration.
Ce paramètre constitue une bonne indication de la teneur en
polluants organiques de l’eau qui servent de source de car-
bone à la cellule lors de la mesure. Des biocapteurs dédiés à
la détection de surfactants ou de dérivés phénoliques ont été
développés par immobilisation de bactéries dégradant spécifi-
quement ces groupes de polluants sur des électrodes à oxy-
gène ou des électrodes à pâte de carbone. Différentes souches
de levures métabolisant l’éthanol ont également été exploitées
pour le développement de biocapteurs plus ou moins spéci-
fiques aux alcools aliphatiques à chaîne courte.
Les biocapteurs potentiométriques sont quant-à-eux
constitués d’une électrode sélective à certains ions (H+, NH4+ ,
Cl–...) ou certains gaz (O2 , NH3...) sur laquelle est déposée
une membrane renfermant les cellules. La consommation de
l’analyte par la cellule conduit à une accumulation ou à une
consommation d’ions ou de gaz à l’origine d’une différence de
potentiel. Ainsi par exemple, une électrode sensible aux ions
chlorures issus de la dégradation du trichloréthylène par Pseu-
domonas aeruginosa JI104 a été exploitée pour la détection
de ce composé dans les eaux. Des électrodes de pH ont éga-
lement été abondamment utilisées.
2.2.3.2 Biocapteurs optiques
Le principe de ces biocapteurs repose sur la modulation des
propriétés optiques des cellules (absorption UV-Visible bio et
chimioluminescence, réflectance, fluorescence) à la suite de
leur interaction avec un ou des composés présents dans
l’échantillon. Une grande partie des biocapteurs optiques sont
basés sur une détection par bioluminescence ou fluorescence.
Il peut s’agir d’un mode de détection de type light off. On
observe dans ce cas une diminution de l’émission lumineuse
de la cellule (naturelle ou induite par modification génétique)
après contact avec le polluant. Dans le cas des systèmes light
on au contraire, l’interaction provoque l’apparition d’un signal
lumineux.
Les biocapteurs sont rendus plus spécifiques par modifica-
tion génétique. De manière générale, celle-ci consiste à insé-
rer dans la cellule un promoteur de gêne répondant
spécifiquement à un analyte ou un groupe d’analytes fusionné
à un gène codant pour l’expression d’une protéine particulière
facilement détectable [40]. Les gènes les plus fréquemment
utilisés pour une détection optique sont le gène lux codant
pour la luciférase luminescente et le gène gfp codant pour la
production de la protéine fluorescente GFP (Green Fluorescent
Protein), tandis que le gène lacZ codant pour la β-galactosi-
dase est inséré pour une détection électrochimique. Les tra-
9 - 2010 © Editions T.I.
INNOVATION
vaux consacrés au développement de biocapteurs optiques
sont les plus nombreux et concernent aussi bien l’analyse de
métaux (cuivre, arsenic...) que de composés organiques
(alcanes, composés aromatiques...).
Le tableau 3 présente quelques exemples d’applications de
biocapteurs cellulaires électrochimiques et optiques.
2.3 Application à l’évaluation de la toxicité
aquatique
Les premières études menées en écotoxicologie environ-
nementale étaient basées sur des mesures de toxicité aiguë
sur des organismes supérieurs tels que les mammifères, les
poissons et les oiseaux. Néanmoins, ces méthodes n’étaient
pas standardisées, étaient chères, longues à mettre en œuvre
et posaient des problèmes d’ordre éthique. Elles ont donc été
progressivement remplacées par différents outils biologiques à
base d’organismes vivants inférieurs (macroinvertébrés), de
cellules animales ou végétales, d’enzymes, d’anticorps ou
d’acides nucléiques. Parmi ces nouvelles techniques figurent
les bioessais et les biocapteurs [15] [16].
Les bioessais ont fait l’objet de nombreux développements
par le passé et beaucoup sont à présent normalisés et pour
certains disponibles commercialement sous forme de kits [41].
On peut notamment signaler les tests de toxicité sur Daphnia
magna (ISO 6341), les microalgues Skeletonema costatum
(ISO 10253) et Selenastrum capricornotum (EPA-600/
9-78-018), ou encore la bactérie luminescente Vibrio fischeri
(ISO 11348-1,2, et 3) ou Salmonella typhimurium (ISO/DIS
13829). Des immunoessais et des bioessais comportant des
cellules modifiées génétiquement ont également été
développés [42].
Les recherches portent plutôt à présent sur la mise au point
de biocapteurs, qui se distinguent des bioessais par le fait que
le biorécepteur est immobilisé sur un transducteur. Ils offrent
l’avantage d’être peu chers, miniaturisables, utilisables en
ligne, sur site et contrôlables à distance. Les biocapteurs pour
l’estimation de la toxicité sont basés sur les effets toxiques
des polluants : inhibition d’enzyme (neurotoxicité), interaction
avec un récepteur spécifique (endogénicité, œstrogénicité),
interaction et dommages de l’ADN ou de l’ARN (génotoxicité).
Les biocapteurs à base de cellules entières mettent en œuvre
l’un de ces effets. Des biocapteurs pour la détection de cer-
tains biomarqueurs de toxicité sont également développés..
2.3.1 Biocapteurs à enzymes
Une des contributions majeures des biocapteurs enzyma-
tiques aux études écotoxicologiques concerne l’évaluation de
la neurotoxicité aquatique. Cette dernière provient des
composés organophosphorés et des carbamates, utilisés
comme pesticides, mais également des métaux lourds et des
détergents qui provoquent l’inhibition d’un groupe particulier
d’enzymes, les estérases. Les biocapteurs de neurotoxicité
proposés dans la littérature sont principalement élaborés à
partir de deux enzymes appartenant à cette famille, l’acéthyl-
cholinestérase et la butylcholinestérase. Ils ont fait l’objet d’un
grand nombre de travaux et de deux revues récentes [43]
[44]. Les développements actuels visent à améliorer l’activité
des enzymes, soit par modification génétique [45], soit par
une meilleure immobilisation sur le transducteur. L’utilisation
de nouveaux matériaux à base de nanoparticules d’or [46],
d’argent ou de fer, de nanotubes de carbone [47] a également
permis d’augmenter de manière significative la sensibilité des
biocapteurs optiques et électrochimiques. Un système portatif
utilisant une transduction potentiométrique a été récemment
validé sur différents échantillons d’eau [48].
IN 119 - 7
 INNOVATION

Tableau 3 – Quelques exemples de cellules utilisées pour l’élaboration de biocapteurs

pour l’analyse de polluants aquatiques
Analytes Micro-organismes Limite de détection Référence
Détection ampérométrique
Éthanol Gluconobacter oxydans 0,85 à 50 µM
Candida tropicalis 500 µM
Saccharomyces ellipsoideus 69 µM
p-Nitrophenol Arthrobacter JS 443 5 à 200 nM
Moraxella sp 20 à 100 nM
Composés phénoliques Pseudomonas putida 0,02 à 0,5 µM [37]
Cyanure Saccharomyces cerevisiae 0,15 à 0,3 µM
T. ferrooxidans 0,5 µM
Surfactants anioniques Pseudomonas sp 1 µM
Cu2+ S. cerevisiae modifiée (gène lacZ ) 0,5 mM
Cd2+ Escherichia coli modifiée (gène lacZ ) 25 nM
Détection potentiométrique
Trichloréthylène Pseudomonas aeruginosa J1104 0,03 mg/L
Éthanol S. ellipsoideus 0,02 mM
Détection par luminescence
Escherichia coli MC1061 pTOO31, CM1166 pC200,
CM1569 pC202
Arsénite, antimonite
Staphylococcus aureus SA3 pC200
Ralstonia eutrophus AE1696 pC202
[40]
Hg2+ Escherichia coli MC1061 pTO11 0,1 fM

Cd2+, Pb2+, SbO2− Staphylococcus aureus RN4220 pTOO24 10, 33 et 1 nM

Composés aromatiques Escherichia coli DH5α pGLTUR 10-20 µM (toluène)

2.3.2 Biocapteurs à récepteurs œstrogéniques
Les perturbateurs endocriniens sont des substances chi-
miques qui entraînent des dérèglements hormonaux et des
anomalies du système endocrinien, voire du système ner-
veux. Certains agissent sur la synthèse des hormones
endogènes ou de leurs récepteurs. D’autres possèdent une
structure voisine des œstrogènes et se lient à leurs récep-
teurs, conduisant à l’inactivation ou à un fonctionnement
anormal de ces derniers.
Un grand nombre de molécules possèdent de tels effets,
comme les hormones de synthèse ou des substances
chimiques comme les phtalates, les surfactants, les PCB, les
alkylphénols, les parabènes, les HAP, les dioxines et certains
pesticides. À ce jour, 320 substances prioritaires susceptibles
de perturber le système endocrinien ont été répertoriées par
l’Union européenne. Certaines d’entre elles (nonylphénol,
di-2-éthylhexylphtalate et les éthers diphényl-polybromés)
ont été incluses dans la liste des substances prioritaires de
la Directive-cadre sur l’eau. Une revue récente a été
consacrée à l’utilisation des biocapteurs pour le suivi environ-
nemental des perturbateurs endocriniens [49]. Les bio-
capteurs de toxicité exploitent les capacités de fixation de ces
substances sur des récepteurs œstrogéniques immobilisés à
la surface d’un transducteur. Le récepteur œstrogénique
d’origine humaine est le plus souvent utilisé. Différents
modes de transduction comme la fluorescence, la voltamétrie
cyclique, la SPR, la mobilité électrophorétique, ont été propo-
sés. Des systèmes portables, essentiellement basés sur une
détection par SPR ont par ailleurs été développés [50].
Récemment, un biocapteur comportant des nanotubes de car-
bones fonctionnalisés avec le récepteur œstrogénique humain
de type α et utilisant un transistor à effet de champ comme
transducteur a été proposé. Le temps de réponse est extrê-
mement rapide (2 min) [51].
Nota :
PCB : polychlorobiphényles.
HAP : hydrocarbures aromatiques polycycliques.

IN 119 - 8 © Editions T.I. 9 - 2010


2.3.3 Immunocapteurs
Ainsi qu’il a été vu précédemment (§ 2.2.2), un grand
nombre d’applications des immunocapteurs concernent la
détermination de polluants ou de groupes de polluants cibles.
Il est également possible de les exploiter pour la détection de
substances, appelées biomarqueurs, qui sont produites par un
organisme donné à la suite d’une exposition à certains pol-
luants. La vitellogénine, par exemple, est une phospho-
lipo-glycoprotéine du sérum sécrétée en grande quantité par
le poisson exposé aux perturbateurs endocriniens. Sa pré-
sence est donc un excellent biomarqueur permettant d’identi-
fier les effets œstrogénotoxiques de substances naturelles ou
anthropogéniques. Sa détection a été réalisée à l’aide de bio-
capteurs électrochimiques, optiques ou piezoélectriques à base
d’anticorps anti-vitellogénine de carpe [52].
2.3.4 Biocapteurs à ADN
La structure de l’ADN est extrêmement sensible à l’influence
de polluants environnementaux tels que les métaux lourds, les
composés aromatiques polycycliques et les PCB. Ces subs-
tances sont connues pour avoir une forte affinité pour l’ADN, à
l’origine de mutagénèse et de carcinogénèse. Des biocapteurs,
basés sur la mesure de l’interaction entre ces substances et
des molécules d’ADN simple ou double brin immobilisées sur
un transducteur, ont donc été élaborés et utilisés pour l’éva-
luation de la génotoxicité aquatique. La détection est généra-
lement réalisée par voie électrochimique [53]. Les composés
liés à l’ADN sont détectés, soit directement lorsqu’il s’agit
d’espèces électroactives, soit grâce à la modification du signal
électrochimique provenant de l’ADN. Des biocapteurs de toxi-
cité basés sur la détection de l’oxydation des bases de l’ADN
(guanine essentiellement, mais aussi guanosine et adénosine)
ou de la dégradation des brins à l’aide d’une sonde électrochi-
mique ont été développés et appliqués à l’analyse d’eaux
contenant différents types de contaminants aquatiques géno-
toxiques (métaux, pesticides, PCB, amines aromatiques...).
Certains de ces biocapteurs ont été comparés favorablement à
des tests de génotoxicité commerciaux.
D’autres biocapteurs de types optiques (SPR, fluorescence)
ou mécaniques ont également été proposés [54].
2.3.5 Biocapteurs à cellules entières
Les bactéries, les levures, les algues et les cellules de pois-
son ont également été utilisées pour l’élaboration de biocap-
teurs de toxicité [37] [38] [39] [40] [41]. La réponse
enregistrée peut provenir d’une modification du métabolisme
cellulaire, de l’altération de la cellule pouvant aller jusqu’à sa
mort, ou d’un changement dans l’expression de certains gènes
dans le cas d’organismes modifiés. Différents types de toxicité
peuvent ainsi être mis en évidence : la neurotoxicité, la géno-
toxicité, l’œstrogénicité, la toxicité aiguë.
2.3.5.1 Biocapteurs électrochimiques
Des souches modifiées génétiquement pour exprimer l’OPH
ont été utilisées pour la détermination de la neurotoxicité liée
aux pesticides organophosphorés par ampérométrie et poten-
tiométrie. Des biocapteurs basés sur l’inhibition de la respira-
tion cellulaire chez certaines souches de bactéries ou de
levures ont également été développés pour l’évaluation de la
toxicité globale d’effluents ou de celle provenant plus spécifi-
quement de la présence d’ions cyanures. Des biocapteurs
ampérométriques ont enfin été utilisés pour l’évaluation de la
neurotoxicité aquatique, à partir d’électrodes de verre modi-
fiées par des bactéries dégradant les organophosphorés (par
exemple Flavobacterium sp) ou des souches d’Escherichia coli
modifiées génétiquement [37].
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2.3.5.2 Biocapteurs optiques
Les applications des biocapteurs cellulaires optiques à
l’évaluation de la toxicité aquatique sont extrêmement nom-
breuses. Des souches sauvages, comme Photobacterium phos-
phoreum ou Vibrio fischeri, ainsi que des souches comme
Escherichia coli, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas
putida ou Salmonella typhmurium modifiées génétiquement
ont été utilisées et combinées à des détecteurs de fluores-
cence ou de luminescence pour l’évaluation de la toxicité
aiguë ou la génotoxicité aquatique [37] [38] [39] [40] [41].
3. Matériel biologique
pour la séparation
et/ou la préconcentration
des polluants
3.1 Généralités
Deux types d’éléments biologiques ont montré de réelles
potentialités dans l’élaboration de supports pour la séparation
et de la préconcentration analytique : les anticorps et les
cellules entières, ces dernières pouvant être exploitées mortes
ou vivantes. Dans les deux cas, l’élément biologique est
immobilisé sur ou dans un support en vue d’une utilisation
sous forme de cartouches, de colonnes ou de disques.
L’échantillon percole à travers le matériau et seuls les
composés possédant une affinité pour le support sont retenus.
Après une éventuelle étape de lavage, une étape d’élution
permet de récupérer les analytes. Il est donc possible de réa-
liser à la fois l’extraction des composés d’intérêt, leur pré-
concentration et la purification de l’échantillon, ceci en mode
dynamique, en ligne ou non.
3.2 Supports d’immunoaffinité
Cette technique s’est avérée particulièrement adaptée à
l’analyse de composés organiques polaires. Les supports de
chromatographie d’immunoaffinité (immunoadsorbants) sont
préparés par immobilisation chimique ou physique d’anticorps
spécifiques à un composé ou une famille de composés
sur/dans une matrice polymérique. Lorsque l’immunoextrac-
tion est combinée à une technique chromatographique (CG,
CLHP ou EC), en ligne ou en discontinu, il est également pos-
sible de séparer et de quantifier les composés chimiques de
structures proches qui n’auraient pas pu l’être sur
l’immunoadsorbant [55]. Cela constitue un avantage certain
par rapport aux immunoessais de type ELISA (Enzyme-linked
Immunosorbent assay ) actuellement disponibles
commercialement sous formats microplaques, sticks, tubes
tests ou billes magnétiques. Ces tests ELISA, également basés
sur des interactions de type antigène-anticorps, sont rapides
et abondamment utilisés sur site pour le screening d’échan-
tillons environnementaux [56]. Bien qu’ils conduisent dans
certains cas à des résultats en bon accord avec des techniques
d’analyses chimiques classiques, ils ne permettent souvent
qu’une analyse semi-quantitative et non exempte d’inter-
férences de classes entières de composés.
La matrice d’immobilisation utilisée pour l’élaboration des
supports d’immunoextraction doit satisfaire plusieurs critères.
Elle doit tout d’abord être inerte chimiquement et biologique-
ment, suffisamment poreuse pour permettre la fixation des
anticorps qui sont des molécules de grande taille. Elle doit par
ailleurs être hydrophile de manière à éviter les interactions
non spécifiques. L’approche la plus communément utilisée
IN 119 - 9
 INNOVATION
consiste à immobiliser les anticorps sur un gel d’agarose ou
des particules de silice. Les supports d’imunoextraction à base
d’agarose ayant une faible résistance à la pression, les échan-
tillons percolent par simple gravité ou sous faible débit à tra-
vers les cartouches remplies de gel. Ils sont adaptés à une
utilisation en mode discontinu. Par contre, la silice est un
matériau résistant à la pression. Les immunosorbants à base
de silice sont donc adaptés à une utilisation en ligne en amont
d’une séparation chromatographique. D’autres types de maté-
riaux d’immobilisation tels que le verre, l’alumine ou le polys-
tyrène divinylbenzène ont été évalués pour une utilisation en
colonne remplie mais n’ont pas montré d’avantages significa-
tifs par rapport à la silice. Un des points clefs de l’élaboration
des supports d’immunoaffinité à base de silice concerne
l’étape de synthèse. L’immobilisation des anticorps est le plus
souvent réalisée par établissement de liaisons covalentes avec
le support, ce qui peut conduire à la dénaturation ou à une
mauvaise orientation des anticorps. Une alternative consiste à
emprisonner les molécules actives au sein d’un réseau poly-
mérique par des techniques de type sol-gel. Stalikas et
coll. [57] ainsi que Vera-Avila et coll. [58] ont ainsi proposé
une méthode de détermination de différentes triazines et du
malathion dans les eaux par couplage d’un immunosorbant à
base d’anticorps encapsulés dans de la silice sol-gel avec la
chromatographie en phase liquide et en phase gazeuse, res-
pectivement.
Les supports d’immunoaffinité ont été abondamment mis en
œuvre pour l’analyse de produits pharmaceutiques et d’hor-
mones dans les échantillons biologiques ainsi que celles de
composants naturels ou de toxiques dans les aliments [54]
[58]. Les seuls supports commerciaux existant actuellement
concernent l’analyse de microtoxines, de vitamines et de
médicaments vétérinaires [59]. Dans le domaine de l’analyse
de l’eau, l’essentiel des applications concerne les pesticides,
bien que les médicaments constituent également une classe
de polluants majeurs des milieux aquatiques [60]. Un système
portable immusorbant-CLHP a été récemment développé par
Nelson et coll. pour l’analyse sur site de résidus
d’herbicides [61].
Nota : à voir : Dossier Techniques de l’Ingénieur [P 1 420].
CG : chromatographie en phase gazeuse.
CLHP : chromatographie en phase liquide haute performance.
EC : électrophorèse capillaire.
3.3 Supports à base de micro-organismes
Il s’agit, comme précédemment, de méthodes d’extraction
solide/liquide utilisant des matériaux sorbants d’origine biolo-
gique, en l’occurrence des cellules de levures, d’algues, de
champignons ou de bactéries. Ces méthodes s’appliquent à la
préconcentration et à la séparation sélective d’espèces inorga-
niques (spéciation) en couplage direct à une détection élé-
mentaire de type ICP-AES, ICP-MS ou AAS. Ces
micro-organismes sont dotés d’un rapport surface/volume
élevé ainsi que de nombreuses fonctions chimiques à leur sur-
face (groupements carboxyle, amine, phosphate, sulfhy-
dryle...). Ils peuvent ainsi présenter des capacités de fixation
métallique (biosorption) proches de celles des supports
chimiques, sans nécessiter d’étape préalable de fonction-
nalisation. L’utilisation de micro-organismes peut se montrer
plus intéressante d’un point de vue économique puisqu’il est
possible de les produire à faible coût et en grande quantité au
laboratoire. Les différents avantages et limitations de
l’utilisation des biosorbants dans le domaine de l’analyse inor-
ganique ont été exposés en détail dans la revue de
Godlewska-Zylkiewicz [62]. L’auteur démontre que ces
méthodes présentent un fort potentiel pour l’analyse d’échan-
tillons environnementaux, mais leur maîtrise nécessite une
IN 119 - 10
bonne compréhension des mécanismes mis en jeu (échange
d’ions, complexation, précipitation...) et des paramètres qui
les affectent (pH, force ionique, rapport analyte/biomasse...).
L’utilisation d’organismes vivants (bioaccumulation) permet
d’atteindre une meilleure spécificité d’interaction mais peut
s’avérer plus délicate.
La sorption dépend de différents facteurs liés à la biomasse
elle-même, à savoir sa nature (bactérie, algue, champignon...,
vivante ou morte, immobilisée ou non), sa morphologie (taille,
forme), son milieu de croissance (qui influence la structure
physiologique et la composition chimique de la paroi), sa
phase de prélèvement (latence, exponentielle, stationnaire), la
méthode choisie pour son inactivation (chimique, thermique
ou biologique), son mode de conditionnement (biomasse
fraîche, séchée à l’air, à l’étuve, par lyophilisation) ou encore
son traitement avant sorption (lavage à l’eau, à l’acide, à la
soude, aux détergents, à l’éthanol ou à l’acétaldéhyde).
Le matériau choisi pour l’immobilisation doit tout d’abord
être résistant aux éventuelles contraintes mécaniques impo-
sées. Le matériau ne doit par ailleurs pas nuire à la séparation
des espèces lorsque celle-ci est recherchée. Il doit enfin,
comme dans le cas des biocapteurs, être suffisamment per-
méable pour permettre une diffusion rapide de l’analyte vers
les cellules biologiques et préserver le métabolisme cellulaire
si celui-ci est nécessaire. Si ces différents critères ne sont pas
remplis, la qualité séparative du support ainsi que le facteur
de préconcentration maximal accessible risquent d’être
considérablement diminués. Une des phases stationnaires les
plus couramment utilisées en science séparative est la silice
qui présente une forte tenue à la pression. Elle existe par
ailleurs commercialement sous différentes formes avec des
granulométries et des porosités très diverses. Une grande par-
tie des auteurs s’étant intéressés à l’immobilisation de cellules
en vue d’applications analytiques se sont donc tout naturel-
lement tournés vers ce support aisément disponible. La bio-
masse est dans la plupart des cas fixée par adsorption
physique (gels de silice [63] [64], verres à porosité contrôlée
(CPG) [65], sépiolite [66] [67], mousse de
polyuréthane [68]), plus rarement par formation de liaisons
covalentes avec des CPG [69] ou par piégeage dans une
matrice sol-gel [70]. Cependant, les immobilisations de
surface peuvent conduire à un relargage des cellules dans le
milieu. De plus, plusieurs auteurs ont mis en évidence une
affinité de la silice pour certaines espèces inorganiques du
chrome, ou pour des cations divalents. Cette sorption par les
matériaux peut être considérée comme un moyen d’augmen-
ter les capacités de rétention de l’élément inorganique
considéré, mais peut également nuire à la séparation des
espèces ainsi qu’à l’élution de l’élément retenu.
Certains auteurs ont également mis en évidence une libéra-
tion importante de cellules lors de l’utilisation de supports
solides macroporeux tels que la mousse de polyuréthane.
L’immobilisation de surface par liaisons covalentes est moins
sujette au relargage cellulaire mais les agents de réticulation
utilisés pour la fixation peuvent induire une diminution des
propriétés de sorption. Le piégeage à l’intérieur de polymères
comme le polysulfone a également été proposé pour la sépa-
ration des espèces de l’antimoine par la levure de boulanger
S. cerevisiae [71].
Différents exemples d’utilisation de micro-organismes
immobilisés pour la séparation et la préconcentration
d’espèces inorganiques sont présentés dans le tableau 4.
Comme le montre ce tableau, les facteurs de préconcentration
obtenus par les différentes méthodes sont très variables : le
type de micro-organisme, le mode d’utilisation ainsi que les
éléments considérés ont une grande influence sur ce facteur.
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Tableau 4 – Exemples d’utilisations de micro-organismes immobilisés

pour la préconcentration et la spéciation d’espèces inorganiques
Facteur Limite
Micro-organismes Espèces analysées Détecteur de de détection Référence
préconcentration (µg · L–1)
Saccharomyces Sb(III) 0,8
HG ICP-AES 8,7 [68]
cerevisiae Sb(V) 0,15
Saccharomyces Sb(III),
ICP-AES 9 [71]
cerevisiae Sb(V)
Saccharomyces Cr(III),
FAAS 75 94 [66]
cerevisiae Cr(VI)
Saccharomyces Cr(III), 12 0,45
ICP-AES [65]
cerevisiae Cr(VI) 5 1,5
Saccharomyces Hg(II), 100
CVAAS – [63]
cerevisiae CH3Hg+ 15
Saccharomyces Cu(II) 286 0,7
cerevisiae Zn(II) 2 000 0,1
préconcentration Cd(II) FAAS 250 0,2 [69]
seulement Fe(III) 750 0,6
Pb(II) 125 8
Fe(II)
Aspergillus niger FAAS 75 113 [67]
Fe(III)
Hg(II), 0,5-1
Chlorella vulgaris HGAAS 75 [64]
CH3Hg+ 2-4

Les limites de détection sont elles aussi reliées à ces différents
paramètres ainsi qu’à la nature du détecteur utilisé.
Nota :
ICP-AES : Inductively Coupled Plasma Atomic Emission Spectrometry.
ICP-MS : Inductively Coupled Plasma Mass Spectrometry.
AAS : Atomic Absorption Spectrometry.
4. Nouvelles tendances
et nouveaux développements
Malgré le grand nombre de travaux menés et de projets
financés dans le domaine des biosorbants et des biocapteurs
pour l’analyse de l’eau, et bien que ceux-ci présentent de mul-
tiples avantages, très peu de systèmes ont à ce jour été
commercialisés, contrairement aux bioessais. La plupart des
biocapteurs commerciaux sont d’ailleurs versatiles et sont
dotés d’une configuration adaptable à des applications à des
domaines variés comme l’environnement, l’analyse biologique
ou médicale [72].
Les principales limitations des supports d’immunoaffinité
concernent, d’une part la production des anticorps et d’autre
part la faible capacité de traitement des supports particulaires.
La production d’anticorps capables de reconnaître les petites
molécules est laborieuse, coûteuse, et parfois infructueuse. La
taille importante des anticorps empêche par ailleurs le gref-
fage d’un nombre élevé d’entités par unité de surface de sor-
bant. Cependant, les progrès récents observés dans le
domaine de l’ingénierie des anticorps permettent à présent
l’utilisation de fragments synthétiques d’anticorps
(aptamères), à l’origine d’une nette amélioration des perfor-
mances des supports d’immunoaffinité [73]. Par ailleurs, le
développement de nouveaux types de supports, de type
monolithiques, est en pleine expansion. Il s’agit de matériaux
à haute surface spécifique, facilement fonctionnalisables, dont
la synthèse peut être directement réalisée dans des colonnes,
des capillaires d’électrophorèse ou des systèmes micro-
fluidiques miniaturisés. La surface spécifique particulièrement
élevée de ces matériaux autorise une extraction ultrarapide
des échantillons [74].
Contrairement aux biocapteurs et aux supports d’immunoaf-
finité, les biosorbants à base de micro-organismes ne sont
applicables qu’à l’analyse d’espèces inorganiques, en nombre
beaucoup plus limité que les molécules organiques rejetées
dans l’environnement. La restriction du marché constitue cer-
tainement le principal frein actuel à leur développement
commercial.
Dans le domaine des biocapteurs, d’importants efforts
restent encore à réaliser pour l’obtention d’outils sélectifs,
robustes, rapides et sensibles utilisables sur le terrain. Les
limitations des systèmes proposés proviennent pour une part

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 INNOVATION
de l’élément biologique. Les développements en cours
concernent l’amélioration de leur sensibilité, leur sélectivité et
leur stabilité par ingénierie génétique [41] [75] [76]. Les pro-
grès récents réalisés dans ce domaine laissent ainsi entrevoir
la possibilité de construire des batteries de micro-organismes
ou d’enzymes qui seront disposés sur une même plate-forme
pour une détection simultanée multi-polluants. En parallèle, le
développement de nouveaux récepteurs biomimétiques tels
que les polymères à empreinte moléculaire (MIP) ou les apta-
mères (peptides synthétiques) est en pleine expansion pour
pallier la fragilité des biorécepteurs naturels [77] [78].
Des méthodes performantes d’immobilisation du biorécep-
teur sur le transducteur devront être également développées
afin d’améliorer la sensibilité et la robustesse des biocapteurs.
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L’exploration de nouveaux matériaux, incluant en particulier
des nanoparticules d’or, des nanotubes de carbone ou des
quantums dots est une voie extrêmement prometteuse [79]
[80].
Des progrès essentiels ont enfin été réalisés ces dernières
années en matière de miniaturisation des transducteurs
(nanoélectrodes, nanoguides d’onde, BioMEMs) et vont se
poursuivre, permettant de réduire de manière importante la
quantité d’entité biologique nécessaire à la réalisation du bio-
capteur, mais également l’intégration dans des laboratoires
sur puces [81] [82]. Des progrès dans les domaines de la
numérisation et de la transmission des données ainsi que de
leur traitement permettent à présent la réalisation de microar-
rays pour la multidétection de polluants.
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